Nhân dòng gen và vùng Promoter Ubiquitin từ cây ngô

TẠP CHÍ SINH HỌC 2013, 35(3se): 114-121<br /> <br /> NHÂN DÒNG GEN VÀ VÙNG PROMOTER UBIQUITIN<br /> TỪ CÂY NGÔ (ZEA MAYS L.)<br /> Nguyễn Đức Thành*, Lê Hoàng Đức<br /> Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm KH & CN Việt Nam, *nguyenducthanh_pcg@ibt.ac.vn<br /> TÓM TẮT: Ubiquitin là một protein trong tế bào nhân thực và trình tự của nó có tính bảo thủ cao,<br /> ubiquitin tham gia vào nhiều quá trình của tế bào như: cân bằng giữa tổng hợp và thoái biến protein, cấu<br /> trúc chromatin, điều hành chu kỳ tế bào, sửa chữa DNA và phản ứng với sốc nhiệt và các stress khác. Gen<br /> mã hóa cho protein này (gen Ubiquitin) và promoter Ubiquitin đã được nhân dòng và nghiên cứu đánh giá<br /> khả năng hoạt động từ nhiều đối tượng như lúa, ngô, lay ơn. Promoter Ubiquitin có vai trò quan trọng<br /> trong thể hiện gen ở cây một lá mầm. Trong bài báo này, chúng tôi giới thiệu các kết quả về nhân dòng<br /> gen mã hóa cho protein Ubiquitin (gen Ubi) và promoter Ubiqitin từ dòng ngô H240 phục vụ cho nghiên<br /> cứu về công nghệ gen ở cây ngô. Các kết quả nhận được cho thấy các vùng như: vùng promoter, vùng<br /> phiên mã và hộp TATA của gen Ubi nhân dòng được từ dòng ngô H240 có độ tương đồng cao so với các<br /> chuỗi gen tương đồng cùng loài trong gemone thực vật. Gen Ubi đã được đăng ký trên Ngân hàng Gen<br /> quốc tế với mã số JX947345.1. Kết quả nhận được trong nghiên cứu này sẽ góp phần đáng kể trong việc<br /> nghiên cứu và sử dụng promoter Ubiquitin trong chuyển gen ở các cây một lá mầm nói chung và cây ngô<br /> nói riêng.<br /> Từ khóa: Cây ngô, gen Ubiquitin, hộp TATA, mức độ tương đồng, promoter, vùng phiên mã.<br /> MỞ ĐẦU<br /> <br /> Ubiquitin là một protein trong tế bào nhân<br /> thực và trình tự của nó có tính bảo thủ cao,<br /> ubiquitin tham gia vào nhiều quá trình của tế<br /> bào như: cân bằng giữa tổng hợp và thoái biến<br /> protein, cấu trúc chromatin, điều hành chu kỳ tế<br /> bào, sửa chữa DNA và phản ứng với sốc nhiệt<br /> và các stress khác. Promoter là vùng trình tự<br /> nucleotide trong genome nằm ngược dòng về<br /> phía đầu 5’ của vị trí khởi đầu phiên mã gen<br /> (transcription start site-TSS). Promoter là thành<br /> phần quan trọng trong cấu trúc của tất cả các<br /> gen, khởi đầu cho sự phiên mã, đóng vai trò<br /> then chốt trong việc biểu hiện gen. Theo khả<br /> năng biểu hiện, promoter được chia làm hai loại<br /> chính: promoter không đặc hiệu hay còn gọi là<br /> promoter cơ định và promoter đặc hiệu bao gồm<br /> promoter đặc hiệu mô tế bào, đặc hiệu giai đoạn<br /> phát triển và promoter cảm ứng. Hiện nay, có<br /> rất nhiều promoter hiệu quả được sử dụng rộng<br /> rãi để điều khiển biểu hiện các gen ngoại lai<br /> trong cây trồng biến đổi gen như CaMV35S,<br /> CaMV19S, nopaline synthase (NOS) (promoter<br /> trên các cây hai lá mầm), hay Actin và<br /> Ubiquitin (promoter trên các cây một lá mầm).<br /> Promoter Ubiquitin đã được phân lập và<br /> nghiên cứu đánh giá khả năng hoạt động từ<br /> 114<br /> <br /> nhiều đối tượng như lúa, ngô, lay ơn [1, 3, 6].<br /> Các nghiên cứu đã cho thấy khả năng hoạt động<br /> của promoter này cao gấp mười lần hoạt động<br /> của promoter CaMV35S khi điều khiển biểu<br /> hiện gen ngoại lai trên cây một lá mầm. Hoạt<br /> tính của promoter Ubiquitin trong lúa chuyển<br /> gen bằng các phương pháp chuyển qua tế bào<br /> trần và mô sẹo thông qua đánh giá mức độ biểu<br /> hiện của các gen chỉ thị và chọn lọc cho thấy<br /> promoter này biểu hiện mạnh nhưng không phải<br /> ở tất cả các mô cũng như tất cả các giai đoạn<br /> phát triển của cây lúa [2]. Nhìn chung, promoter<br /> Ubiquitin có hoạt tính mạnh trong các mô non<br /> có hoạt động trao đổi chất mạnh và ở hạt phấn<br /> hoa [9].<br /> Trong bài báo này, chúng tôi giới thiệu các<br /> kết quả về nhân dòng gen mã hóa cho protein<br /> Ubiquitin (gen Ubi) và promoter Ubiquitin từ<br /> dòng ngô H240 phục vụ cho nghiên cứu về<br /> công nghệ gen ở cây ngô.<br /> VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU<br /> <br /> Vật liệu<br /> Vật liệu nghiên cứu được sử dụng là các<br /> mẫu lá của dòng ngô H240 do Viện Nghiên cứu<br /> ngô cung cấp. Vector tách dòng pBT do Phòng<br /> <br /> Nguyen Duc Thanh, Le Hoang Duc<br /> <br /> Công nghệ tế bào thực vật, Viện Công nghệ<br /> Sinh học cung cấp.<br /> Phương pháp<br /> Thiết kế cặp mồi nhân gen Ubiquitin (Ubi)<br /> và promoter: thông tin về trình tự gen và<br /> promoter Ubiquitin được khai thác trên ngân<br /> hàng gen quốc tế thông qua trang Web NCBI.<br /> Dựa trên thông tin về gen polyUbiquitin1<br /> (Ubi1) trên ngân hàng gen có mã số<br /> DQ141598.1 và sử dụng phần mềm Primer 3<br /> [10] để thiết kế cặp mồi đặc hiệu cho nhân gen<br /> Ubi. Xác định các vị trí cắt của enzyme giới<br /> hạn, vị trí bám của mồi và xác định các thông số<br /> kỹ thuật của mồi, như: nhiệt độ nóng chảy<br /> (Tm), tỷ lệ GC, chiều dài mồi bằng phần mềm<br /> NEBcutter V2.0 (New England Biolab INC).<br /> Tách chiết DNA genome: DNA genome<br /> được tách từ các mẫu lá ngô theo phương pháp<br /> CTAB của Saghai Maroof et al. (1994) [12].<br /> Nhân bản gen Ubi và promoter: Gen Ubi và<br /> promoter Ubiquitin được nhân bản từ DNA<br /> genome tách từ lá ngô bằng phản ứng PCR với<br /> cặp mồi đặc hiệu được thiết kế. Thành phần<br /> phản ứng bao gồm: đệm 10 x PCR: 2,5 µl;<br /> MgCl2 (25 mM): 1,5 µl; dNTP (1 mM): 1 µl;<br /> mồi xuôi (50 ng/µl): 1 µl; mồi ngược (50<br /> ng/µl): 1 µl, ; Taq DNA polymerase (5 U/µl): 1<br /> µl ; DNA (50 ng/ µl): 1 µl và nước cất vô trùng:<br /> 12 µl. Phản ứng PCR được thực hiện trên máy<br /> luôn nhiệt PTC-100 (MJ Research, Inc) với 35<br /> chu kỳ: 94oC: 1 phút; 58oC: 1 phút, 72oC: 2<br /> phút; kết thúc phản ứng ở 72oC trong 8 phút.<br /> Sản phẩm PCR được kiểm tra bằng điện di trên<br /> gel agarose 1%.<br /> Nhân dòng gen Ubi, propotor Ubiquitin và<br /> đọc trình tự: phân đoạn DNA nhân được sau<br /> phản ứng PCR có kích thước tương ứng với<br /> kích thước lý thuyết của Ubi1 được tinh sạch<br /> bằng bộ kit AccuPrep® Gel Purification<br /> (Bioneer) theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Sau<br /> khi tinh sạch phân đoạn này được gắn vào<br /> vector nhân dòng pBT để tạo vector tái tổ hợp.<br /> Các quá trình tạo vector tái tổ hợp được thực<br /> hiện theo như mô tả của Sambrook et al. (1989)<br /> [11]. Vector tái tổ hợp chứa gen Ubi sau đó<br /> được biến nạp vào chủng vi khuẩn E. coli chủng<br /> DH5α bằng phương pháp sốc nhiệt. Kết quả<br /> <br /> biến nạp vào E. coli của vector tái tổ hợp có gắn<br /> gen Ubi với vector pBT được kiểm tra bằng<br /> phản ứng colony PCR sử dụng cặp mồi đặc hiệu<br /> nhân bản Ubi. Đồng thời, các khuẩn lạc làm<br /> khuôn cho phản ứng colony-PCR sẽ được nuôi<br /> lắc qua đêm ở 37oC trong 4 ml môi trường LB<br /> lỏng bổ sung 100 µg/ml kháng sinh Ampicillin<br /> hoặc 50 µg/ml kháng sinh Kanamycin để tách<br /> plasmid. Tách DNA plasmid và kiểm tra sự có<br /> mặt của gen Ubi bằng cắt bởi enzyme giới hạn<br /> BamHI được tiến hành theo như Sambrook et al.<br /> (1989) [11]. Trình tự nucleotide của gen Ubi<br /> được xác định bằng máy giải trình tự ABI<br /> PRISM® 3100 Avant Genetic Analyzer, sử dụng<br /> bộ kit BigDye® Terminator V3.1 Cycle<br /> Sequencing tại Phòng Thí nghiệm Trọng điểm<br /> về công nghệ gen, Viện Công nghệ sinh học.<br /> Thành phần phản ứng PCR đọc trình tự gồm<br /> mồi, DNA plasmid đã được tinh sạch, BigDye,<br /> đệm tương ứng trong tổng thể tích 15 µl. Chu<br /> trình nhiệt trên máy luân nhiệt GenAmp® PCR<br /> System 9700 gồm 25 chu kỳ: 96oC: 1 phút,<br /> 96oC: 10 giây, 50oC: 5 giây, 60oC: 4 phút. Sau<br /> đó, sản phẩm PCR được tinh sạch và điện di<br /> trong ống vi mao quản để đọc trình tự. Trình tự<br /> nucleotide nhận được của gen Ubi được so sánh<br /> với trình tự của Ubi1 (DQ141598.1) và một số<br /> trình tự đã công bố trên Ngân hàng Gen quốc tế<br /> bằng phần công cụ BLAST của NCBI.<br /> Phân tích promoter: xác định vùng<br /> promoter, vùng phiên mã của gen Ubi nhận<br /> được bằng phần mềm TSSP/ Prediction of<br /> PLANT Promoters, Softberry, Inc. So sánh các<br /> vị trí của promotor, vùng phiên mã gen Ubi từ<br /> dòng ngô H240 và gen Ubi1 đã công bố<br /> (DQ141598.1) với dữ liệu các chuỗi gen tương<br /> đồng cùng loài trong gemone thực vật bằng<br /> chương trình PromH(W) (Promoter prediction<br /> using<br /> orthologous<br /> sequences<br /> (http://linux1.softberry.com/berry.phtml); xác<br /> định vùng kết thúc phiên mã bằng chương trình<br /> ARNold-Program<br /> Finding<br /> terminator<br /> (Gautheret and Lambert, 2001) [4].<br /> KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN<br /> <br /> Kết quả thiết kế mồi đặc hiệu<br /> Dựa trên trình tự gen Ubi1 trên Ngân hàng<br /> Gen NCBI với mã số DQ141598.1, bằng phần<br /> 115<br /> <br /> TẠP CHÍ SINH HỌC 2013, 35(3se): 114-121<br /> <br /> mềm Primer 3 [10], trình tự của cặp mồi đặc<br /> hiệu cho nhân bản gen Ubi được thiết kế. Mồi<br /> xuôi UbiF có trình tự là<br /> 5’TAGTGCAGCGTGACCCG - 3’ và mồi ngược<br /> UbiR có trình tự là 5’-TATGCAGAAGTAACA<br /> CCAAACAA-3’. Để thuận tiện cho việc nhân<br /> dòng trong vector pBT mồi xuôi và mồi ngược<br /> được gắn thêm trình tự các điểm cắt tương ứng<br /> của các enzyme giới hạn BamHI (GGATCC)<br /> và PstI (CTGCAG). Kết quả mồi xuôi (UbiF2)<br /> và mồi ngược (UbiR2) để nhân bản gen Ubi có<br /> <br /> trình tự tương ứng là: UbiF2: 5’-TACTGC<br /> AGGTGCAGCGT GACCCG-3’ và 5’-TAGG<br /> ATCCTGCAGAAGTAACACCAAACAA-3’<br /> (bảng 1). Mồi xuôi có chiều dài 23 nucletide<br /> nhiệt độ nóng chảy (Tm) là 65,8 oC và tỷ lệ GC<br /> là 65.2%, còn mồi ngược có chiều dài 29<br /> nucletide nhiệt độ nóng chảy (Tm) là 59,6 oC và<br /> tỷ lệ GC là 41,3%. Cặp mồi sẽ nhân được chuỗi<br /> nucleotide có chiều dài theo lý thuyết khoảng 2<br /> kb tương đương với chiều dài của gen<br /> Ubiquitin.<br /> <br /> Bảng 1. Trình tự mồi dùng cho nhân bản promoter Ubiquitin<br /> Tên<br /> UbiF2<br /> UbiR2<br /> <br /> Trình tự mồi thiết kế nhân bản gen Ubiquitin<br /> 5’ - TACTGCAGGTGCAGCGTGACCCG - 3’<br /> 5’- TAGGATCCTGCAGAAGTAACACCAAA<br /> CAA-3’<br /> <br /> Kết quả nhân bản gen Ubi và promoter<br /> Ubiquitin<br /> Với cặp mồi đặc hiệu được thiết kế, gen Ubi<br /> và promoter Ubiquitin đã được nhân bản từ<br /> DNA genome dòng ngô H240 (hình 1). Kết quả<br /> điện di trên hình 1 cho thấy, sản phẩm PCR chỉ<br /> có một băng duy nhất có kích thước khoảng 2<br /> kb, tương đương với kích thước của gen<br /> Ubiquitin và promoter theo lý thuyết.<br /> <br /> Hình 1. Kết quả điện di sản phẩm PCR nhân<br /> bản gen Ubi<br /> M. DNA marker 1 kb (Biolabs); 1. Đối chứng âm<br /> (phản ứng PCR không có DNA của H240); 2. sản<br /> phẩm PCR nhân bản gen Ubiquitin từ DNA genome<br /> dòng ngô H240 với cặp mồi UbiF2 và UbiR2 được<br /> thiết kế.<br /> <br /> 116<br /> <br /> Tm (oC)<br /> 65,8<br /> 59,6<br /> <br /> Tỷ lệ GC<br /> (%)<br /> 65,2<br /> 41,3<br /> <br /> Chiều<br /> dài<br /> 23<br /> 29<br /> <br /> Kết quả nhân dòng gen Ubi và promoter<br /> Sau khi nhân bản, băng có kích thước tương<br /> tự độ dài của gen Ubiquitin được tinh sạch và<br /> được gắn vào plasmid pBT và biến nạp vào<br /> chủng E. coli DH5α. Kết quả điện di sản phẩm<br /> PCR khuẩn lạc với cặp mồi đặc hiệu UbiF2 và<br /> UbiR2 được trình bầy trên hình 2.<br /> <br /> Hình 2. Kết quả điện di sản phẩm PCR nhân<br /> gen Ubi từ plasmid trong các khuẩn lạc 2, 3<br /> và 4; M. DNA marker 1 kb (Biolabs); 1. Đối<br /> chứng âm (phản ứng PCR không có khuẩn lạc);<br /> 2, 3, 4. tương ứng với plasmid từ các dòng<br /> khuẩn lạc 2, 3 và 4.<br /> <br /> Nguyen Duc Thanh, Le Hoang Duc<br /> <br /> Hình 3. Kết quả cắt kiểm tra phân đoạn gen Ubi<br /> từ dòng ngô H240 trong plasmid pBT. M: DNA<br /> marker 1 kb (Biolabs); 2 , 3, 4: tương ứng với<br /> plasmid từ các dòng khuẩn lạc 2, 3, và 4 được<br /> cắt bằng enzyme BamHI<br /> Như vậy là phân đoạn gen Ubi đã được gắn<br /> <br /> vào plasmid pBT và nhân dòng trong E. coli<br /> DH5α. Kết quả này cũng được khẳng định bằng<br /> kết quả cắt plasmid pBT có chứa phân đoạn gen<br /> Ubi bằng enzyme BamHI. Sau khi cắt bằng<br /> enzyme này và phân lập các đoạn cắt trên gel<br /> agorose 1%, trên ảnh điện di có thể nhìn rõ hai<br /> băng : băng 3 kb tương ứng với độ dài của<br /> plasmid pBT và băng 2 kb tương ứng với độ dài<br /> của gen Ubi (hình 3).<br /> Kết quả so sánh trình tự và phân tích<br /> promoter Ubiquitin<br /> Kết quả so sánh trình tự phân đoạn đoạn gen<br /> Ubi mang promoter Ubiquitin từ dòng ngô<br /> H240 với trình tự gen trên Ngân hàng Gen<br /> NCBI và trình tự Ubi1 có mã số DQ141598.1<br /> (Zea mays cultivar Nongda 105 polyUbiquitin-1<br /> (Ubi-1) gene, promoter region and 5' UTR)<br /> được trình bày ở bảng 2.<br /> <br /> Bảng 2. Kết quả so sánh mức độ tương đồng trình tự gen Ubi mang promoter Ubiquitin tách từ<br /> dòng ngô H240 và gen Ubi1 với vùng promoter đã công bố với mã số DQ141598.1<br /> Mã số Ngân<br /> hàng gen<br /> DQ141598.1<br /> <br /> Tên gen<br /> Gen polyUbiquitin-1 (Ubi-1) từ<br /> dòng ngô Nongda 105 Zea<br /> mays, vùng promoter và không<br /> phiên mã đầu 5'<br /> <br /> Mức độ so<br /> sánh<br /> 99%<br /> <br /> Giá trị<br /> E<br /> 0,0<br /> <br /> Mức độ tương<br /> đồng<br /> 94%<br /> <br /> Bảng 3. Kết quả so sánh trình tự gen Ubi mang promoter Ubiquitin từ dòng ngô H240 với một số<br /> trình tự trên Ngân hàng Gen quốc tế khác<br /> Mã số<br /> <br /> Tên gen, vector<br /> <br /> AB201314.1<br /> <br /> Cloning vector pSB4U DNA,<br /> complete sequence<br /> Cre-lox Univector acceptor vector<br /> pCR701 complete sequence<br /> Reporter vector pUbiGUSPlus;<br /> pUbiSXR, complete sequence<br /> polyUbiquitin [maize, Genomic, 3841<br /> nt]<br /> Zea mays clone MubG1 Ubiquitin<br /> gene, complete cds<br /> Zea diploperennis polyUbiquitin-1<br /> (Ubi-1) gene, promoter region and 5'<br /> UTR<br /> <br /> FJ750577.1<br /> AY452753.1<br /> S94464.1<br /> U29159.1<br /> AY342393.1<br /> <br /> Mức<br /> độ so<br /> sánh<br /> 99%<br /> <br /> Giá<br /> trị<br /> E<br /> 0.0<br /> <br /> 99%<br /> <br /> 0.0<br /> <br /> 99%<br /> <br /> 0.0<br /> <br /> 99%<br /> <br /> 0.0<br /> <br /> 99%<br /> <br /> 0.0<br /> <br /> 98%<br /> <br /> 0.0<br /> <br /> Mức độ<br /> tương<br /> Tác giả<br /> đồng<br /> 93%<br /> Kuraya et al.<br /> (2004) [7]<br /> 93%<br /> Jia et al.<br /> (2009) [5]<br /> 93%<br /> Vickers et al.<br /> (2003) [15]<br /> 93%<br /> Christensen et<br /> al. (1992) [1]<br /> 93%<br /> Liu et al.<br /> (1995) [8]<br /> 94%<br /> Streatfield et<br /> al.<br /> (2003)<br /> [13]<br /> <br /> 117<br /> <br /> TẠP CHÍ SINH HỌC 2013, 35(3se): 114-121<br /> <br /> Kết quả trên bảng 2 cho thấy, mức độ<br /> nucleotide tương đồng giữa gen Ubi tách<br /> từ dòng ngô H240 nhân dòng được với trình tự<br /> gen polyUbiquitin-1 (Ubi-1) từ dòng ngô<br /> Nongda 105 Zea mays, vùng promoter và vùng<br /> không phiên mã đầu 5' (DQ141598.1) là 94%.<br /> Ngoài ra, chúng tôi còn tiến hành so sánh với<br /> các trình tự nucleotide khác trên Ngân hàng Gen<br /> quốc tế và thu được các kết quả thể hiện trong<br /> bảng 3.<br /> <br /> Qua bảng 3 có thể thấy, trình tự của gen<br /> Ubi nhân dòng được có độ tương đồng cao với<br /> trình tự một số gen và vector mang promoter<br /> Ubiquitin đã công bố, đặc biệt là trình tự gen<br /> Ubiquitin trong các dòng ngô chuyển gen. Như<br /> vậy, có thể khẳng định gen Ubi nhân dòng được<br /> có độ tin cậy cao. Gen Ubi từ dòng ngô H240 đã<br /> được đăng ký trên Ngân hang Gen quốc tế<br /> NCBI với mã số JX947345.1 (Zea mays<br /> ubiquitin 1 (Ubi) gene, promoter region).<br /> <br /> >gi_410109644_gb_JX947345.1_ Zea mays ubiquitin 1 _Ubi_ gene, promoter<br /> region<br /> TACTGCAGGTGCAGCGTGACCCGGTCGTGCCCCTCTCTAGAGCTCTAGAGTAGAGCATTG<br /> CATGTCTAAGTTATAAAAAATTACCACATATTTTTTTTGTACACTTGTGTTTGAAGTGCA<br /> GTTTATCTATCTCTATACATATATTTAAACTTCACTATATGAATAATATAGTCTATAGTA<br /> TTAAAATAATATCAATGTTTTAGATGATTATATAACTGAGCTGCTAGACATGGTCTAAAG<br /> GACAACCGAGTATTTTGACAACATGACTCTACAGTTTTATCTTTTTAGTGTGCGTGTGTT<br /> CTTTTTACTTTTGCAAATAGCTTCACCTATATAATACTTCATCCATTTTATTAGTACATC<br /> CATTTACTAAATTTTTAGTACATCTATTTTATTCTATTTTAGCCTCTAAATTAAGAAAAC<br /> TTAAACTCTATTTTAGTTTTTTATTTAATAATTTAGATATAAAATAGAATAAAATAAAGT<br /> GACTAAAAAATAACTAAATACCTTTTTAAGAAATAAAAAAACTAAGGAACCATTTTTCTT<br /> GTTCCGAGTAGATAATGACAGCCTGTTCAACGCCGTCGACGAGTCTAACCGGAACACCCC<br /> ATCAGCGAACCCAGGCAGCGTCGCGTCCGGTTCAAGCGAAGCAGAACGCCACGGGCATCT<br /> TCTGTAGCTGCCCTTTCTGGACCCCCTCTCTCCGAGAGAAGGTTTCCGCTCCCACCGTTG<br /> GACTTGCTCCCGCTGTTCGGCATCCCAGAAAATTGCGTGGGCGGGAGCGGCAGACGTGAG<br /> CCGGCACGGGCAGGCGGCCTTCCTTCTCACGGCACCGGCAGCTACGGGGGATTCCCTTTC<br /> CCACCGCTCCTTTCGCTTTTCCTTCCTCGCCCGCCGTAATAAATAGACACCCCCCCTCCC<br /> <br /> 60<br /> 120<br /> 180<br /> 240<br /> 300<br /> 360<br /> 420<br /> 480<br /> 540<br /> 600<br /> 660<br /> 720<br /> 780<br /> 840<br /> 900<br /> <br /> Hộp TATA<br /> ACACCCTCTTTCCCCCAACCTCGTGTTGTTCGGAGCGCACACACACACAACCAGATCTCC<br /> CCCCAAACCCACCCGTCGGCACCTCCCGCTTCAAGGTACGCCGCTCGTCCTCCCCCCCCC<br /> CCCCTCTCTCTACCTTCTCTAGATCGGCGTTCCGGTCCATGGTTAGGGCCCCGGTAGTTC<br /> TACTTCTGTTCATGTTTGTGTTAGATCCGTGTTTGTGTTAGATCCGTGCTGCTAGCGTTC<br /> GTACACGGATGCGACCTGTACGTCAGACACGTTCTGATTGCTAACTTGCCAGTGTTTCTC<br /> TTTGGGGAATCCTGGGATGGCTCTAGCCGTTCCGCAGACGGGATCGATTTCATGATTTTT<br /> TTTGTTTCGTTGCATAGGGTTTGGTTTGCCCTTTTCCTTTATTTCAATATATGCCGTGCA<br /> <br /> 960<br /> 1020<br /> 1080<br /> 1140<br /> 1200<br /> 1260<br /> 1320<br /> <br /> Chuỗi kết thúc<br /> CTTGTTTGTCGGGTCATCTTTTCATGCTTTTTTTTGTCTTGGTTGTGATGATGTGGTCTG<br /> GTTGGGCGGTCGTTCTAGATCGGAGTAGAATTCTGTTTCAAACTACCTGGTGGATTTATT<br /> AATTTTGGATCTGTATGTGTGTGCCATACATATTCATAGTTACGAATTGAAGATGATGGA<br /> TGGAAATATCGATCTAGGATAGGTATACATGTTGATGCGGGTTTTACTGGTGCATATACA<br /> GAGATGCTTTTTGTTCGCTTGGTTGTGATGATGTGGTGTGGTTGGGCGGTCGTTCATTCG<br /> TTCTAGATCGGAGTAGAATACTGTTTCAAACTACCTGGTGTATTTATTAATTTTGGAACT<br /> GTATGTGTGTGTCATACATCTTCATAGTTACGAGTTTAAGATGGATGGAAATATCGATCT<br /> AGGATAGGTATACATGTTGATGTGGGTTTTACTGATGCATATACATGATGGCATATGCAG<br /> CATCTATTCATATGCTCTAACCTTGAGTACCTATCTATTATAATAAACAAGTATGTTTTA<br /> TAATTATTTTGATCTTGATATACTTGGATGATGGCATATGCAGCAGCTATATGTGGATTT<br /> TTTTAGCCCTGCCTTCATACGCTATTTATTTGCTTGGTACTGTTTCTTTGTCCGATGCTC<br /> ATCCTGTTGTTTGGTGTTACTTCTGCAGGATCCTA<br /> <br /> 1380<br /> 1440<br /> 1500<br /> 1560<br /> 1620<br /> 1680<br /> 1740<br /> 1800<br /> 1860<br /> 1920<br /> 1980<br /> 2040<br /> <br /> Hình 4. Vị trí promoter, hộp TATA và chuỗi kết thúc của gen Ubi từ dòng ngô H240<br /> <br /> 118<br /> <br />