Bài giảng Simple cloning - Nguyễn Vũ Phong

Chia sẻ: Sơn Tùng | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:55

Thêm vào BST

Báo xấu

56
lượt xem 5
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Bài giảng "Simple cloning" cung cấp cho người học các kiến thức: Vector pUC, vai trò của các gene, cấu trúc của các gen, cắt vector và DNA, nối bằng ligase được, chuyển tất cả cấu trúc vào E.coli, chọn dòng mang DNA tái tổ hợp, vector nhân tạo đầu tiên, tế bào chủ, tính chất của tế bào chủ, nhân dòng sản phẩm PCR,... Mời các bạn cùng tham khảo.

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Bài giảng Simple cloning - Nguyễn Vũ Phong

Simple cloning Tp. Hồ Chí Minh 24-9-2014
Vector pUC • Ori: vùng tự tái bản • ampR or bla (beta- lactamase) : gen kháng ampiciline • lacZ’: beta- galactosidase gene • MCS: multi cloning site • lacI: lac repressor gene
Vai trò của các gene • bla: mã hóa beta-lactamase, enzyme thủy phân vòng beta-lacta của ampiciline
Vai trò của các gene • lacZ’: mã hóa beta-galactosidase, enzyme thủy phân các đường đôi bao gồm X-gal tạo màu xanh
Cấu trúc của… (c) IPTG: isopropyl --D-thiogalactoside
Cắt vector và DNA
Nối bằng ligase được…
… hay…
… và cuối cùng là… … DNA tái tổ hợp (recombinant).
Chuyển tất cả cấu trúc vào E.coli • Hóa biến nạp (competence cell + thermal shock) • Điện biến nạp (electroporation)
Operon lacZ và IPTG
Operon lacZ và IPTG
Chọn dòng mang DNA tái tổ hợp + ampiciline + IPTG + XGal Blue + White Systems
Khẳng định dòng vi khuẩn mang DNA tái tổ hợp – Dùng enzyme cắt và điện di – Colony PCR (dùng primer chuyên biệt)
Yêu cầu cần có của Vector 1. Điểm khởi đầu nhân đôi (an origin of replication) 2. Chỉ thị chọn lọc (selectable marker) 3. Những trình tự nhận biết duy nhất của các RE (suitable single restriction sites) 4. Kích thước phù hợp (suitable size) 5. Chỉ thị nhận biết đoạn DNA chèn 6. Nhiều bản sao trong tế bào vật chủ 7. Tàn tật , không có khả năng chuyển sang tế bào vi khuẩn khác (loại bỏ những trình tự tham gia trong quá trình tiếp hợp)
Vector nhân tạo đầu tiên, pBR322
Polycloning vector • Chứa vùng polylinkers hay multicloning sites • Chứa đoạn DNA ngoại lai từ 3 -10 kb
Nhóm pUC
Nhóm pUC
Nhóm pGEM