CÔNG NGH GENEỆ
(GENETICS ENGENEERING)
Nguy n Vũ Phongễ
Ch ng IIươ
QUY TRÌNH TI N HÀNHẾ
•B c 1: Nuôi t bào ch và t ướ ế ủ ế
bào cho
•B c 2: Tách DNA plasmind và ướ
DNA t bào choế
•B c 3: C t DNA plasmid và ướ ắ
DNA m c tiêu ụ
•B c 4: N i 2 lo i DNA b ng ướ ố ạ ằ
enyme n i t o DNA tái t h p ố ạ ổ ợ
hoàn ch nhỉ
•B c 5: Chuy n DNA tái t h p ướ ể ổ ợ
vào t bào nh n (th ng là vi ế ậ ườ
khu n E.coli)ẩ
•B c 6: Ch n l c và nhân dòng ướ ọ ọ
vi khu n mang gene tái t h pẩ ổ ợ
•B c 7: Nghiên c u đi u ki n đ ướ ứ ề ệ ể
gene bi u hi n ra s n ph mể ệ ả ẩ
1. Enzyme
1.1. Restriction endonuclease enzyme (RE)
-1962: h n ch s sinh s n c a phage trong t bào vi khu nạ ế ự ả ủ ế ẩ
-H th ng h n ch - bi n đ i (restriction – modification system) giúp b o v ệ ố ạ ế ế ổ ả ệ
t bào kh i s xâm nh p c a DNA l .ế ỏ ự ậ ủ ạ
-Trình t nh n bi t: trình t 4-6 c p nu đ i x ng đ o ng c (palindrom)ự ậ ế ự ặ ố ứ ả ượ
-C t t o thành đ u so le (sticky end) hay đ u b ng (cohesive end) .ắ ạ ầ ầ ằ
1. Enzyme
1.1. Restriction
endonuclease
enzyme (RE)
-Kho ng 3000 RE v i ả ớ
230 trình t nh n bi t ự ậ ế
khác nhau.
-Quy t c đ t tênắ ặ : EcoRI
Eco: Escherichia coli
R: dòng vi khu n ẩ
I: th t RE đ c tìm ứ ự ượ
ra (I: đ u tiên)ầ
1. Enzyme
1.2. Enzyme n i (Ligase)ố
- N i : hình thành c u phosphodiesterố ầ
AATTC
G
G
CTTAA
Ligase
G
CTTAA
AATTC
G
EcoRI
EcoRI
GAATTC
CTTAAG
GAATTC
CTTAAG
G
CTTAA
AATTC
G