zunia.vn

Tuyển sinh 2024 dành cho Gen-Z

zunia.vn

» Luận Văn - Báo Cáo

» Báo cáo khoa học

Bước đầu khảo sát tần số phân bố alen của gen D13S317

Chia sẻ: Sunshine_6 Sunshine_6 | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:5

Báo xấu

61
lượt xem 4
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Ngày nay, việc nghiên cứu ứng dụng các đoạn lặp, đặc biệt là các đoạn lặp ngắn (STR) trong hệ gen người đã trở thành phổ biến trong việc xác định cá thể người, xác định huyết thống cha con, truy tìm người mất tích qua hài cốt, xây dựng tàng thư gen tội phạm... để phục vụ các yêu cầu của tố tụng hình sự và dân sự. Các đoạn lặp của hệ STR thường có chiều dài 2-7 cặp bazơ [4]. ở mỗi cá thể khác nhau, số lượng đoạn lặp khác nhau, do vậy mà người ta...

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Bước đầu khảo sát tần số phân bố alen của gen D13S317

TCNCYH 23 (3) 2003 B−íc ®Çu kh¶o s¸t tÇn sè ph©n bè alen cña gen D13S317 Nghiªm Xu©n Dòng, TrÇn Minh §«n, L−¬ng ThÞ YÕn Côc Kü thuËt Hãa-Sinh Bé C«ng an D13S317 lµ ®o¹n ADN ®a h×nh cã tr×nh tù lÆp l¹i 4 ®«i baz¬ nit¬ n»m trªn nh¸nh dµi cña nhiÔm s¾c thÓ sè 13. Locus nµy chøa 9 alen, cã ®é dµi tõ 242 ®Õn 270bp. Ng−êi ta ®· x¸c ®Þnh ®−îc sè ®o¹n lÆp l¹i trong quÇn thÓ ng−êi lµ 7,8,9,10,11,12,13,14 vµ 15. Trong bµi nµy, b»ng kü thuËt PCR vµ ®iÖn di trªn b¶n gel polyacrylamide biÕn tÝnh, chóng t«i ®· x¸c ®Þnh s¬ bé tÇn suÊt c¸c allen cña locus D13S317. I. §Æt vÊn ®Ò - Sö dông kü thuËt ®iÖn di trªn gel Ngµy nay, viÖc nghiªn cøu øng dông c¸c Polyacrylamide biÕn tÝnh ®Ó x©y dùng thang ®o¹n lÆp, ®Æc biÖt lµ c¸c ®o¹n lÆp ng¾n (STR) allen cho locus di truyÒn D13S317 trong hÖ gen ng−êi ®· trë thµnh phæ biÕn trong - Kh¶o s¸t s¬ bé tÇn xuÊt allen cña locus viÖc x¸c ®Þnh c¸ thÓ ng−êi, x¸c ®Þnh huyÕt D13S17 ë mét sè ng−êi ViÖt Nam. thèng cha con, truy t×m ng−êi mÊt tÝch qua hµi cèt, x©y dùng tµng th− gen téi ph¹m... ®Ó phôc II. §èi t−îng vµ ph−¬ng ph¸p vô c¸c yªu cÇu cña tè tông h×nh sù vµ d©n sù. nghiªn cøu C¸c ®o¹n lÆp cña hÖ STR th−êng cã chiÒu 1. §èi t−îng dµi 2-7 cÆp baz¬ [4]. ë mçi c¸ thÓ kh¸c nhau, M¸u t−¬i ®−îc lÊy trùc tiÕp tõ nh÷ng ng−êi sè l−îng ®o¹n lÆp kh¸c nhau, do vËy mµ ng−êi khoÎ m¹nh, kh«ng cã quan hÖ hä hµng huyÕt ta coi ®©y lµ ®Æc ®iÓm c¬ b¶n ®Ó x¸c ®Þnh sù thèng. C¸c c¸ thÓ nµy lµ ng−êi ViÖt ®−îc ph©n kh¸c biÖt gi÷a ng−êi nµy víi ng−êi kh¸c [3]. bè ë c¸c vïng ®Þa lý kh¸c nhau. ¦u ®iÓm cña c¸c ®o¹n lÆp l¹i ng¾n lµ kh¸ bÒn v÷ng, cã thÓ thùc hiÖn nh©n gen tæ hîp cña c¸c 2. Ph−¬ng ph¸p ®o¹n gen kh¸c nhau trong cïng mét ph¶n øng a. T¸ch chiÕt ADN vµ phï hîp víi c¸c mÉu h×nh sù [2]. Gen D13S317 lµ gen cã nh÷ng ®Æc ®iÓm nh− vËy. TiÕn hµnh t¸ch theo ph−¬ng ph¸p dïng phenol vµ chloroform [5]. Sö dông kü thuËt PCR vµ ®iÖn di chóng t«i ®· x¸c ®Þnh ®−îc c¸c alen cña gen D13S317 S¶n phÈm ADN sau khi t¸ch ®−îc x¸c ®Þnh [1]. nång ®é b»ng quang phæ kÕ, kÕt qu¶ cho thÊy: Môc tiªu nghiªn cøu: - Nång ®é tèi thiÓu: 10,5ng/µl - Nghiªn cøu c¸c ®iÒu kiÖn PCR tèi −u ®Ó - Nång ®é tèi ®a: 290,5ng/µl nh©n béi ®o¹n gen D13S317. - Nång ®é trung b×nh: 150ng/µl 81
TCNCYH 23 (3) 2003 §é tinh s¹ch trung b×nh tÝnh b»ng chØ sè OD - Thùc hiÖn ph¶n øng nh©n gen trªn m¸y trªn 1,75; ®¶m b¶o chÊt l−îng cho c¸c nghiªn Geneamp-PCR System 9700 cña h·ng Perkin cøu tiÕp theo. Elmer (Mü) hoÆc m¸y Eppendorf (Mü). b. Ph¶n øng nh©n gen (PCR) Chu tr×nh nhiÖt: - Sö dông ®o¹n måi ®Æc hiÖu cho locus 95o - 5 phót x 1 chu kú D13S317 do h·ng Geneset Singapore Biotech 58o - 1 phót cung cÊp. 72o - 1 phót x 35 chu kú - Taq-polymerase, 10X PCR buffer vµ dNTPs cña h·ng Pharmacia. 94o - 1 phót - Hçn hîp ph¶n øng PCR: 58o - 1 phót x 1 chu kú 10X PCR Buffer : 2,5µl 72o- 10 phót dNTPs : 2,5µl 4o Måi xu«i : 1,0µl c. §iÖn di vµ x¸c ®Þnh alen * Kü thuËt ®iÖn di: Måi ng−îc : 1,0µl C¸c mÉu sau khi thùc hiÖn qu¸ tr×nh PCR Taq : 0,2µl ®· ®−îc kiÓm tra trªn gel agaroza 2% sau ®ã dH2O : 16,8µl ®−îc ®iÖn di trªn gel polyacrylamide 6% sö dông ure 7M. B¨ng ADN ®−îc ph¸t hiÖn b»ng ADN khu«n : 1,0µl ph−¬ng ph¸p nhuém b¹c cña Bassam, 1991 [6]. H×nh 1: KiÓm tra s¶n phÈm PCR trªn gel agaroza 2% * Chän läc vµ x©y dùng thang alen-x¸c ®Þnh alen: b¨ng ADN cã träng l−îng ph©n tö cao nhÊt). - §¸nh sè alen theo quy −íc riªng: Dùa vµo ViÖc ®¸nh sè ë ®©y chØ mang tÝnh quy −íc sao c¸c alen quan s¸t ®−îc cña c¸c mÉu kh¸c nhau cho mçi alen x¸c ®Þnh ®−îc cã ký hiÖu riªng, v× trªn b¶n ®iÖn di, chóng t«i chän ra c¸c mÉu ®©y lµ qu¸ tr×nh kh¶o s¸t ban ®Çu ch−a cã thang mang c¸c alen kh¸c nhau vµ ®¸nh sè alen theo alen chuÈn ®Ó so s¸nh. thø tù tõ d−íi lªn trªn (®¸nh sè alen tõ b¨ng ADN cã träng l−îng ph©n tö thÊp nhÊt ®Õn 82
TCNCYH 23 (3) 2003 - X©y dùng thang alen: Trong qu¸ tr×nh ®¸nh chuÈn theo tµi liÖu nghiªn cøu ë mét nhãm sè, chóng t«i ®ång thêi chän ra nh÷ng mÉu ng−êi ViÖt Nam sau ®ã ký hiÖu l¹i c¸c alen dùa mang nh÷ng alen kh¸c nhau tËp hîp l¹i ®Ó t¹o vµo tÇn suÊt t−¬ng ®−¬ng. thang alen. Thang alen ®−îc t¹o b»ng ph−¬ng III. KÕt qu¶ ph¸p trén mÉu. 1. KÕt qu¶ chän läc alen vµ t¹o thang alen - ChuÈn thang alen: ký hiÖu l¹i c¸c alen ®· kh¶o s¸t ®−îc theo quy −íc quèc tÕ. Alen cña Sö dông c¸c ph−¬ng ph¸p ®· nªu, b−íc ®Çu locus D13S317 ®−îc ký hiÖu tõ 7 ®Õn 15 c¨n cø chóng t«i ®· t¹o ®−îc thang alen chuÈn cho vµo sè ®o¹n lÆp cña mçi alen. locus D13S317. Thang alen nµy (ký hiÖu LD) bao gåm 8 alen kh¸c nhau (h×nh 2) ®−îc ký Chóng t«i tiÕn hµnh chuÈn thang alen nh− hiÖu tõ alen sè 8 ®Õn alen sè 15 theo ph−¬ng sau: lÊy kÕt qu¶ tÇn suÊt alen tÝnh ®−îc so s¸nh ph¸p chuÈn alen ®· nªu. víi tÇn suÊt alen ®· kh¶o s¸t b»ng thang alen H×nh 2. Thang alen chuÈn cña locus D13S317 víi 8 alen kh¸c nhau ®−îc ph©n t¸ch b»ng kü thuËt ®iÖn trªn gel PA biÕn tÝnh. 2. KÕt qu¶ tÝnh tÇn suÊt alen cña locus D13S317 KÕt qu¶ kh¶o s¸t cña chóng t«i Allen 7 8 9 10 11 12 13 14 15 Sè l−îng 0 100 31 24 62 50 12 2 1 TÇn suÊt % 0 35.46 10.99 8.51 21.98 17.73 4.25 0.7 0.35 KÕt qu¶ kh¶o s¸t cña n−íc ngoµi ®èi víi ng−êi ViÖt Nam Allen 7 8 9 10 11 12 13 14 15 TÇn suÊt % 0.3 29.5 16.6 12.4 23.0 15.2 2.8 0.3 0 Tæng sè mÉu ®−îc kh¶o s¸t : 141 -Sè c¸ thÓ dÞ hîp tö : 112 -Sè c¸ thÓ ®ång hîp tö : 29 83
TCNCYH 23 (3) 2003 -Sè allen x¸c ®Þnh ®−îc : 8allen ( ký hiÖu tõ dùng ®−îc thang alen cho locus di truyÒn allen sè 8 ®Õn allen sè 15) D13S317. Thang alen t¹o ®−îc gåm 8 alen kh¸c nhau ký hiÖu tõ alen sè 8 ®Õn 15. -Allen cã tÇn suÊt cao nhÊt lµ allen sè 8 : 35,46% 3. §· kh¶o s¸t s¬ bé tÇn suÊt alen cña locus D13S317 ë 141 mÉu ADN ng−êi ViÖt Nam dùa -Allen cã tÇn suÊt nhá nhÊt lµ allen sè 15 : vµo thang alen t¹o ®−îc. 0.35% TÇn suÊt kh¶o s¸t thu ®−îc cao nhÊt ë alen IV. Bµn luËn sè 8,alen sè 7 ch−a thÊy xuÊt hiÖn trong sè mÉu Sö dông kü thuËt PCR vµ dïng ®«i måi ®Æc ®· kh¶o s¸t. hiÖu chóng t«i ®· nh©n béi ®−îc ®o¹n gen di Tµi liÖu tham kh¶o truyÒn D13S317 cã ®é dµi tõ 242 ®Õn 270 bp 1. Budowle B., Safantila A., Hochmeister S¶n phÈm PCR ®−îc ®iÖn di trªn gel M. N., and Comey C. T. (1994): The agaroza 2%. KÕt qu¶ ®iÖn di cho thÊy ®iÖn di application of PCR to forensic science, The trªn gel agarose c¸c b¨ng ADN hiÖn rÊt râ PCR. 244-256. nh−ng kh¶ n¨ng ph©n t¸ch c¸c ®o¹n lÆp l¹i 4 bp kh«ng cao. [5] 2. Hammond H. at al. (1994): Evaluation of 13 short tandem repeat loci for use in Sö dông kü thuËt ®iÖn di trªn gel personal identification application, Am.J. Hum. polyacrylamide biÕn tÝnh kÕt hîp víi ph−¬ng Genet, 55: 175. ph¸p nhuém b¹c [6] lµ ph−¬ng ph¸p thÝch hîp ®Ó ph©n t¸ch c¸c ®o¹n ADN c¸ch nhau 4 bp 3. Lewontin R. C., Hartl D.L. (1991): cña ®o¹n gen D13S317. Sö dông ph−¬ng ph¸p Population genetics in forensic DNA typing", nµy chóng t«i ®· chän ®−îc 8 allen kh¸c nhau Science. 254: 1745-1750. ®Ó x©y dùng thang allen chuÈn theo thang chuÈn quèc tÕ [7]. 4. Lygo. J. E., Johnson. P. E. J et al. (1994): The validation of short tandem repeat KÕt qu¶ kh¶o s¸t cho thÊy ë gen D13S317 (STR) loci for use in forensic casework. alen sè 8 cã tÇn suÊt cao nhÊt (35.46%),alen sè Int.J.Legal Med. 107: 77-89. 15 cã tÇn suÊt thÊp nhÊt (0.35%), ch−a thÊy xuÊt hiÖn alen sè 7. Tuy nhiªn sè liÖu nµy còng 5. Sambrook J., Fritsch E. F., Maniatis t−¬ng ®èi phï hîp víi sè liÖu kh¶o s¸t cña c¸c T. (1989): Molecular cloning -Vol 3, Cold t¸c gi¶ [7] khi kh¶o s¸t 16 gen hÖ STR cña Spring Harbor Laboratory Press, USA. E10 - quÇn thÓ ng−êi ViÖt. E12. V. KÕt luËn 6. Westermeier R. (1997): Electrophoresis in Practice, VCH A Wiley 1. §· lùa chän ®−îc qui tr×nh PCR tèi −u company, Federal Republic of Germany. 287- ®Ó nh©n ®o¹n gen di truyÒn D13S317 292 2. Sö dông s¶n phÈm PCR cïng kü thuËt 7. Technical manual (1999): Geneprint ®iÖn di trªn gel polyacrylamide biÕn tÝnh x©y fluorescent STR systems, Promega. 2-7, 36 –37. 84
TCNCYH 23 (3) 2003 Summary Primary determination of allele frequencies of D13S317 locus in Vietnamese population Repeated sequences in human genome especially short tandem repeat (STR) loci is used increasingly for forensic purpose including individualization, paternity testing, MIA (missing in action) casework and construction of criminal DNA profile. In comparison with the traditional methods, STR analysis has many advantages. STR loci consist of short repetitive sequence units of 2-7 base pair in length. The number of repetitive sequence units is usually different between individuals. This is a very important characteristic for individualization. Another advantages which makes STR loci become useful for forensic analysis is their stability under changing environmental conditions because of their short length. In addition, a PCR for multification of 2-3 STR loci of a DNA sample can be performed well in only one tube. D13S317 is a STR locus which located on the long hand of the chromosome No 13. The locus contains 9 alleles singed after their number of repeat units as 7, 8, 9, 10 ,11, 12, 13, 14, 15. In this report, PCR technique and denaturing polyacrylamide gel electrophoresis were applied for determination of allele frequencies of D13S317 locus. The data investigated among 141 Vietnamese DNA samples shows the highest frequency at allele No 8 (35.46%). Allele No 7 has not been observed. 85

CÓ THỂ BẠN MUỐN DOWNLOAD

LV.15: Bộ Đồ Án Tốt Nghiệp Chuyên Ngành Cơ Khí

65 tài liệu

2430 lượt tải

THÔNG TIN

TRỢ GIÚP

HỖ TRỢ KHÁCH HÀNG

Theo dõi chúng tôi

Chịu trách nhiệm nội dung:

Nguyễn Công Hà - Giám đốc Công ty TNHH TÀI LIỆU TRỰC TUYẾN VI NA

LIÊN HỆ

Địa chỉ: P402, 54A Nơ Trang Long, Phường 14, Q.Bình Thạnh, TP.HCM

Hotline: 093 303 0098

Email: support@tailieu.vn

Giấy phép Mạng Xã Hội số: 670/GP-BTTTT cấp ngày 30/11/2015 Copyright © 2022-2032 TaiLieu.VN. All rights reserved.