259
Định danh vi sinh vật bằng kỹ thuật PCR lồng
đa tác nhân
I. MỤC ĐÍCH VÀ NGUYÊN LÝ
1. Mục đích
Xác định sự có m t c a một số căn nguyên vi sinh vật thường g p trực tiếp từ
các bệnh phẩm lâm sàng.
2. Nguyên lý
Dựa trên nguyên lý c a kỹ thuật PCR lồng đa mồi.
II. CHUẨN BỊ
1. Người thực hiện
- Người thực hiện: Nhân viên xét nghiệm đã được đào tạo và có chứng chỉ
ho c chứng nhận v chuyên ngành Vi sinh (và/ho c sinh học phân tử/ sinh
học/công nghệ sinh học).
- Người nhận định và phê duyệt kết quả: Người thực hiện có trình độ đại
học ho c sau đại học v chuyên ngành Vi sinh (và/ho c sinh học phân tử/ sinh
học/công nghệ sinh học).
2. Phương tiện, hóa chất (Ví dụ hoặc tương đương)
Phương tiện, hóa chất như ví dụ dưới đây ho c tương đương.
2.1. Trang thiết bị
- T an toàn sinh học cấp 2
- Hệ thống FilmArray phần m m
- FilmArray Pouch Loading Station
- T lạnh 20C - 80C
- T âm sâu (-200C ho c -700C)
- Micropipette
2.2. Dụng cụ, hóa chất và vật tư tiêu hao (bao gồm nội kiểm, ngoại kiểm)
STT
Chi phí hóa chất, vật tư tiêu hao
Đơn vị
1
Bông
kg
2
Cồn
ml
3
Bơm kim tiêm
Cái
4
Panh
Cái
5
Khay đựng bệnh phẩm
Cái
6
Hộp vận chuyển bệnh phẩm
Test
260
7
Tube đựng bệnh phẩm
Cái
8
Găng không có bột
Cái
9
Sinh phẩm chẩn đoán
Test
10
Khấu hao sinh phẩm cho chạy chứng và kiểm tra chất
lượng
Test
11
Môi trường vận chuyển mẫu
Ống
12
Đầu côn 10 µl có lọc
Cái
13
Đầu côn 30 µl
Cái
14
Đầu côn 200 µl có lọc
Cái
15
Đầu côn 1 ml có lọc
Cái
16
Giấy thấm
Cuộn
17
Giấy xét nghiệm
Tờ
18
Sổ lưu kết quả xét nghiệm
Tờ
19
Bút viết kính
Cái
20
Bút bi
Cái
21
Mũ
Cái
22
Khẩu trang
Cái
23
Găng tay
Đôi
24
Găng tay xử lý dụng cụ
Đôi
25
Quần áo bảo hộ
Bộ
26
Dung dịch xà phòng rửa tay
ml
27
Cồn sát trùng tay nhanh
ml
28
Dung dịch khử trùng
ml
29
Khăn lau tay
cái
30
Ngoại kiểm (EQAS) (nếu có)*
* Ghi chú:
Chi phí ngoại kiểm cho quy trình kỹ thuật được tính cụ thể theo Chương trình
ngoại kiểm (EQAS) là 1/50 tổng chi phí dụng cụ, hóa chất, vật tư tiêu hao (với
số lần ngoại kiểm trung bình 3 lần/1 năm).
3. Bệnh phẩm
Phân, dịch tỵ hầu, dịch não tu .
4. Phiếu xét nghiệm
Đi n đầy đ thông tin theo mẫu phiếu yêu cầu
261
III. CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH
Các bước tiến hành thực hiện theo phương tiện, hóa chất được ví dụ trên.
1. Lấy bệnh phẩm
2. Tiến hành kỹ thuật
2.1. Bước 1: Chuẩn bị túi hóa chất
- Cho túi hóa chất vào trong trạm chuẩn bị mẫu
- Đ t lọ để tiêm mẫu bệnh phẩm (màu đỏ) vào giếng màu đỏ
- Đ t lọ chứa dung dịch hòa tan hóa chất (màu xanh) vào giếng màu xanh
2.2. Bước 2: Hòa tan hóa chất
- Xoáy để m lọ chứa dung dịch hòa tan hóa chất
- Tiêm vào ống chứa dịch hòa tan c a túi hóa chất
- Đợi tới khi hóa chất hòa tan trong tất cả các ống thì rút kim ra trả v lọ
đựng dung dịch ban đầu.
2 3. Bước 3: Trộn mẫu bệnh phẩm vào túi hóa chất
- Thêm toàn bộ ống dung dịch đệm vào lọ để tiêm mẫu
- Dùng pipet chuyển mẫu bệnh phẩm vào trong lọ này
- Nắp ch t, bỏ ra khỏi giếng và trộn bằng cách lắc lên 3 lần
- Đ t lại vị trí giếng màu đỏ
2.4. Bước 4: Nạp mẫu bệnh phẩm
- Xoay vòng m nắp kim c a lọ tiêm mẫu
- Tiêm toàn bộ lọ vào giếng chuẩn đầu tiên
- Đẩy mạnh toàn bộ dung dịch vào trong túi hóa chất
2.5. Bước 5: Bắt đầu chạy FilmArray
IV. NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ
Phần m m tự động m bản báo cáo kết quả khi xét nghiệm hoàn tất.
V. NHỮNG SAI SÓT VÀ XỬ TRÍ
- Trong trường hợp không có sản phẩm PCR, cần phải kiểm tra lại quá
trình tách chiết RNA tổng số, chất lượng primers và master mix, và thực hiện
lại toàn bộ xét nghiệm.