238
Echinococcus granulosus (Sán dây chó)
Ab miễn dịch bán tự động
I. MỤC ĐÍCH VÀ NGUYÊN LÝ
1. Mục đích
Phát hiện kháng thể IgG kháng với Echinococcus granulosus có trong mẫu
huyết thanh.
2. Nguyên lý
Phát hiện kháng thể IgG kháng với Echinococcus granulosus có trong mẫu
huyết thanh bằng kỹ thuật miễn dịch gắn men (ELISA).
II. CHUẨN BỊ
1. Người thực hiện
- Người thực hiện: Nhân viên xét nghiệm đã được đào tạo và có chứng chỉ
ho c chứng nhận v chuyên ngành Vi sinh/Ký sinh trùng.
- Người nhận định và phê duyệt kết quả: Người thực hiện có trình độ đại
học ho c sau đại học v chuyên ngành Vi sinh/Ký sinh trùng.
2. Phương tiện, hóa chất (Ví dụ hoặc tương đương)
2.1. Trang thiết bị
- Máy đọc ELISA.
- Máy ly tâm
- T lạnh 2ºC -8ºC
- Micropipette và Đầu côn10 µl, 200 µl, 1000 µl.
- Giá đựng ống máu
- Ống nghiệm.
- Ống đong chia vạch.
- Giấy thấm.
2.2. Dụng cụ, hóa chất và vật tư tiêu hao (bao gồm nội kiểm, ngoại kiểm)
STT
Chi phí hóa chất, vật tư tiêu hao
Đơn vị
1
Giấy xét nghiệm
Tờ
2
Tube lấy bệnh phẩm
Cái
3
Mũ
Cái
4
Khẩu trang
Cái
5
Găng tay
Đôi
6
Găng tay xử lý dụng cụ
Đôi
239
7
Quần áo bảo hộ
Bộ
8
Bút viết kính
Cái
9
Bút bi
Cái
10
Sổ lưu kết quả xét nghiệm
Quyển
11
Dung dịch rửa tay
ml
12
Khăn lau tay
Cái
13
Panh
Cái
14
Khay đựng bệnh phẩm
Cái
15
Hộp vận chuyển bệnh phẩm
Cái
16
Đầu côn 10 ml
Cái
17
Đầu côn 200 ml
Cái
18
Đầu côn 1000 ml
Cái
19
Pipet nhựa
Cái
20
Sinh phẩm chẩn đoán (QC)
Test
21
Sinh phẩm chẩn đoán
Test
22
Ngoại kiểm (EQAS) (nếu thực hiện) *
* Ghi chú:
- Chi phí ngoại kiểm cho quy trình kỹ thuật được tính cụ thể theo Chương trình
ngoại kiểm (EQAS) là 1/200 tổng chi phí dụng cụ, hóa chất, vật tư tiêu hao (với
số lần ngoại kiểm trung bình 2 lần/1 năm).
3.Bệnh phẩm
Huyết thanh
4.Phiếu xét nghiệm
Đi n đầy đ thông tin theo mẫu phiếu yêu cầu
III. Các bước tiến hành
1. Lấy bệnh phẩm
Theo đúng quy định c a chuyên ngành Vi sinh ( xem Phụ lục).
2. Tiến hành kỹ thuật
Bộ sinh phẩm chẩn đoán c a Scimedx (USA)
2.1. Lấy bộ kít ra khỏi t lạnh, lấy đ số giếng cần làm.
2.2. Nhỏ chứng dương, chứng âm và mẫu huyết thanh đã pha loãng 1/64 vào
mỗi giếng.
2.3. nhiệt độ 15-25°C trong 10 phút
240
2.4. Rửa với dung dịch rửa đã pha loãng, lắc sạch nước.
2.5. Thêm Conjugate vào mỗi giếng, nhiệt độ phòng trong 5 phút.
2.6. Rửa với dung dịch rửa đã pha loãng, lắc sạch nước.
2.7. Nhỏ TMB vào mỗi giếng nhiệt độ phòng trong 5 phút.
2.8. Nhỏ Stop Solution.
IV. NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ
1. Đọc kết quả
Cài đ t bước sóng máy đọc là 450nm/650nm-620nm.
Đọc kết quả theo hướng dẫn c a bộ kít.
2. Kiểm tra chất lượng
- Kiểm tra chất lượng cho phép đánh giá sự ổn định c a bộ kít. Bộ kít
không được sử dụng nếu bất kỳ chứng dương ho c chứng âm rơi ra khỏi
ngưỡng quy định.
V. NHỮNG SAI SÓT VÀ XỬ TRÍ
Rửa kỹ các giếng thử. Sau khi rửa vỗ nhẹ thanh nhựa vào giấy thấm cho ráo
nước và làm tiếp các bước tiếp theo ngay không để các giếng bị khô.