1
B GIÁO DCĐÀO TO
ĐẠI HC ĐÀ NNG
PHM TH THÙY TRANG
NGHIÊN CU QUÁ TRÌNH LÊN MEN
AXIT GLUCONIC T R ĐƯỜNG
BNG ASPERGILLUS NIGER
Chuyên ngành: Công ngh Thc phm và Đồ ung
Mã s: 60.54.02
TÓM TT LUN VĂN THC SĨ K THUT
Đà Nng, Năm 2012
2
Công trình ñược hoàn thành ti
ĐẠI HC ĐÀ NNG
Người hướng dn khoa hc: PGS. TS. Đặng Minh Nht
Phn bin 1: GS. TS. Đào Hùng Cường
Phn bin 2: PGS. TS. Lê Th Liên Thanh
Lun văn ñược bo v trước Hi ñồng chm Lun văn tt nghip
thc sĩ k thut hp ti Đại hc Đà Nng vào ngày 17 tháng 11 năm
2012.
Có th tìm hiu lun văn ti:
Trung tâm Thông tin-Hc liu, Đại hc Đà Nng
Trung tâm Hc liu, Đại hc Đà Nng
3
M ĐẦU
1. TÍNH CP THIT CA ĐỀ TÀI
Axit gluconic là mt axit hu cơ yếu, ñược phát hin ln ñầu
tiên vào năm 1870 bi Hasiwetz và Habermann. Axit gluconic và các
mui gluconat trong t nhiên khá ph biến do ñược hình thành
t quá trình oxy hóa glucose. Vào thế k th 18, axit này ít ñược biết
ñến, tuy nhiên ngày nay axit gluconic ñang ñược ng dng rng rãi
trong nhiu lĩnh vc như công ngh hóa hc, thc phm, dược phm,
dt, luyn kim, thuc da, vt liu xây dng nhiu ngành công
nghip khác. Hng năm trên thế gii sn xut khong 50.000-100.000
tn axit gluconic tng tt c các loi mui gluconat khong
65.000-100.000 tn, trong ñó gm các loi mui như natri gluconat,
kali gluconat, canxi gluconat hay este glucono-δ-lacton cũng
nhng ph gia thc phm ñược chng nhn an toàn khi s dng
M Châu Âu (theo Cc Qun Thc Phm Dược Phm Hoa
K), ñược s dng làm cht ñiu v, ph gia trong sn xut bánh
nướng, sa ñậu nành, sa chua, phomat, bánh m.
Sn xut axit gluconic bng con ñường vi sinh ñã ñưc nghiên
cu ng dng rng rãi trong nhiu thp k qua, trong ñó quá trình
lên men bng Aspergillus niger (A. niger) ñược nghiên cu s dng
nhiu nht. A. niger rt ph biến trong t nhiên có th tìm thy trên lá
khô, thm thc vt mc nát, ñất, cây trng. A. niger tc ñộ sinh
trưởng phát trin nhanh, d dàng phân lp các ñiu kin thông
thường, trong phòng thí nghim. Do kh năng sinh tng hp enzym
cao nên A. niger ñược dùng rng rãi trong công nghip thc phm ñể
thu nhn các chế phm enzyme như amylase, protease, pectinase,
glucose oxydase,… các axit hu cơ như axit xitric, axit gluconic,
axit fumaric,....
4
Trên thế gii, nghiên cu sn xut axit gluconic ngày càng
ñược quan tâm mnh m, glucose ñược s dng ngun cacbon cho
hu hết các loài vi sinh vt sn xut axit gluconic, tuy nhiên ñể to ra
sn phm thương mi va ñảm bo cht lượng va ñảm bo hiu qu
kinh tế cao thì nguyên liu ñóng vai trò ñặc bit quan trng, mt
trong nhng ngun nguyên liu ñáp ng các yếu t trên chính r
ñường, vi ưu ñim cha 48-56% ñường tng s, ñó là ngun cacbon
r tin, r ñường hin nay là s la chn hàng ñầu ca các nhà nghiên
cu sn xut axit gluconic.
Theo báo cáo ca Hip hi mía ñường Vit Nam c nước
khong 40 nhà máy sn xut ñường, vi tng công sut 105.750 tn
mía/ngày, bình quân ñạt khong 2.500 tn mía/ngày/nhà máy, lượng
r ñường to ra chiếm 3-5% trng lượng ép, vì vy tng khi lượng r
ñường ca c nước rt ln, khong 3-5 tn/ngày. R ñường mía còn
ñược dùng làm nguyên liu trong công nghip lên men ñể sn xut
rượu, cn, dung môi axeton, sinh khi nm men, axit xitric, axit
lactic và glyxerin,... mt phn ñược dùng làm thc ăn gia súc.
Hin nay, Vit Nam chưa cơ s nào sn xut axit
gluconic, tt c axit gluconic hin có ñều phi nhp t nước ngoài vi
giá thành cao. vy, vic s dng axit này trong các ngành công
nghip nước ta s gp khó khăn v mt giá thành cũng như chúng
ta s không ch ñộng ñược ngun cung cp.
Xut phát t nhng vn ñề trên, chúng tôi thc hin ñề tài
"Nghiên cu quá trình lên men axit gluconic t r ñường bng
Aspergillus niger", nhm kho sát các ñiu kin lên men thích hp
cho quá trình sinh tng hp axit gluconic.
Đề tài này th m ra thêm mt hướng trin vng cho vic
thu nhn axit gluconic t ph phm ca quá trình sn xut, không
5
ch ý nghĩa v kinh tế còn m ra kh năng gii quyết các vn
ñề v cht lượng sn phm, các vn ñề v gii pháp k thut mt cách
hiu qu
2. MC TIÊU NGHIÊN CU
- Xác ñịnh các thông s công ngh tt nht như: t l ging,
thi gian lên men, hàm lượng nitơ b sung trong quá trình lên men.
- Đề xut quy trình k thut lên men axit gluconic t r
ñường bng chng nm mc A. niger.
3. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHM VI NGHIÊN CU
- S dng r ñường ñược thu nhn công ty Đường Kon
Tum ti Km 2, xã Vinh Quang, Thành ph Kon Tum, tnh Kon Tum.
- Chng nm mc A. niger ti phòng thí nghim khoa Hóa,
trường Đại hc Bách Khoa, Đi hc Đà Nng.
- Nghiên cu lên men axit gluconic t r ñường bng chng
nm mc A. niger qui mô phòng thí nghim (PTN).
4. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CU
- Phương pháp vt lý:
Xác ñịnh nng ñộ cht khô bng Bx kế
- Phương pháp hóa hc:
Xác ñịnh hàm lượng ñường kh bng phương pháp Bectran
Xác ñịnh hàm lượng nitơ tng bng phương pháp kjehldal.
- Phương pháp hóa lý:
Xác ñnh pH r ñưng và pH ca môi trưng nuôi cy trưc và
sau lên men
Xác ñịnh axit gluconic bng máy sc ký lng hiu năng
- Phương pháp vi sinh:
Phương pháp hot hóa ging
Phương pháp lên men chìm.
6
- Phương pháp toán hc:
S dng quy hoch thc nghim toàn phn 3 yếu t ñể kho
t nh hưng ca các yếu t thành phn ñến hàm lưng axit gluconic.
S dng phương pháp leo dc ñể ti ưu hóa các yếu t nh
hưởng.
5. Ý NGHĨA KHOA HC CA ĐỀ TÀI
- Xác ñịnh mt s thành phn hóa hc trong r ñường và hàm
lượng axit gluconic bng các phương pháp (PP) phân tích hin ñại.
- Xác ñịnh ñiu kin lên men tt nht thu ñược hàm lưng
axit gluconic cao nht.
- Xây dng ñược quy trình lên men gluconic t r ñường
quy mô PTN.
6. Ý NGHĨA THC TIN CA ĐỀ TÀI
- Nghiên cu này ñã giúp s dng phế phm ca quá trình
sn xut ñường to ra ngun nguyên liu chính sn xut axit
gluconic, mang li li ích kinh tế cho các nhà sn xut ñường.
- Gim lượng axit gluconic ngoi nhp, ch ñộng sn xut.
- M rng ng dng công ngh sinh hc trong công ngh
thc phm và mt s lĩnh vc khác.
7. CU TRÚC LUN VĂN
Ngoài phn m ñầu, kết lun, tài liu tham kho ph lc,
trong lun văn gm có các chương như sau :
Chương 1: Tng quan
Chương 2: Đối tượng và phương pháp nghiên cu
Chương 3: Kết qu và tho lun
7
CHƯƠNG 1
TNG QUAN
1.1. AXIT GLUCONIC
1.1.1. Gii thiu v axit gluconic
Axit gluconic mt axit hu cơ yếu, tính sát khun,
không bay hơi, không ñộc, không có tính ăn mòn, có ngun gc t β-
D-glucose to thành bi mt phn ng oxy hóa dưới xúc tác ca
enzym glucose oxidase. Axit gluconic mt t nhiên trong các loi
qu, mt ong, trà kombucha (nm hng trà) và rượu vang.
Trong công nghip thc phm axit gluconic ñược s dng
như mt cht ñiu v, nó có kh năng to ra hương v chua du nh
ñược s dng như mt ph gia ñiu chnh v chua (E574) dùng cho
các sn phm như rượu vang, nước ép trái cây, sa chua,.…
Tên khoa hc:
(2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahyñroxyhexanoic axit
1.1.2. Cu to ca axit gluconic
Axit gluconic là mt hp cht hu cơ có công thc phân t
C
6
H
12
O
7
, công thc cu to là:
Hình 1.1. C
u to phân t axit gluconic
8
Axit gluconic có cu trúc hoá hc bao gm mt chui sáu
cacbon vi năm nhóm hydroxyl kết thúc bng mt nhóm chc
cacboxyl (-COOH). Trong dung dch nước nng ñộ 1/1000 axit
cacboxylic pH gn trung tính, axit cacboxylic này to ra c ion
gluconat các mui ca axit gluconic gi chung các gluconat.
Khi hòa tan trong nước axit nhanh chóng chuyn sang trng thái cân
bng ñộng vi vòng glucono-δ-lacton, làm cho dung dch tr thành
hn hp ca axit vi glucono-δ-lacton.
1.1.3. Tính cht ca axit gluconic và mui gluconat
1.1.4. Lch s phát trin axit gluconic
1.1.5. ng dng ca axit gluconic và mui gluconat
1.1.6. Sn xut axit gluconic và mui gluconat
1.1.6.1. Sn xut axit gluconic t enzyme glucose oxidase
1.1.6.2. Sn xut axit gluconic t vi khun
1.1.6.3. Sn xut axit gluconic t A. niger và Penicillium luteum
Axit gluconic
Hình 1.2. Sơ ñ chuyn hóa glucose thành axit gluconic bi A. niger
C
6
H
12
O
6
+ H
2
O + O
2
C
6
H
12
O
7
+ H
2
O
2
9
1.2. CƠ S QUÁ TRÌNH LÊN MEN AXIT GLUCONIC
1.2.1. Gii thiu v Aspergillus niger
1.2.2. Các phương pháp lên men
1.2.2.1. Phương pháp lên men b mt
1.2.2.2. Phương pháp lên men b sâu
1.2.3. S sinh trưng và phát trin ca vi sinh vt trong ñiu kin
ni cy tĩnh
1.2.3.1. Pha m ñu (pha tim phát)
1.2.3.2. Pha logarit (pha lũy tiến)
1.2.3.3. Pha n ñnh (pha n bng)
1.2.3.4. Pha t vong
1.2.4. Các yếu t nh hưng ñến quá tnh lên men axit gluconic
1.2.4.1. nh hưởng ca cacbon
1.2.4.2. nh hưởng ca nitơ
1.2.4.3. nh hưởng ca thi gian
1.2.4.4. nh hưởng ca oxy
1.2.4.5. nh hưởng ca nhit ñộ
1.2.4.6. nh hưởng ca PH
1.2.4.7. nh hưởng ca t l ging
1.3. NGUYÊN LIU R ĐƯỜNG
1.3.1. Gii thiu nguyên liu r ñường
1.3.2. Mc ñích ca x lý r ñường trước khi lên men
1.4. TÌNH HÌNH NGHIÊN CU AXIT GLUCONIC VIT
NAM VÀ TRÊN TH GII
1.4.1. Các công trình nghiên cu trong nước
1.4.2. Các công trình nghiên cu nước ngoài
10
CHƯƠNG 2
ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CU
2.1. ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CU
2.1.1. R ñường
R ñường ly t công ty Đưng Kon Tum ñược x lý
trong phòng thí nghim trưc khi n men. R ñường ñược pha loãng
vi t l r ñưng:nước 2:1 kg/kg, tiến hành x nhit 85-90
o
C
trong thi gian 45-60 phút, ñiu kin này hu hết các tp khun ñều
b tiêu dit. Sau khi x nhit tiến hành ly tâm nguyên liu 8
o
C, tc
ñộ 5500 vòng/phút, thi gian 30 phút, tách các cht không hòa tan
các cht keo ra khi r ñường. Kết thúc quá trình xr ñường ñược
bo qun 4
o
C.
2.1.2. Chng vi sinh vt
Chng nm mc A. niger ñược nuôi cy gi ging ti
PTN khoa Hóa, trường Đại hc Bách Khoa, Đại hc Đà Nng.
2.2. HÓA CHT VÀ THIT B
2.2.1. Hóa cht
2.2.2. Thiết b
2.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CU
2.3.1. Phương pháp vt lý
2.3.2. Phương pháp hóa lý
2.3.3. Phương pháp hóa hc
2.3.4. Phương pháp vi sinh
2.3.5 Phương pháp toán hc