Ch ng 6ươ PH NG PHÁP LAI PHÂN TƯƠ Ử
1.KHÁI Ni M LAI PHÂN TỆ Ử
-Khi 2 m ch DNA tách r i, nhi t đ đ c làm gi m t t , c ng ạ ờ ệ ộ ượ ả ừ ừ ộ
v i đi u ki n thí nghi m thích h p, hai m ch s b t c p tr lai.ớ ề ệ ệ ợ ạ ẽ ắ ặ ở
-Đ c đi m:ặ ể
Đ c hi u tuy t đ iặ ệ ệ ố : S tái b t c p ch x y ra gi a 2 trình t hoàn ự ắ ặ ỉ ả ữ ự
toàn b sung v i nhau.ổ ớ
Các trình t b sung có th là DNA ho c RNA ự ổ ể ặ hình thành các
phân t DNA-DNA, RNA-RNA, ho c phân t lai DNA-RNA.ử ặ ử
1.Các y u t nh h ng đ n lai phân t .ế ố ả ưở ế ử
N ng đ DNA và th i gian ph n ng:ồ ộ ờ ả ứ
nhi t đ nh t đ nh, s l ng các trình t b sung càng nhi u Ở ệ ộ ấ ị ố ượ ự ổ ề
thì xác su t b t c p càng tăng.ấ ắ ặ
Th i gian ph n ng càng dài, xác su t b t c p càng l n, đ ng ờ ả ứ ấ ắ ặ ớ ồ
th i s l ng phân t lai tăng d n.ờ ố ượ ử ầ
Nhi t đệ ộ
T c đ ph n ng lai ph thu c nhi t đ . Thông th ng t c đ ố ộ ả ứ ụ ộ ệ ộ ườ ố ộ
ph n ng lai c c đ i nhi t đ th p h n Tm kho ng 25 %.ả ứ ự ạ ở ệ ộ ấ ơ ả
Đ dài các trình tộ ự
T c đ lai tăng t l thu n v i căn bình ph ng c a đ dài các ố ộ ỉ ệ ậ ớ ươ ủ ộ
trình t b sung.ự ổ
L c ionự
N ng đ NaCl 1M làm tăng t c đ ph n ng tăng lên t 5 đ n 10 ồ ộ ố ộ ả ứ ừ ế
l n. N ng đ NaCl v t quá 1,2 M hoàn toàn không có tác d ng.ầ ồ ộ ượ ụ
3. Kĩ thu t Southern Blotậ
Ph ng pháp này đ c ươ ượ s d ng đ đ nh v nh ng trình t đ c ử ụ ể ị ị ữ ự ặ
bi tệ trên DNA b gene, hay nh ng DNA kích th c nh h n DNA ộ ữ ướ ỏ ơ
plasmid, phage…
C s : kĩ thu t chuy n DNA t gel lên màng lai.ơ ở ậ ể ừ
Đ u tiên, DNA đ c phân tách trên gel agarose và đ c tách thành ầ ượ ượ
dây đ n (s d ng mu i có n ng đ cao đ bi n tính) đ chuy n ơ ử ụ ố ồ ộ ể ế ể ể
t gel lên màng lai.ừ
•Cách ti n hành:ế
- DNA b gene đ c c t thành nh ng đo n có kích th c khác ộ ượ ắ ữ ạ ướ
nhau b i enzyme c t gi i h n ở ắ ớ ạ đi n di đ phân tách.ệ ể
- DNA đ c bi n tính ngay trên gel ượ ế chuy n lên màng laiể (v trí ị
các đo n DNA đ c gi nguyên).ạ ượ ữ
- Ti n hành laiế v i m u dò có đánh d u (phóng x , hóa h c…)ớ ẫ ấ ạ ọ
- Ti n hành r aế ử lo i b m u dò không b t c p đ c hi uạ ỏ ẫ ắ ặ ặ ệ
- Phát hi n tín hi u lai.ệ ệ
•ng d ng:Ứ ụ
- L p b n đ gi i h n c a geneậ ả ồ ớ ạ ủ
- Phát hi n các đ t bi n m t đo n, đ t bi n đi m trên gene.ệ ộ ế ấ ạ ộ ế ể
Kĩ thu t Southern blotậ