VECTOR – TẠO DÒNG –
THƯ VIỆN DNA
ThS. Nguyễn Thị Mỹ Nương
Email: ntmnuong@hcmus.edu.vn
Nội dung
1. Nguyên lý của tạo dòng
2. Các loại vector
3. Thư viện DNA (DNA libraries)
4. Sản xuất protein tái tổ hợp
3
Nguyên lý của
tạo dòng
Tạo dòng là gì?
Tạo dòng gene (tạo
dòng phân tử)
=>Tinh sạch & tạo lượng lớn một
gene quan tâm
Nguyên lý của tạo dòng
Tại sao cần tạo dòng?
-Hỗ trợ trong giải trình tự gene
-Nghiên cứu chức năng của gene
-Tạo protein tái tổ hợp
-Tạo sinh vật biến đổi gene
-….
Chuẩn bị
vector
Chuẩn bị
trình tự tạo
dòng (insert)
Tạo vector
tái tổ hợp
Xử lý
enzyme
tạo đầu
so le,
đầu
bằng
DNA:
tách chiết,
cắt, PCR,
tổng hợp
RNA:
tách chiết
RNA, RT-PCR
5
Các bước tạo dòng
Nối
vector -
insert
Biến nạp vector
tái tổ hợp vào tế
bào chủ
Hóa biến
nạp
Điện
biến nạp
….
Chọn lọc
dòng cần tìm
Kháng
kháng sinh
PCR khuẩn
lạc
Lai với
mẫu dò đặc
hiệu
Sử dụng
kháng nguyên
–kháng thể
Nhân
dòng,
kiểm
tra
Xác định mục tiêu cụ thể: tạo dòng để làm gì?
Chuẩn bị tế bào
chủ
Thu nhận
vector,
kiểm tra
đặc điểm
sản phẩm