Chương 3: Phương pháp nghiên cứu mô học

Chia sẻ: Nguyễn Đăng Khoa | Ngày: | Loại File: PPT | Số trang:45

Thêm vào BST

Báo xấu

235
lượt xem 51
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Một mẫu mô được cố định tốt khi những tế bào cấu tạo nên mô đó vẫn giữ nguyên hình dáng, thể hiện được nhiều chi tiết và cấu trúc, đồng thời giữ được mối liên quan tương hỗ trong tế bào và mô giống như còn sống. Mô có thể được cố định bằng nhiều phương pháp: Vật lí : nhiệt độ. Hóa học: các loại hóa chất

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Chương 3: Phương pháp nghiên cứu mô học

CHƯƠNG 3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU MÔ HỌC
Tại sao phải nghiên cứu mô học?  Vai trò của mô học trong công tác nghiên  cứu về thủy sản như thế nào? Mô học hiện nay đã phát triển như thế  nào?
Lịch sử nghiên cứu mô học  TK XVII TK XIX Hiện nay Được công Bắt đầu nhận, phát Phát triển nghiên cứu triển mạnh nhiều kĩ mô học vào cuối tk thuật mới 19
Phương pháp nghiên cứu mô học Qui trình cơ bản trong nghiên cứu mô  học: Cố định mẫu 1. Xử lí mẫu 2. Nhuộm mẫu 3. Đọc mẫu mô 4.
Cố định mẫu: 1. Tại sao phải cố định mẫu? Mẫu mô hay cơ quan của cá hoặc tôm sau khi  tách ra khỏi cơ thể sẽ chết đi và trải qua quá trình hoại tử và nhanh chóng tan rã (trump et al., 1980) Vì vậy cần phải ngăn chặn sự hoại tử và tan rã  đó bằng việc cố định nhanh và ít gây ra sự thay đổi cấu trúc nhất.
Mục tiêu cố định mẫu:  Ngăn chặn sự hoại tử và tan rã  Làm các tổ chức mô giữ vững cấu trúc trong suốt quá trình xử lý và nhuộm mẫu bằng nhiều loại hóa chất khác nhau.
Một mẫu mô được cố định tốt khi những  tế bào cấu tạo nên mô đó vẫn giữ nguyên hình dáng, thể hiện được nhiều chi tiết và cấu trúc, đồng thời giữ được mối liên quan tương hỗ trong tế bào và mô giống như còn sống
Mô có thể được cố định bằng nhiều  phương pháp: Vật lí : nhiệt độ  Hóa học: các loại hóa chất 
Các loại hóa chất cố định  Bouin:  AFA Davidson:  Formol trung tính (10%): 
Việc chọn dung dịch cố định phụ thuộc  vào mục đích nghiên cứu Thí dụ:  Sử dụng bouin trong nghiên cứu sự phát triển tuyến sinh dục  Sử dụng AFA để cố định mẫu mo bệnh học trên tôm…
Phương pháp cố định  Kích thước mẫu có ảnh hưởng đến hiệu quả cố định  Tuy nhiên, độ dày của mẫu có tính quyết định đến hiệu quả cố định
Đối với loại dung dịch cố định có khả  năng ngấm kém, chiều dày mẫu mô không quá 12mm Nếu dung dịch có khả năng ngấm mạnh  và sâu thì chiều dài của nó không quá 5mm
Thể tích dung dịch cố định: thể tích dung  dịch cố định cần lớn hơn nhiều so với thể tích mẫu mô (ít nhất 50 lần) Thời gian cố định: thời gian cố định phụ  thuộc vào từng loại dung dịch cố định, thường dao động từ 24h
Nhiệt độ cố định: Nhiệt độ cao làm tăng  và lạnh làm chậm khả năng ngấm của dung dịch cố định. Đối với loại dung dịch cố định dễ bay hơi nên tiến hành ở nhiệt độ thấp.
Quá trình pha hóa chất cố định nên thực  hiện trong tủ hút Sau khi cố định thì mẫu cần phải được  rửa (dung dịch cố định có thể làm thay đổi tính bắt màu của tế bào)
Thời gian rửa bằng với thời gian cố định  Có thể rửa bằng nước hoặc cồn. 
Cắt tỉa, định hướng mô  Mục đích: Định hướng những mô cần quan sát.  Mẫu mô có thể được cắt bỏ những phần không cần thiết, giúp tiết kiệm thời gian trong quan sát
Qui trình xử lý mẫu 1. Loại nước 2. Làm trong mẫu 3. Ngấm paraffin
1. Loại Nước Việc khử nước phải đảm bảo nguyên tắc  là loại bỏ hết nước trong mô mà không làm tế bào bị biến dạng hoặc không làm vị trí của thành phần cấu tạo tế bào trong mô bị thay đổi
Quá trình loại nước được thực hiện bằng  cách nhúng mẫu mô qua hàng loạt các dung dịch cồn có nồng độ từ thấp đến cao. Thời gian khử nước tùy theo độ dày của mẫu mô Ví dụ: xử lí mẫu qua cồn 507095100