MTB (Mycobacterium tuberculosis) kháng thuốc MIC trên môi trường lỏng

Tài liệu này trình bày quy trình xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của các loại thuốc kháng lao trên môi trường lỏng, bao gồm các thuốc hàng 1, Fluoroquinolones, thuốc tiêm hàng 2 và các thuốc chống lao nhóm 5. Quy trình này nhằm mục đích xác định mức độ kháng thuốc của Mycobacterium tuberculosis (MTB) đối với các loại thuốc này.

Quy trình này dành cho những người thực hiện xét nghiệm kháng sinh đồ lao, các kỹ thuật viên xét nghiệm vi sinh, và các bác sĩ lâm sàng quan tâm đến việc xác định mức độ kháng thuốc của vi khuẩn lao.

Quy trình xác định MIC của thuốc kháng lao trên môi trường lỏng bao gồm các bước sau:

1. **Chuẩn bị:**

* **Người thực hiện:** Cần được đào tạo và có chứng chỉ chuyên ngành Vi sinh.
* **Phương tiện, hóa chất:**
* Trang thiết bị: Tủ an toàn sinh học cấp 2A, tủ ấm, tủ lạnh, tủ âm sâu, máy Vortex, máy đo độ đục, nồi hấp tiệt trùng, pipet tự động, pipet đa kênh, pipet aid, kính đảo ngược chiều ánh sáng.
* Dụng cụ, hóa chất và vật tư tiêu hao: Bộ Kit chuẩn panel 96 giếng đĩa, phoenix ID Brorth tubes, tubes nước muối + tween tubes, thang đo MacFarland, cồn 70 độ, Presept, Microshiel, dung dịch rửa dụng cụ thủy tinh, đầu côn pipet, pipette nhựa, tuýp thủy tinh trung tính đáy tròn, bi thủy tinh, tuýp lưu chủng, hộp lưu chủng, túi nilon chịu nhiệt, túi rác vàng, thùng rác, thùng vận chuyển vật liệu lây nhiễm, giá đựng tuýp, chổi rửa tuýp, chai thủy tinh trung tính, khăn lau tay, găng tay, quần áo bảo hộ, bút chì, bút dạ, bút bi, sổ lưu kết quả xét nghiệm.
* **Bệnh phẩm:** Chủng *M.tuberculosis* thuần, tuổi chủng từ 21 đến 28 ngày.
* **Phiếu xét nghiệm:** Điền đầy đủ thông tin theo mẫu yêu cầu.
2. **Các bước tiến hành:**

* Chuẩn bị đĩa môi trường.
* Chuẩn bị huyền dịch vi khuẩn.
* Cấy huyền dịch vi khuẩn vào đĩa môi trường.
3. **Diễn giải và báo cáo kết quả:**

* Đọc kết quả kháng sinh đồ vào ngày thứ 10 hoặc 14 nếu kết quả chưa rõ ràng.
* Kiểm tra giếng chứng dương (vi khuẩn mọc) và giếng chứng âm (không có vi khuẩn mọc).
* Đọc kết quả các giếng kháng sinh từ trái qua phải, từ trên xuống dưới, ghi nhận các giếng có vi khuẩn mọc.
* Kết luận kết quả MIC của mỗi loại kháng sinh, ghi nhận nồng độ thấp nhất mà vi khuẩn không mọc được. Nếu có hiện tượng "bỏ giếng", cần ghi nhận giá trị MIC phù hợp.
4. **Sai sót và xử trí:**

* Các sai sót có thể xảy ra bao gồm pha huyền dịch vi khuẩn không đúng nồng độ, bảo quản môi trường không đúng cách, nhiễm chéo trong quá trình thao tác kỹ thuật, và thực hành không an toàn. Cần tuân thủ nghiêm ngặt quy trình để tránh các sai sót này.