ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI
TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN
---------------------
NGUYỄN THỊ KIM THU
NGHIÊN CỨU TINH SẠCH
VÀ ĐÁNH GIÁ TÍNH CHẤT CỦA XYLANASE
TỪ CHỦNG Aspergillus niger TÁI TỔ HỢP
LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC
Hà Nội - Năm 2020
ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI
TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN
---------------------
NGUYỄN THỊ KIM THU
NGHIÊN CỨU TINH SẠCH
VÀ ĐÁNH GIÁ TÍNH CHẤT CỦA XYLANASE
TỪ CHỦNG Aspergillus niger TÁI TỔ HỢP
Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm
Mã số: 8420101.14
LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC
NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: TS. Đỗ Thị Tuyên
PGS.TS Nguyễn Quang Huy
Hà Nội – Năm 2020
LỜI CẢM ƠN
Lời đầu tiên, em xin trân thành cảm ơn TS. Đỗ Thị Tuyên, Trưởng phòng
CNSH Enzyme, Viện Công nghệ sinh học đã định hướng ý tưởng nghiên cứu, lên
kế hoạch, tận tình theo sát hướng dẫn thí nghiệm, thường xuyên chỉ dạy kiến thưc
chuyên môn và tạo điều kiện tốt nhất để em có thể học tập và thực hiện luận văn tại
phòng Công nghệ sinh học Enzym – Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa
học và công nghệ Việt Nam.
Đặc biệt, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Nguyễn Quang Huy.
Người thầy, không những chỉ bảo tận tình cho em về mặt kiến thức, mà thầy còn
cho em những lời khuyên bổ ích và định hướng giúp đỡ cho em trong suốt quá trình
làm luận văn.
Em xin chân thành cảm ơn các anh chị phòng Công nghệ sinh học enzyme –
Viện Công nghệ sinh học đã tạo điều kiện thuận lợi và tận tình hướng dẫn em trong
quá trình học tập, nghiên cứu.
Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến ba mẹ, người thân trong gia
đình, bạn bè đã luôn bên cạnh, động viên và tiếp thêm niềm tin, động lực cho em để
em vững bước và hoàn thành luận văn.
Em xin chân thành cảm ơn!
Hà Nội, ngày 3 tháng 12 năm 2019
Học viên
Nguyễn Thị Kim Thu
MỤC LỤC
MỞ ĐẦU .................................................................................................................... 1
CHƢƠNG 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU ................................................................. 3
1.1. Sơ lược về enzyme xylanase……………………………………………………………………3
1.1.1. Định nghĩa .............................................................................................. 3
1.1.2. Phân loại ................................................................................................. 4
1.1.3. Cấu trúc .................................................................................................. 4
1.1.4. Đặc điểm cơ chất, cơ chế xúc tác ........................................................... 6
1.2. Ứng dụng của enzyme xylanase ........................................................................ 10
1.2.1. Các chế phẩm xylanase trên thị trường quốc tế .................................. 10
1.2.2. Trong công nghiệp sản xuất thức ăn gia súc ....................................... 11
1.2.3. Trong công nghiệp thực phẩm ............................................................. 11
1.2.4. Trong công nghiệp giấy và bột giấy .................................................... 12
1.2.5. Các ứng dụng khác .............................................................................. 13
1.3. Tình hình nghiên cứu và sản xuất xylanase.................................................... 13
1.3.1. Trên thế giới ........................................................................................ 13
1.3.2. Tại Việt Nam ....................................................................................... 18
CHƢƠNG II. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ................................................ 20
2.1. Nguyên vật liệu và thiết bị ............................................................................. 20
2.1.1. Chủng giống ........................................................................................ 20
2.1.2. Hóa chất ............................................................................................... 20
2.1.3. Môi trường ........................................................................................... 22
2.1.4. Thiết bị thí nghiệm .............................................................................. 23
2.2. Phương pháp ................................................................................................... 24
2.2.1. Nuôi cấy sinh tổng hợp enzym xylanase ............................................. 24
2.2.2. Xác định hoạt tính enzym xylanase ..................................................... 24
2.2.3. Xác định hàm lượng protein ................................................................ 26
2.2.4. Tinh sạch xylanase .............................................................................. 27
2.2.5. Điện di SDS-PAGE ............................................................................. 30
2.2.6. Xác định tính chất lý hóa của xylanase ............................................... 31
2.2.7. Xử lý số liệu ........................................................................................ 34
CHƢƠNG III. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN ..................................................... 36
3.1. Nuôi biểu hiện và tinh sạch enzyme xylanase từ chủng tái tổ hợp sinh tổng
hợp xylanase .......................................................................................................... 36
3.2. Đánh giá tính chất lý hóa của enzyme xylanase tái tổ hợp ........................... 39
3.2.1. Nhiệt độ tối ưu và độ bền nhiệt độ ...................................................... 39
3.2.2. Ảnh hưởng của pH đến hoạt tính và độ bền pH .................................. 40
3.2.3. Dung môi hữu cơ ................................................................................. 41
3.2.4. Chất tẩy rửa ......................................................................................... 42
3.2.5. Ion kim loại .......................................................................................... 43
3.3. Khả năng thủy phân arabinoxylan của enzyme tự nhiên và tái tổ hợp ......... 43
3.3.1. Tinh sạch enzyme tự nhiên .................................................................. 44
3.3.2. Khả năng thủy phân arabinoxylan của enzyme tự nhiên và tái tổ hợp 45
3.3.3. Khả năng phân giải cơ chất của xylanase tự nhiên và tái tổ hợp ........ 46
KẾT LUẬN .............................................................................................................. 50
TÀI LIỆU THAM KHẢO ...................................................................................... 52
CÁC BÀI BÁO ĐÃ CÔNG BỐ .............................................................................. 61
