10/19/2012
1
Chƣơng 5
Giải mã trình tự toàn bộ
bộ gen
TRƢỜNG ĐẠI HỌC CNTP TPHCM
KHOA CNSH & KTMT
HỆ LIÊN THÔNG ĐẠI HỌC
ThS. Nguyễn Thành Luân
Email: luannt@cntp.edu.vn
Tại sao cần thiết phải giải mã toàn
bộ bộ gen?
Sự minh chứng cho việc giải mã trình tự gene
Bản hướng dẫn cho ngành sinh học về các cơ thể
sống
Khám phá mỗi gen mã hóa bởi bộ gen của 1 loài động
vật –trong việc mất đoạn trình tự gen, chỉ “đoạn gen
cần quan tâm” được giải mã
Phân biệt các dòng giống từ sự khác biệt về trình tự
gen
Khám phá các kiểu di truyền gây ra bởi các đột biến
khác nhau
Khám phá các đột biến gây ra các bệnh di truyền
10/19/2012
2
Phản ứng giải mã trình tự đƣợc
phát minh bởi Fred Sanger
Sử dụng enzyme DNA polymerase để tổng hợp 1 sợi
DNA được bổ sung cho 1 mảnh DNA mà bạn muốn
giải mã trình tự
Các phản ứng chứa 1 „điểm đích‟ để tạm dừng quá
trình tổng hợp –cung cấp 1 sản phẩm DNA với 1 kích
cỡ riêng biệt (bp)
10/19/2012
3
Giải mã trình tự Sanger
Hoạt động bằng thực hiện các phản ứng nhẹ
nhàng phá gãy 1 đoạn DNA chuẩn đã tái tạo, xúc
tác bởi enzyme DNA polymerase.
Phản ứng giải mã trình tự
10/19/2012
4
Các bƣớc cơ bản trong giải mã trình tự
฀Thêm đoạn mồi: mảnh ngắn của DNA đƣợc
kết hợp đến chỉ 1 nơi trên mẫu khuôn DNA
฀Thêm enzyme cắt DNA polymerase: có
nhiệm vụ tổng hợp 1 sợi DNA mới
฀Thêm các nhóm bazơ nitric (4 nitrogenous
bases): sẽ kết hợp chặt chẽ trong sợi mới
฀Thêm 4 nhóm dideoxynucleotide (ddNTPs–
còn đƣợc gọi là các điểm đích sẽ thỉnh
thoảng đƣợc thêm vào trong sợi DNA đã
đƣợc tổng hợp mới nhƣng sẽ kết thúc phản
ứng đó
10/19/2012
5
Sản phẩm của các phản ứng giải mã
trình tự
Phản ứng diễn ra trên 1000 lần từ sợi DNA khuôn
-Mỗi vị trí có thể có đều được đánh dấu rất nhiều lần
Chấp nhận 1 chuỗi hỗn
hợp phản ứng vào 1 gel
polyacrylamide SDS
Gel này sẽ phân chia
các đoạn DNA phân
mảnh thành các kích cỡ
khác nhau. Đoạn DNA
ngắn hơn sẽ di chuyển
xuống dƣới nhanh hơn.
฀Gel còn có khả năng
phân giải đoạn phân
mảnh khác nhau bởi 1
base riêng lẻ.