Vibrio cholerae real-time PCR

Hướng dẫn này trình bày quy trình xét nghiệm Vibrio cholerae bằng kỹ thuật Real-time PCR, bao gồm mục đích, nguyên lý, chuẩn bị, các bước tiến hành và nhận định kết quả.

Quy trình này dành cho nhân viên xét nghiệm vi sinh và sinh học phân tử, những người thực hiện xét nghiệm Vibrio cholerae bằng kỹ thuật Real-time PCR.

Quy trình xét nghiệm Vibrio cholerae bằng Real-time PCR được thực hiện để xác định sự hiện diện của gen đặc trưng của vi khuẩn trong mẫu phân.

**Các bước thực hiện:**

1. **Chuẩn bị:**
* **Nhân sự:** Cần nhân viên xét nghiệm đã được đào tạo về vi sinh hoặc sinh học phân tử. Người phê duyệt kết quả phải có trình độ đại học trở lên trong các chuyên ngành liên quan.
* **Thiết bị:** Bao gồm tủ an toàn sinh học cấp 2, máy Real-time PCR, máy ly tâm, máy vortex, pipette và các thiết bị khác.
* **Hóa chất và vật tư tiêu hao:** Cần chuẩn bị lọ đựng bệnh phẩm, panh, khay đựng bệnh phẩm, tube đựng bệnh phẩm, găng tay, sinh phẩm chẩn đoán, kit tách chiết DNA, ống Eppendorf, đầu côn, ethanol, nước DEPC, giấy thấm, giấy xét nghiệm, sổ lưu kết quả, bút viết, mũ, khẩu trang, quần áo và các dung dịch khử trùng.
2. **Lấy bệnh phẩm:**
* Bệnh phẩm là mẫu phân và cần được lấy theo đúng quy định của chuyên ngành vi sinh.
* Phiếu xét nghiệm cần điền đầy đủ thông tin.
3. **Tiến hành kỹ thuật:**
* Tách chiết DNA tổng số từ mẫu bệnh phẩm.
* Thực hiện phản ứng Real-time PCR.
* Phân tích và đánh giá kết quả dựa trên đồ thị huỳnh quang.
* In và trả kết quả.
4. **Nhận định kết quả:**
* Chứng dương phải có đồ thị huỳnh quang trên đường giới hạn cơ bản.
* Chứng âm không có đồ thị huỳnh quang.
* Mẫu có thể có hoặc không có đồ thị huỳnh quang trên đường giới hạn cơ bản, tùy thuộc vào kết quả.
5. **Xử lý sai sót:**
* Nếu chứng dương và chứng âm không đúng, cần kiểm tra lại master mix, chứng dương và quá trình tách DNA, sau đó thực hiện lại xét nghiệm.
* Nếu đồ thị huỳnh quang của mẫu xuất hiện ngoài chu kỳ thứ 40, cần kiểm tra và đánh giá lại mẫu một cách cẩn thận.