Bài th c hành 2ự: PROTEIN
Tên thí
nghi mệNguyên t cắCách ti n hànhếHi n t ngệ ượ Gi i thíchả
Thí
nghi mệ
1: Ph nả
ngứ
Biure
đ cặ
tr ngư
cho liên
k tế
peptit.
Đây là ph nả
ng đ cứ ặ
tr ng c aư ủ
liên k tế
peptide
(CO-NH-)
Trong môi
tr ngườ
ki m, cácề
h p ch t cóợ ấ
ch a t haiứ ừ
liên k tế
peptide trở
lên có thể
ph n ngả ứ
v i CuSOớ4
t o thànhạ
ph c ch tứ ấ
màu xanh
tím, tím, tím
đ hay đ .ỏ ỏ
C ng đườ ộ
màu thay
đ i tùyổ
thu c vàoộ
đ dàiộ
m chạ
peptide
Ph n ngả ứ
này th ngườ
ng nghi m 1Ố ệ (ph nả
ng v i biure): cho vàoứ ớ
ng nghi m khô m t ítố ệ ộ
tinh th ure, đun trênể
ng n l a đèn c n. Lúcọ ử ồ
đ u ure nóng ch y,ầ ả
đ n khi b t đ u c ngế ắ ầ ứ
l i thì ng ng đun. Quáạ ừ
trình này t o ra Biure,ạ
acide cianuric và
amoniac. Đ ngu i,ể ộ
thêm vào 1-2ml dung
d ch NaOH 10%. L cị ắ
đ u c n th n, thêmề ẩ ậ
t ng gi t dung d chừ ọ ị
CuSO4 1% s t oẽ ạ
thành dung d ch, l c kĩị ắ
và quan sát màu. (chú ý
không cho quá nhi uề
CuSO4 vì màu xanh
c a Cu(OH)ủ2 đ c t oượ ạ
thành có th l n átể ấ
màu ph n ng).ả ứ
ng nghi m 2Ố ệ (ph nả
ng v i protein): choứ ớ
vào ng nghi m 1mlố ệ
lòng tr ng tr ng gàắ ứ
1%, thêm vào 1-2ml
dung d ch NaOH 10%.ị
L c đ u c n th n,ắ ề ẩ ậ
ng nghi m 1: dungố ệ
d ch chuy n t khôngị ể ừ
màu sang màu tím
h ng ồ
ng nghi m 2: dungố ệ
d ch chuy n t khôngị ể ừ
màu sang màu tím
nâu.
−C u trúc urê, biuret và peptide.ấ
-Thu c th c a ph n ng màu biure là dung d ch NaOH và CuSOố ử ủ ả ứ ị 4,
đôi khi nó còn đ c g i là tác ch t biureượ ọ ấ
−Tuy nhiên ch biure đây không ph i là thu c th có ch aữ ở ả ố ử ứ
biure mà là vì c biure và protein đ u cho ph n ng màu gi ngả ề ả ứ ố
nhau v i NaOH và CuSOớ4, C ng đ màu thay đ i tùy thu c vàoườ ộ ổ ộ
đ dài m ch peptideộ ạ
−Ph n ng so màu Biure, liên k t peptide v i Cuả ứ ế ớ 2+ trong MT
ki m, là ph n ng đ c tr ng đ nh n bi t proteinề ả ứ ặ ư ể ậ ế
Ph ng trình ph n ng :ươ ả ứ
đ c ngượ ứ
d ng đụ ể
đ nh l ngị ượ
protein
thêm t ng gi t dungừ ọ
d ch CuSOị4 1% s t oẽ ạ
thành dung d ch, l c kĩị ắ
và quan sát màu.
Trong lòng tr ng tr ng gà có anbumin là protein (polypeptit cao phânắ ứ
t ) có liên k t peptide -CO-NH- nh trong biure nên cũng cho ph nử ế ư ả
ng biure t o ph c h p mu i Cuứ ạ ứ ợ ố 2+ v i anbumin có màu tím nâu.ớ
Thí
nghi mệ
2: Ph nả
ng k tứ ế
t a th nủ ậ
ng chị
b ngằ
m iố
(NH4)2S
O4.
Protein có
th b k tể ị ế
t a b iủ ở
mu i trungố
tính là
(NH4)2SO4
ho c làặ
NaCl bão
hòa. Đây là
ph n ngả ứ
k t t aế ủ
thu nậ
ngh chị
không làm
m t ho tấ ạ
tính sinh
h c c aọ ủ
protein nên
th ngườ
đ c sượ ử
d ng đụ ể
tách chi tế
Cho vào ng nghi mố ệ
5ml lòng tr ng tr ngắ ứ
gà, thêm 5ml
mu i(NHố4)2SO4 cho
đ n khi bão hòa, l cế ắ
đ u, th y xu t hi nề ấ ấ ệ
k t t a globulin đ 5ế ủ ể
phút, l c b k t t aọ ỏ ế ủ
(th m t gi y l cấ ướ ấ ọ
b ng dung d chằ ị
(NH4)2SO4) vào m tộ
ng nghi m khác.ố ệ
Cho vào d ch l c 3gị ọ
tinh th (NHể4)2SO4
(n u d ch l c là 4ml)ế ị ọ
cho đ n khi dung d chế ị
bão hòa, l c, albuminắ
k t t a, l c, thu k tế ủ ọ ế
t a.ủ
Cho riêng k t t aế ủ
globulin và albumin
vào 2 ng nghi mố ệ
Khi cho dd (NH4)2SO4
b o hòa vào proteinả
tr ng th y xu t hi nứ ấ ấ ệ
k t t a tr ng.ế ủ ắ
Khi l c, k t t a tr ngọ ế ủ ắ
b gi l i (chính làị ữ ạ
globulin)
Dung d ch n c l cị ướ ọ
khi cho tinh thể
(NH4)2SO4 vào có
hi n t ng k t t aệ ượ ế ủ
tr l i (chính làở ạ
albumin).
ng ch a k t t aỐ ứ ế ủ
globulin,sau khi cho
n c c t vào thì k tướ ấ ế
t a ủtan t từ ừ trong
n c c t.ướ ấ
ng ch a k t t aỐ ứ ế ủ
albumin,sau khi cho
n c c t vào thì k tướ ấ ế
t a ủtan ngay trong
Trong protein tr ng có c albumin và globulin. Đây là nh ng proteinứ ả ữ
mang tính axit y u. đi u ki n bình th ng, trong tr ng thái dungế Ở ề ệ ườ ạ
d ch, phân t P tích đi n -, bên ngoài đ c bao b i m t l p áo n cị ử ệ ượ ở ộ ớ ướ
v i đ u + quay vào và đ u – quay ra, nên l l ng trong môi tr ng.ớ ầ ầ ơ ữ ườ
Khi cho các mu i (NHố4)2SO4 có n ng đ cao vào, thì mu i s t o cácồ ộ ố ẽ ạ
ion NH4+ và SO42-. Các ion này s trung hòa các ti u phân t proteinẽ ể ử
tr ng đ ng th i l y l p áo n c bên ngoài t o ra hi n t ng t a. ứ ồ ờ ấ ớ ướ ạ ệ ượ ủ
S dĩ globulin t o k t t a tr c vì nó có tr ng l ng phân t l n, l pở ạ ế ủ ướ ọ ượ ử ớ ớ
áo n c bên ngoài l n nên t o các ion NHướ ớ ạ 4+ và SO42- d và nhanh d nễ ẫ
đ n s trung hòa đi n gây ra t a.ế ự ệ ủ
Khi l c, ta đ c dung d ch bán b o hòa albumin. Nên khi cho tinh thọ ượ ị ả ể
(NH4)2SO4 vào t c làm cho dung d ch l c tr ng thái b o hòa, lúc nàyứ ị ọ ở ạ ả
albumin có hi n t ng k t t a.ệ ượ ế ủ
Khi cho n c c t vào c 2 ng nghi m thì n c lo i b các y u tướ ấ ả ố ệ ướ ạ ỏ ế ố
gây k t t a.ế ủ
Globunlin v n d ng k t t a,đó là do Globulin đã b bi n tính,khôngẫ ở ạ ế ủ ị ế
quay v tr ng thái dung d ch keo ngay đ c (hi n t ng k t t a khôngề ạ ị ượ ệ ượ ế ủ
thu n ngh ch).ậ ị
Albumin sau khi đ c lo i b các y u t gây k t t a thì tr v tr ngượ ạ ỏ ế ố ế ủ ở ề ạ
thái dung d ch keo nh ban đ u, k t t a tan hoàn toàn (hi n t ng k tị ư ầ ế ủ ệ ượ ế
t a thu n ngh ch).ủ ậ ị
enzyme. t ng ng, thêm vào 2ươ ứ
ng t 2-3ml n cố ừ ướ
c t, l c đ u, so sánhấ ắ ề
s hòa tan k t t a.ự ế ủ
n c c t.ướ ấ So v i albumin, globulin có đ tan kém h n nên k t t a tr c, khi hòaớ ộ ơ ế ủ ướ
tan s tan ch m h n.ẽ ậ ơ
Thí
nghi mệ
3: ph nả
ng k tứ ế
t aủ
b ngằ
dung môi
h u c .ữ ơ
Trong môi
tr ngườ
trung tính
ho c acid,ặ
protein sẽ
b k t t aị ế ủ
b i cácở
dung môi
h u c nhữ ơ ư
acetone,
ethanol,
eter.
Cho vào ng nghi mố ệ
2ml dung d ch lòngị
tr ng tr ng gà, thêmắ ứ
t ng gi t 2ml c n, l cừ ọ ồ ắ
m nh, đ yên s xu tạ ể ẽ ấ
hi n k t t a. g n bệ ế ủ ạ ỏ
ph n n c trong thêmầ ướ
n c c t vào k t t aướ ấ ế ủ
ghi nh n hi n t ng,ậ ệ ượ
gi i thích.ả
Khi cho n c c t vàoướ ấ
k t t a thu đ c thìế ủ ượ
k t t a tan.ế ủ
Đ hòa tan c a protein trong dung d ch ph thu c vào nhi u y u t ,ộ ủ ị ụ ộ ề ế ố
m t trong s đó là h ng s đi n môi c a dung d ch. Nhìn chung, nh ngộ ố ằ ố ệ ủ ị ữ
phân t dung môi có h ng s đi n môi l n (nh n c,ử ằ ố ệ ớ ư ướ
dimethylsulphoxid) có th n đ nh t ng tác gi a chúng v i các phânể ổ ị ươ ữ ớ
t protein và t o đi u ki n thu n l i cho s hòa tan c a protein trongử ạ ề ệ ậ ợ ự ủ
dung d ch. Ng c l i, các dung môi v i h ng s đi n môi nh (aceton,ị ượ ạ ớ ằ ố ệ ỏ
ethanol…) ngăn c n s phân tán c a các phân t protein trong môiả ự ủ ử
tr ng. Do đó, đ hòa tan c a nh ng phân t protein gi m và x y raườ ộ ủ ữ ử ả ả
k t t a do s làm gi m h ng s đi n môi hi n h u c a môi tr ng.ế ủ ự ả ằ ố ệ ệ ữ ủ ườ
Đi u này có đ c b ng cách thêm m t dung môi hòa tan trong n cề ượ ằ ộ ướ
nh aceton vào dung d ch ch a protein.ư ị ứ
Bài th c hành 3ự: GLUXIT
Tên thí
nghi mệNguyên t cắCách ti n hànhếHi n t ngệ ượ Gi i thíchả
Thí nghi mệ
1: tính khử
c a đ ngủ ườ
monosacha
Thu c th Fehling là dungố ử
d ch CuSOị4 v i dung d chớ ị
NaOH, hình
thànhCu(OH)2. Khi đun
Cho vào m tộ
ng nghi mố ệ
s ch 1ml dungạ
d ch glucoseị
Có k t t a đế ủ ỏ
nâu (Cu2O)
xu t hi n d iấ ệ ướ
đáy ngố
Glucozo là h p ch t ợ ấ h u c t p ch c có c u t o c a r u đa ch c vàữ ơ ạ ứ ấ ạ ủ ượ ứ
andehit đ n ch c, có CTHH nh sau:ơ ứ ư
ride (ph nả
ng v iứ ớ
thu c thố ử
Fehling )
nóng s t o thànhẽ ạ
Cu(OH)2 có màu đen.
Cu(OH)2 CuO + H2O
Tuy nhiên khi có m t h pặ ợ
ch t kh (nh glucose) sấ ử ư ẽ
xu t hi n Cuấ ệ 2O k t t aế ủ
màu đ nâu.ỏ
Cu(OH)2 + Glucose
Cu2O + Gluconic + H2O
1%, thêm vào
ng nghi mố ệ
1ml thu c thố ử
Fehling, l cắ
đ u, đun cáchề
th y 5 phút,ủ
quan sát th yấ
k t t a đ nâuế ủ ỏ
c a Cuủ2O.
nghi m.ệ
Tron
g môi tr ng ki mườ ề , đun nóng,Glucozo là monosaccarit th hi n tínhể ệ
khử. Kh Cuử2+ thành Cu+, ch c anđêhit b oxi hóa thành axit ho c mu iứ ị ặ ố
t ng ngươ ứ (Tính ch t c a anđehit)ấ ủ
Khi tác d ng v i glu (HO–CHụ ớ 2–(CHOH)4–CH=O, có ch a g cứ ố
andehyte) ho c các ch t ch a g c andehyte, thu c th này ( thu c thặ ấ ứ ố ố ử ố ử
Fehling, mu i tactrat có vai trò t o ph c v i Cuố ạ ứ ớ 2+ t o ion ph cạ ứ
[Cu(C4H4O6)2]2–(khi n Fehling có màu xanh l ) nh m ngăn c n s t oế ơ ằ ả ự ạ
thành k t t a Cu(OH)ế ủ 2 trong thu c th ) t o k t t a Cuố ử ạ ế ủ 2O đ . Ph nỏ ả
ng x y ra khi đun nóng:ứ ả
2Na2[Cu(C4H4O6)2] + NaOH + R–CHO + H2O
→ Cu2O + R–COONa + 2H2C4H4O6 + 2Na2C4H4O6