Dengue Virus Real-time RT-PCR

Tài liệu này mô tả quy trình xét nghiệm Real-time RT-PCR để phát hiện virus Dengue, bao gồm mục đích, nguyên lý, chuẩn bị, các bước tiến hành và nhận định kết quả. Quy trình này được thiết kế để xác định sự hiện diện của RNA đặc trưng của virus Dengue trong mẫu huyết thanh hoặc huyết tương của người bệnh, sử dụng kỹ thuật Real-time RT-PCR với các cặp mồi và probe đặc hiệu.

Quy trình xét nghiệm Real-time RT-PCR virus Dengue hướng đến việc cung cấp một phương pháp chính xác và hiệu quả để phát hiện sớm virus Dengue trong các mẫu bệnh phẩm, hỗ trợ chẩn đoán và điều trị bệnh kịp thời.

Quy trình xét nghiệm Real-time RT-PCR virus Dengue bao gồm các bước sau:

1. **Chuẩn bị:** Đảm bảo nhân viên xét nghiệm có trình độ chuyên môn phù hợp và chuẩn bị đầy đủ trang thiết bị, hóa chất, sinh phẩm và vật tư tiêu hao cần thiết. Đặc biệt chú ý đến việc chuẩn bị Master Mix, kit tách RNA, primer và probe đặc hiệu cho virus Dengue.
2. **Lấy bệnh phẩm:** Bệnh phẩm có thể là huyết thanh, huyết tương hoặc máu toàn phần. Việc lấy bệnh phẩm phải tuân thủ đúng quy định của chuyên ngành Vi sinh.
3. **Tách chiết RNA:** Tiến hành tách chiết RNA tổng số từ bệnh phẩm đã lấy.
4. **Thực hiện Real-time RT-PCR:** Chuẩn bị phản ứng Real-time RT-PCR bằng cách thêm mẫu RNA, chứng dương và chứng âm vào tube qPCR. Cài đặt chương trình và vị trí mẫu trên máy real-time PCR, sau đó khởi động máy để thực hiện phản ứng.
5. **Nhận định kết quả:** Đọc kết quả ở bước sóng 530 (kênh màu FAM). Kết quả dương tính khi tín hiệu xuất hiện dưới 38 chu kỳ. Nếu tín hiệu xuất hiện trong khoảng 38-45 chu kỳ, cần chạy lại mẫu. Nếu kết quả vẫn nằm trong khoảng này, kết luận là dưới giới hạn phát hiện.
6. **Lưu ý và xử trí:** Đọc kỹ hướng dẫn trước khi thực hiện. Bảo quản kit theo đúng hướng dẫn của nhà sản xuất. Khu vực tách RNA và mix phản ứng qPCR cần được bố trí biệt lập và khử trùng thường xuyên.