9/18/2020
1
CÁC PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN
CỨU PROTEIN/ ENZYME
Chƣơng 3
Mục đích
•Để làm gì?
•Số lượng bao nhiêu?
•Độ tinh sạch như thế nào?
Đối tƣợng
•Thu nhận từ đối tượng nào?
• Đối tượng đó như thế nào?
•Có thỏa mãn được “mục đích” không?
Xây dựng quy trình
• Cần những nhóm phương pháp?
•Các phương pháp có tính khả thi không?
•Nhóm phương pháp phù hợp nhất là gì?
9/18/2020
2
Tách chiết và tinh sạch protein/ enzyme
• Phá tế bào
• Loại bỏ tạp chất
•Phân tách protein/ enzyme
• Bảo quản protein/ enzyme
Sản xuất protein/ enzyme tái tổ hợp
•Tách dòng
• Biểu hiện và tinh sạch
Cải biến protein/ enzyme
Phân tích cấu trúc, dự đoán chức năng
Các nội dung chính trong nghiên cứu protein/ enzyme
Tách chiết và tinh sạch protein/ enzyme
Protein nội bào Protein ngoại bào
Định tính và định
lượng
Phá vỡ tế bào Loại bỏ tạp chất
Bảo quản
Tinh sạch
9/18/2020
3
Protein ngoại bào (Extracellular proteins)
Những protein được tổng hợp trong tế bào sau đó tiết ra ngoài môi
trường ngoại bào để thực hiện các chức năng sinh học của tế bào và
cơ thể:
•Protein tham gia truyền tín hiệu ngoại bào: hormone, cytokine,
chemokine
•Các enzyme tiêu hóa: trypsin, pepsin
•Protease ngoại bào: Cathesin
•Kháng thể dịch thể
Trypsin (EC3.4.21.4) và Chymotrypsine (EC3.4.21.1)
9/18/2020
4
•Trypsin và chymotrypsin là 02 enzyme phổ biến của hệ tiêu hóa, sinh ra từ
tuyến tụy sau đó tiết vào dịch ruột non.
•Trypsin thuộc nhóm serine protease, nó thường cắt các chuỗi peptide tại vị trí
cacboxyl của lysine hoặc arginine (ngoại trừ trường hợp sau amino acid này là
proline).
•Chymotrypsin thường cắt các liên kết peptide tại vị trí cacboxyl của một số
amino acid kị nước có kích thước lớn như tyrosine, triptophan, phenylalanine
Pepsin (EC3.4.23.1)
•Pepsin thuộc nhóm aspartate protease, sinh ra ở trong dạ dày. Cùng với
Trypsin và Chymotrypsin là 03 enzyme thuộc nhóm phân giải protein được tìm
thấy dưới dạng tinh thể trong hệ tiêu hóa.
•Pepsin thường cắt hiệu quả đối với các liên kết peptide tạo ra giữa Amino acid
kị nước và Amino acid thơm như tyrosine, triptophan, phenylalanine.
9/18/2020
5