Thiết kê"cấu tru"cbiểuhiệngen
uMột cấu tru"cbiểuhiệngen cần:
uĐâ(yđu)ca"c yếu tô"đểđảm ba)o sư, biểuhiệngen đúng
upromoter phu(hợp
uCho,n ca"c tri(nh tư, tham gia điều ho(abiểuhiệngen thi"ch hợp
uGen đích pha)iđúng vê(tri(nh tư, (ta,oprotein tri(nh tư, đúng)
uĐê)ta,ođược cấu tru"cbiểuhiện cần sư) du,ng ca"cky1thuật: nhân
DNA, cắt, ghe"p nối, biến nạpgen, tinh sạch….thựchiệntrên các
plasmid trung gian trong vậtchủtrung gian
uCấu tru"cbiểuhiệnthường đượcgiư1 trong ca"cplasmid trung gian
đê) co"thê)nhân lên sô"lượng lớn
Thiết kê"cấu tru"cbiểuhiệngen
uPromoter: phô)biếnlà: 35S (CaMV) từvirus gây bệnh
khảmsúp lơ(sửdụng trong 80% cây biếnđổigen hiện
nay)
uTerminator: phô)biến la(3’nos: trình tựkếtthúc từgen
tổng hợpnopaline synthesase củaAgrobacterium
tumafeciens (80% cây trồng CNSH sửdụng)
Promoter Ter m i na t or
Vu(ng ma1ho"aprotein
Đưalên “phương tiện” chuyểngen
uGen chuyển va(o vậtchu) co"thê)nằmtrên plasmid độc lập với hê,gen
vậtchu)(vậtchu) la(sinh vậtnhân sơ), hoặc gắnlên hê,gen cu)a vậtchu)
(vậtchu) la(sinh vậtnhân chuẩn).
uPhương tiệnchuyển sư) du,ng phu,thuộc va(ophương pha"pchuyểngen:
uPlasmid chuyểngen: Ti-plasmid vớiphương pha"p du(ng Agrobacterium
tumafaciens
uHa,tnano va(ng/wolfram: phương pha"p bắngen
uVớiphương tiện la(plasmid, đê)đưa cấu tru"cbiểuhiệnplasmid cần sư)
du,ng ca"cky1thuật: nhân gen, cắtva(ghe"p nối….
Các phương pháp biến
nạpgen vào vậtchủ
Yêu cầu củaphương pháp
chuyểngen vào tếbào
uỔnđịnh trong hệgen vậtchủ
uĐoạngen chuyểnđảm bảokhông bịsắp xếp lạiđểđảm bảogen
hoạtđông tạo sảnphẩmvà tính trạng mong muốn
uĐơngiản, dễkiểmsoát
uKhông ảnh hưởng tớicác quá trình trao đổichấtthông thường
của vậtchủ