Bài giảng Kỹ thuật nuôi cấy tế bào động vật

Chia sẻ: Lavie Lavie | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:86

Thêm vào BST

Báo xấu

291
lượt xem 52
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Bài giảng Kỹ thuật nuôi cấy tế bào động vật của ThS. Phan Lữ Chính Nhân sau đây sẽ trang bị cho các bạn những kiến thức về hai kiểu nuôi cấy sơ cấp bao gồm nuôi cấy mảnh mô sơ cấp và nuôi cấy sơ cấp tế bào đơn, quy trình nuôi cấy mô sơ cấp.

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Bài giảng Kỹ thuật nuôi cấy tế bào động vật

Kỹ thuật nuôi cấy tế bào động vật ThS. Phan Lữ Chính Nhân
THU NHẬN MẪU MÔ CẮT NHỎ (chọn lọc mẫu mô quan tâm, cắt bỏ phần mô chết) Tách tế Cắt nhỏ Tách tế bào bào bằng (mảnh nhỏ bằng cơ học (nghiền, ép) enzym để nuôi) (ủ…) Nuôi mẫu NUÔI SƠ Trypsin Collagenas Trypsin ấm mô sơ cấp CẤP lạnh e Tái huyền Thu nhận Ly tâm Cấy chuyền phù tế bào mới Thu mảnh DÒNG TẾ mô thứ BÀO cấp
Hai kiểu nuôi cấy sơ cấp KIỂU 1: NUÔI CẤY MẢNH KIỂU 2: NUÔI CẤY SƠ CẤP MÔ SƠ CẤP TẾ BÀO ĐƠN Là việc nuôi cấy các mảnh mô Là việc nuôi cấy các tế bào đơn in vitro. Trong quá trình nuôi đƣợc tách ra từ mảnh mô. Trong cấy, các tế bào từ mảnh mô sẽ quá trình nuôi, từng mỗi tế bào phát triển lan ra từ vùng mô sẽ phát triển tăng sinh thành trung tâm. nhiều tế bào mới.
NUÔI CẤY MẢNH MÔ SƠ CẤP (mảnh mô ung thư vú)
Thu nhận tế bào đơn nhân tủy xương chuột
Nuôi cấy chọn lọc tế bào Tua (DC) từ tủy xương chuột
NUÔI CẤY SƠ CẤP HUYỀN PHÙ TẾ BÀO ĐƠN (thu từ máu cuống rốn)
Quy trình nuôi cấy sơ cấp Thu nhận mẫu Xử lí mẫu Nuôi cấy tế bào đơn: Nuôi cấy mảnh mô: Tách mô thành tế bào đơn Cố định mảnh mô Nuôi cấy
Thu nhận mẫu • Các mẫu thu nhận có thể bao gồm bất kì mô sống nào của cơ thể. • Trƣớc hết phải làm sạch mô tại vị trí lấy mẫu bằng cồn, cho mô vào dung dịch PBS, nhanh chóng chuyển về phòng thí nghiệm. • Tùy loại mẫu mô cũng nhƣ thời gian cần thiết vận chuyển về phòng thí nghiệm: có kế hoạch vận chuyển chúng trong điều kiện thích hợp.
Bảo quản mẫu
Bảo quản mẫu
Xử lí mẫu đối với nuôi cấy huyền phù tế bào đơn Các tế bào động vật trong khối mô liên kết chặt chẽ với nhau nhờ các cầu nối hình thành giữa các tế bào với nhau. Biện pháp: – (1) tác dụng một lực cơ học để bẻ gãy những cầu nối. – (2) dùng enzym để phân hủy các cầu nối nói trên.
Cắt nhuyễn Biện pháp cơ học Ép nhuyễn Tách bằng màng lọc
Phương pháp cắt nhuyễn Sử dụng lục sơ học bẻ gãy các cầu nối liên bào: dùng kéo, dao cắt nhuyễn các mảnh mô. Huyền phù vào dịch PBS, để lắng, thu dịch trong
Phương pháp ép nhuyễn Ép nhuyễn mô: dùng 2 phiến lame ép chặt mảnh mô để thu tế bào đơn đối với những mô có liên kết yếu.
Phương pháp tách bằng màng lọc Tách bằng màng lọc tế bào (Cell strainer): kích thƣớc lỗ trên màng từ 70–100 µm, chỉ cho những tế bào đơn có kích thƣớc tƣơng ứng qua màng.
Tách mô thành tế bào đơn bằng enzym • Quy trình trypsin ấm • Quy trình trypsin lạnh
Quy trình trypsin ấm
Quy trình trypsin lạnh Nếu các mảnh mô chƣa Cắt mẫu mô [2 – Thêm môi trƣờng, sục 3mm], rửa nhiều lần nhẹ nhành cho đến khi rời ra có thể thêm môi với PBS vô trùng mô rời ra trƣờng để dễ huyền phù hoặc dùng màng lọc ủ ống chứa mẫu mô Thu dịch huyền phù Thay PBS bằng trong 36,50C, trypsin 0.25% tế bào, xác định mật 20 – 30 phút độ, tiến hành nuôi Ủ trong 40C, 6- 18 giờ Loại bỏ trypsin