BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
TRƯỜNG ĐẠI HỌC KỸ THUẬT CÔNG NGHỆ TP. HCM
ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP
PHÂN LẬP VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH SINH HỌC
CỦA PHOTORHABDUS SPP. VÀ XENORHABDUS
SPP. TỪ HETERORHABDITIS INDICA VÀ
STEINERNEMA GUANGDONGENSE
Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC
Giảng viên hướng dẫn : TS. NGUYỄN HOÀI HƯƠNG
Sinh viên thực hiện: PHẠM THỊ HƯƠNG
MSSV: 0851110063 Lớp: 08DSH4
TP. Hồ Chí Minh, 2012
ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP
1
MỤC LỤC
CHƯƠNG I : GIỚI THIỆU………………………………………………………………....1
1.1. Tính cấp thiết của đề tài .............................................................................................. 8
1.2. Mục đích của nghiên cứu ............................................................................................ 9
1.3. Nhiệm vụ của nghiên cứu ........................................................................................... 9
1.4. Các kết quả đạt được của đề tài ................................................................................... 9
CHƯƠNG II : TỔNG QUAN .............................................................................................. 11
2.1. Giới thiệu về tuyến trùng ký sinh côn trùng (EPN) .................................................. 11
2.1.1. Khái niệm EPN ................................................................................................... 11
2.1.2. Vai trò và ưu thế của EPN .................................................................................. 11
2.2. Khái quát về tuyến trùng ký sinh côn trùng .............................................................. 12
2.2.1. Phân loại ............................................................................................................ 12
2.3. Khái quát về vi khuẩn cộng sinh Photorhabdus và Xenorhabdus ............................ 14
2.3.1. Một số đặc điểm của họ Enterobacteriaceae: .................................................... 14
2.3.2. Phân loại Photorhabdus và Xenorhabdus .......................................................... 15
2.3.3. Một số đặc điểm phân biệt cơ bản ...................................................................... 16
2.3.4. Một số yếu tố độc lực.......................................................................................... 25
2.4. Mối quan hệ cộng sinh .............................................................................................. 34
2.4.1. Vai trò của tuyến trùng ....................................................................................... 34
2.4.2. Vai trò của vi khuẩn cộng sinh ........................................................................... 35
2.4.3. Tổng quát mối quan hệ trong tổ hợp tuyến trùng – vi khuẩn ............................. 35
2.5. Khái quát về các loài côn trùng bị EPN và vi khuẩn tiêu diệt .................................. 38
2.5.1. Đặc trưng côn trùng bị EPN tiêu diệt ................................................................ 39
2.5.2. Các loài côn trùng bị EPN tiêu diệt ................................................................... 39
2.5.3. Các loài côn trùng bị vi khuẩn Xenorhabdus tiêu diệt ...................................... 40
2.6. Tình hình nghiên cứu Photorhabdus và Xenorhabdus trên thế giới và Việt Nam .... 41
2.6.1. Tình hình nghiên cứu trên thế giới ..................................................................... 42
2.6.2. Tình hình nghiên cứu ở Việt Nam ....................................................................... 45
CHƯƠNG III: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .... Error! Bookmark not
defined.
3.1. Thời gian và địa điểm................................................ Error! Bookmark not defined.
ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP
2
3.1.1. Thời gian ............................................................ Error! Bookmark not defined.
3.1.2. Địa điểm ............................................................. Error! Bookmark not defined.
3.2. Vật liệu .................................................................. Error! Bookmark not defined.
3.2.1. Nguồn tuyến trùng EPN ..................................... Error! Bookmark not defined.
3.2.2. Nguồn vi sinh vật ................................................ Error! Bookmark not defined.
3.2.3. Môi trường nuôi cấy và hóa chất sử dụng .......... Error! Bookmark not defined.
3.3. Phương pháp nghiên cứu ........................................... Error! Bookmark not defined.
3.3.1. Phương pháp phân lập ....................................... Error! Bookmark not defined.
3.3.2. Hình thái ............................................................. Error! Bookmark not defined.
3.3.3. Sinh lý ................................................................. Error! Bookmark not defined.
3.3.4. Kiểm tra độ tinh khiết của giống mới phân lập . Error! Bookmark not defined.
3.3.5. Thử nghiệm sinh hóa .......................................... Error! Bookmark not defined.
3.3.6. Hoạt tính sinh học .............................................. Error! Bookmark not defined.
CHƯƠNG IV : KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN ................... Error! Bookmark not defined.
4.1. Kết quả phân lập hai chủng vi khuẩn khảo sát .......... Error! Bookmark not defined.
4.2. Hình thái khuẩn lạc ................................................... Error! Bookmark not defined.
4.2.1. Quan sát khuẩn lạc ............................................. Error! Bookmark not defined.
4.2.1. Nhuộm Gram (quan sát vi thể) ........................... Error! Bookmark not defined.
4.2.3. Nhuộm tiên mao .................................................. Error! Bookmark not defined.
4.3. Thử nghiệm sinh lý ................................................ Error! Bookmark not defined.
4.3.1. Di động ............................................................... Error! Bookmark not defined.
4.4. Kiểm tra độ tinh khiết của giống mới phân lập .... Error! Bookmark not defined.
4.5. Thử nghiệm sinh hóa ................................................. Error! Bookmark not defined.
4.5.1. Kết quả thử nghiệm catalase .............................. Error! Bookmark not defined.
4.5.2. Lên men lactose .................................................. Error! Bookmark not defined.
4.5.3. Indole .................................................................. Error! Bookmark not defined.
4.5.4. Khử nitrate.......................................................... Error! Bookmark not defined.
4.5.5. Phân giải tinh bột ............................................... Error! Bookmark not defined.
4.5.6. Sinh hơi H2S ....................................................... Error! Bookmark not defined.
4.5.7. Thử nghiệm phân giải lipase .............................. Error! Bookmark not defined.
4.5.8. Thử nghiệm phân giải protease .......................... Error! Bookmark not defined.
4.6. Khả năng đối kháng với vi sinh vật gây hại của hai chủng vi khuẩn khảo sát ... Error!
Bookmark not defined.
ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP
3
4.6.1. Kết quả đối kháng với vi khuẩn gây bệnh .......... Error! Bookmark not defined.
4.6.2. Kết quả đối kháng với nấm gây bệnh ................. Error! Bookmark not defined.
CHƯƠNG V : KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ ..................................................................... 47
5.1. Kết luận ..................................................................................................................... 47
5.2. Kiến nghị…. .......................................................................................................... 47
TÀI LIỆU THAM KHẢO..............................................................................................90
ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP
4
DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT
BSL: Bướm sáp lớn
LB: Luria-Bertani
LPS: Lipopolysaccharide
EPN: Entomopathogenic Nematodes
HBHL: Hydroxybutanoyl homoserine lactone
IJs: Infective Juveniles
NBTA: Nutrient bromothymol blue agar
PDA: Potato glucose agar
QS: Quorum Sensing
TSA: Tryptone Soya Agar
VKCS: Vi khuẩn cộng sinh