LỜI CAM ĐOAN
Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Các số liệu, kết
quả nêu trong luận văn là trung thực và chƣa từng đƣợc ai công bố trong bất kỳ
công trình nào khác.
Tôi xin cam đoan rằng mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn này đã
đƣợc cảm ơn và các thông tin trích dẫn trong Luận văn đã đƣợc chỉ rõ nguồn gốc.
Sinh viên thực hiện luận văn
Trần Chi Phúc
LỜI CÁM ƠN
Đầu tiên, con xin gửi lời cám ơn sâu sắc đến cha mẹ và gia đình đã luôn bên
cạnh, cổ vũ, động viên và giúp đỡ con mỗi khi gặp khó khăn trong suốt quá trình
quá trình học tập và thực hiện Đồ án.
Em xin cám ơn thầy, cô thuộc khoa CÔNG NGHỆ SINH HỌC – THỰC
PHẨM – MÔI TRƢỜNG, Trƣờng Đại Học Công Nghệ TP. Hồ Chí Minh đã tận
tình chỉ dạy và truyền đạt cho em đầy rất kiến thức trong suốt quá trình học tập tại
trƣờng.
Đặc biêt, em chân thành cám ơn cô Ts. Nguyễn Hoài Hƣơng đã tận tình giúp
đỡ, hƣớng dẫn và truyền đạt cho em rất nhiều kiến thức trong suốt thời gian nghiên
cứu và thực hiện đồ án.
Em cũng xin cám ơn quý thầy, cô phụ trách Phòng thí nghiệm Công nghệ Sinh
học, Khoa CÔNG NGHỆ SINH HỌC – THỰC PHẨM – MÔI TRƢƠNG, Trƣờng
Đại Học Công Nghệ TP. Hồ Chí Minh đã tạo mọi điều kiện tốt nhất giúp cho em
thực hiện và hoàn thành Đồ án tốt nghiệp của mình.
Tôi xin cám ơn sự giúp đỡ rất nhiệt tình của các cộng sự và tất cả các bạn làm
việc tại phòng thí nghiệm Công nghệ sinh học đã giúp đỡ cho tôi trong suốt quá
trình thực hiện Đồ án tốt nghiệp của mình.
TP. Hồ Chi Minh, ngày … tháng … năm 2014.
Trần Chí Phúc
Đồ án tốt nghiệp
i
MỤC LỤC
MỤC LỤC ................................................................................................................... i
DANH MỤC VIẾT TẮT ........................................................................................ iii
DANH MỤC BẢNG ................................................................................................. iv
DANH MỤC HÌNH ẢNH ......................................................................................... v
MỞ ĐẦU .................................................................................................................... 1
CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN ..................................................................................... 3
1.1. Độc tố nấm mốc ............................................................................................ 3
1.2. Độc tố aflatoxin ............................................................................................ 3
1.2.1. Lịch sử nghiên cứu ................................................................................. 3
1.2.2. Tính chất vật lý và phân loại .................................................................. 4
1.2.3. Sự tạo thành aflatoxin do nấm mốc ...................................................... 5
1.2.4. Cơ chế gây độc của aflatoxin ................................................................. 7
1.2.5. Độc tính của aflatoxin ............................................................................ 8
1.2.6. Giới hạn mức cho phép độc tố aflatoxin ............................................. 10
1.2.7. Tình hình nhiễm độc aflatoxin ............................................................ 11
1.2.8. Phương pháp phát hiện aflatoxin ........................................................ 12
1.3. Phƣơng pháp khử nhiễm aflatoxin ........................................................... 15
1.3.1. Phương pháp vật lý học ........................................................................ 15
1.3.2. Phương pháp hóa học .......................................................................... 17
1.3.3. Phương pháp sinh học ......................................................................... 18
CHƢƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ....................... 20
2.1. Thời gian – địa điểm nghiên cứu .............................................................. 20
2.2. Vật liệu - Thiết bị - Hóa chất ..................................................................... 20
2.2.1. Vật liệu .................................................................................................. 20
2.2.2. Thiết bị và dụng cụ ............................................................................... 20
2.2.3. Môi trường – Hóa chất ......................................................................... 20
2.3. Phƣơng pháp nghiên cứu .......................................................................... 22
Đồ án tốt nghiệp
ii
2.3.1. Phương pháp luận ................................................................................ 22
2.3.2. Bố trí thí nghiệm ................................................................................... 23
2.3.3. Một số phương pháp khảo sát sinh hóa vi khuẩn ............................... 34
CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN ......................................................... 40
3.1. Phân lập các chủng khuẩn có hoạt tính kháng nấm theo cách tiếp cận
thứ nhất ................................................................................................................ 40
3.1.1. Khảo sát khả năng đối kháng các chủng khuẩn phân lập với nấm
bằng phương pháp đồng nuôi cấy trên môi trường hỗn hợp ........................ 40
3.1.2. Khảo sát khả năng đối kháng với nấm của dịch ly tâm canh trường
nuôi cấy vi khuẩn trên môi trường hỗn hợp .................................................. 42
3.2. Phân lập các chủng khuẩn có hoạt tính kháng nấm theo cách tiếp cận
thứ hai. ................................................................................................................. 43
3.2.1. Khảo sát khả năng đối kháng các chủng khuẩn phân lập với nấm
mốc trên môi trường PDA ............................................................................... 47
3.2.2. Khảo sát khả năng ức chế khả năng sinh aflatoxin của các chủng
khuẩn phân lập với nấm trên môi trường CCA ............................................. 48
3.3. Khảo sát sinh hóa của chủng khuẩn phân lập đƣợc ............................... 50
3.3.1. Nhuộm bào tử ....................................................................................... 50
3.3.2. Thử nghiệm Simmon citrate ................................................................ 51
3.3.3. Thử nghiệm catalase ............................................................................ 52
3.3.4. Thử nghiệm protease ............................................................................ 52
3.3.5. Thử nghiệm chitinase ........................................................................... 53
3.3.6. Thử nghiệm lên men carbohydrate ..................................................... 53
CHƢƠNG 4: KẾT LUẬN ĐỀ NGHỊ .................................................................... 57
4.1. Kết luận ....................................................................................................... 57
4.2. Đề nghị ........................................................................................................ 57
TÀI LIỆU THAM KHẢO ...................................................................................... 58
PHỤ LỤC
Đồ án tốt nghiệp
iii
DANH MỤC VIẾT TĂT
A.O.A.C: Association of Analytical Communities
CCA: coconut cream agar
Ctv: cộng tác viên
ELISA: Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay
FDA: Food and Drug Administration
HPTLC : high ferformane thin layer chromatography TLC
NA: Nutrient agar
NB: Nutrient broth
PDA: Potato dextrose agar
PDB: Potato dextrose broth
ppb: parts per billion
TFA: Tryfloacetic acid
TLC: Thin layer chromatographi
UV: Ultraviolet