Đặc điểm sinh học chủng Edwardsiella ictaluri bị đột biến gen aroA dùng làm vacicne phòng bệnh gan thận mủ ở cá tra (Pangasianodon Hypophthalmus)

Tạp chí Khoa học - Công nghệ Thủy sản<br /> <br /> Số 1/2015<br /> <br /> KEÁT QUAÛ NGHIEÂN CÖÙU ÑAØO TAÏO SAU ÑAÏI HOÏC<br /> <br /> ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA CHỦNG EDWARDSIELLA ICTALURI<br /> BỊ ĐỘT BIẾN GEN aroA DÙNG LÀM VACCINE PHÒNG BỆNH GAN<br /> THẬN MỦ Ở CÁ TRA (PANGASIANODON HYPOPHTHALMUS)<br /> BIOLOGICAL CHARACTERISTICS OF aroA GENE KNOCKED-OUT EDWARDSIELLA<br /> ICTALURI STRAIN USED FOR VACCINE PRODUCTION TO PREVENT THE DISEASE<br /> OF WHITE SPOTS IN THE INTERNAL ORGAN OF STRIPED CATFISH<br /> (PANGASIANODON HYPOPHTHALMUS)<br /> Hoàng Anh Tố Mai1, Võ Văn Nha2<br /> Ngày nhận bài: 24/9/2014; Ngày phản biện thông qua: 11/11/2014; Ngày duyệt đăng: 10/2/2015<br /> <br /> TÓM TẮT<br /> Nghiên cứu được tiến hành nhằm xác định các đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa và sinh trưởng của chủng vi<br /> khuẩn Edwardsiella ictaluri bị đột biến gen aroA (E. ictaluri ARO) từ chủng E. ictaluri gây bệnh gan thận mủ cá tra ở đồng<br /> bằng sông Cửu Long, Việt Nam (E. ictaluri WT). Kết quả nghiên cứu cho thấy chủng E. ictaluri ARO có đặc điểm hình thái,<br /> sinh lí, sinh hóa và sinh trưởng tương tự như chủng E. ictaluri WT. Chủng E. ictaluri ARO có thể nuôi cấy, bảo quản và tăng<br /> sinh khối để làm nguyên liệu sản xuất vaccine sống nhược độc phòng bệnh gan thận mủ cá tra sau này.<br /> Từ khóa: cá tra, Edwardsiella ictaluri đột biến gen aroA,gen aroA, vắc xin<br /> <br /> ABSTRACT<br /> The study was conducted to determine the morphological, physiological, biochemical, and growth of aroA gene<br /> knocked-out Edwardsiella ictaluri strain (E. ictaluri ARO). The results showed that the aroA gene knocked-out strain<br /> (E. ictaluri ARO) had similar phenotypes, physiological, biochemical, and growth characteristics as the wild-type WT.<br /> Further, the E. ictaluri ARO strain can be the culture, storage, and biomass for production of live attenuated vaccine to<br /> prevent the disease symptom of white spots in the internal organ of striped catfish.<br /> Keywords: Catfish Ca Tra, aroA gene knocked-out Edwardsiella ictaluri, aroA gene, vaccine<br /> I. ĐẶT VẤN ĐỀ<br /> Trên thế giới, các nghiên cứu đã phát hiện ra<br /> rằng vi khuẩn Edwardsiella ictaluri là một tác nhân<br /> gây bệnh quan trọng trên cá nheo (catfish) ở Mỹ, cá<br /> trê trắng ở Thái Lan và trên một số loài cá da trơn khác<br /> ở Indonesia, Trung Quốc. Ở Việt Nam, các nhà khoa<br /> học trong và ngoài nước cũng cho rằng E. ictaluri<br /> là một tác nhân gây bệnh gan thận mủ trên cá tra<br /> nuôi ở đồng bằng sông Cửu Long. Bệnh nhiễm<br /> khuẩn gây bởi E. ictaluri đã làm tổn thất lớn cho nghề<br /> nuôi cá da trơn ở Mỹ hàng năm từ 20-30 triệu USD<br /> (Thune và công sự, 1997). Ở Việt Nam, E. ictaluri<br /> làm chết cá tra nuôi từ 10-90%, gây thiệt hại lớn cho<br /> người nuôi cá tra hàng năm (Võ Văn Nha, 2010).<br /> <br /> 1<br /> 2<br /> <br /> Vi khuẩn E. ictaluri có đặc tính sinh miễn dịch rất<br /> mạnh. Khi sử dụng chủng vi khuẩn E. ictaluri đột<br /> biến gen aroA làm vaccine phòng bệnh ESC cho cá<br /> da trơn ở Mỹ, Thune và cộng sự (1999) cho thấy,<br /> tỷ lệ sống của cá đạt 77,3-94,4% khi được ngâm<br /> vaccine 2 lần (Thune và cộng sự, 1999). Nghiên<br /> cứu này đã cung cấp thêm căn cứ cho thấy khả<br /> năng bảo hộ của chủng E. ictaluri đột biến gen aroA<br /> bằng công nghệ đột biến gen là chấp nhận được.<br /> Năm 2010-2012, chương trình công nghệ sinh<br /> học cấp Nhà nước do Viện Nghiên cứu Nuôi trồng<br /> Thủy sản III chủ trì đã tạo được dòng E. ictaluri<br /> đột biến gen aroA (E. ictaluri ARO) nhược độc, có<br /> khả năng sinh đáp ứng miễn dịch, làm nguyên liệu<br /> <br /> Hoàng Anh Tố Mai: Cao học Sinh học thực nghiệm - Trường Đại học Khoa học Huế<br /> TS. Võ Văn Nha: Viện Nghiên cứu Nuôi trồng thủy sản III - Nha Trang<br /> <br /> 140 • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG<br /> <br /> Tạp chí Khoa học - Công nghệ Thủy sản<br /> sản xuất vaccine phòng bệnh gan thận mủ cá tra<br /> bằng công nghệ đột biến gen (knocked-out gene).<br /> Tuy nhiên, cho đến nay việc nghiên cứu đặc điểm<br /> sinh học của chủng E. ictaluri ARO chưa thấy có tài<br /> liệu đề cập. Nghiên cứu này nhằm xác định và so<br /> sánh đặc điểm sinh học chủng E. ictaluri ARO với<br /> chủng E. ictaluri ban đầu chưa đột biến để làm cơ<br /> sở nuôi cấy, bảo quản và tăng sinh khối chủng E.<br /> ictaluri ARO, phục vụ sản xuất vắc xin nhược độc<br /> phòng bệnh gan thận mủ cá tra.<br /> II.VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU<br /> 1. Vật liệu<br /> Chủng E. ictaluri bị đột biến gen aroA (E. ictaluri<br /> ARO) từ chủng E. ictaluri “hoang dại” chưa đột biến<br /> (E. ictaluri WT) có độc lực cao gây bệnh gan thận mủ<br /> cá tra Việt Nam được cung cấp bởi đề tài cấp Nhà<br /> nước ở Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản III.<br /> Môi trường phân lập, nuôi cấy tăng sinh, kiểm<br /> tra sinh hóa chủng vi khuẩn E. ictaluri (đột biến gen<br /> aroA và chưa đột biến gen aroA) đã được sử dụng,<br /> gồm: Môi trường nuôi cấy không chọn lọc BHIA<br /> (Brain Heart Infusion Agar), hãng Biorad - Mỹ và môi<br /> trường nuôi cấy chọn lọc EIM (Edwardsiella Ictaluri<br /> Medium) theo Shotts và Waltman (1990) cho phân<br /> lập chủng E. ictaluri; Môi trường BHIB (Brain Heart<br /> Infusion Broth), hãng Biorad - Mỹ được sử dụng để<br /> nuôi cấy tăng sinh chủng E. ictaluri; Kít API 20E (Bio<br /> Merieux – Pháp), kết hợp một số phản ứng sinh<br /> lý, sinh hóa truyền thống (KIA, Manitol, O/F, LDC,<br /> ODC, NaCl ở 0; 5; 10; 15; 20; 25; 30‰) được sử<br /> dụng để kiểm tra các chỉ tiêu sinh vật hóa học.<br /> Ngoài ra, một số hóa chất, kháng sinh:<br /> Kanamycin, colistin sulphate, mannitol 0,35%, thuốc<br /> nhuộm Gram (cồn, acetone, fucsine, crystian violet),<br /> chlorin, NaCl cũng đã được sử dụng trong nghiên<br /> cứu này.<br /> 2. Phương pháp nghiên cứu<br /> 2.1. Xác định các chỉ tiêu về hình thái của E. ictaluri<br /> Quan sát khuẩn lạc vi khuẩn E. ictaluri: Vi khuẩn<br /> được nuôi cấy trên môi trường BHIA (Peptone: 10<br /> g; Veal Brain heart extract: 12,5 g; Beef Brain heart<br /> extract: 5 g; NaCl: 5 g; Disodium phosphate: 2,5 g;<br /> Glucose: 2 g; Agar: 15 g; Nước cất cho đủ 1000 ml)<br /> ở nhiệt độ 280C, sau 48 giờ, quan sát hình dạng,<br /> màu sắc khuẩn lạc bằng mắt thường và đo kích<br /> thước khuẩn lạc bằng thước đo có độ chính xác<br /> đến mm.<br /> Hình dạng, kích thước vi khuẩn E. ictaluri: Được<br /> xác định bằng phương pháp nhuộm Gram (Barrow<br /> and Feltham, 1993), soi và đo kích thước vi khuẩn<br /> <br /> Số 1/2015<br /> trên kính hiển vi (Olympus CX 31, Nhật) có gắn trắc<br /> vi thị kính, quan sát ở độ phóng đại 1000 lần.<br /> 2.2. Xác định đặc điểm sinh lý, sinh hóa của<br /> E. ictaluri<br /> Kiểm tra các đặc điểm sinh lý, sinh hóa: Sử<br /> dụng kít API 20E (Bio Merieux - Pháp) kết hợp một<br /> số phản ứng sinh lý, sinh hóa truyền thống (KIA,<br /> Mannitol, di động, oxidase, catalase, khả năng chịu<br /> mặn ở 0; 5; 10; 15; 20; 25; 30‰). Tính di động của vi<br /> khuẩn được quan sát bằng cách nhỏ một giọt nước<br /> lên lam kính, trải đều trên lam kính một ít vi khuẩn,<br /> đậy bằng lamen và quan sát bằng kính hiển vi ở độ<br /> phóng đại 1000 lần.<br /> Định danh vi khuẩn dựa vào hệ thống phân loại<br /> Bergey’s (Holt và công sự, 1994)<br /> 2.3. Xác định sự sinh trưởng của E. ictaluri<br /> Chủng E. ictaluri WT và chủng E. ictaluri ARO<br /> giữ đông ở -800C được đem nuôi cấy trên môi<br /> trường EIM, ủ ở 280C trong 48 giờ.<br /> Chọn khuẩn lạc đơn (có màu xanh lá, trong mờ)<br /> trên đĩa EIM đem cấy chuyền qua 5ml môi trường<br /> BHIB có bổ sung kháng sinh. Chủng E. ictaluri WT<br /> nuôi trong BHIB chứa 50 µg/ml colistin, chủng E.<br /> ictaluri ARO nuôi trong BHIB 50 µg/ml colistin và 50<br /> µg/ml kanamycin. Tiến hành nuôi cấy lắc ở 280C,<br /> 250 vòng/phút trong 24 giờ.<br /> Chuyển dịch tăng sinh vào bình tam giác chứa<br /> môi trường BHIB có nồng độ kháng sinh tương<br /> tự bước tăng sinh trong 5ml môi trường BHIB<br /> (50 µg/ml colistin đối với chủng E. ictaluri WT và 50 µg/ml<br /> colistin + 50 µg/ml kanamycin đối với chủng<br /> E. ictaluri ARO). Tiếp tục nuôi cấy lắc ở 280C,<br /> 250 vòng/phút trong 24 giờ.<br /> Ghi nhận giá trị đo mật độ tế bào (OD) sau mỗi<br /> 2 giờ/lần bằng máy so màu quang phổ (Spectro<br /> 2000, Labomed, Inc.) ở bước sóng 600 nm kết hợp<br /> với phương pháp đếm số khuẩn lạc phát triển trên<br /> môi trường BHIA theo Koch.<br /> <br /> Hình 1. Sơ đồ xác định đường cong sinh trưởng phát triển của<br /> chủng E. ictaluri đột biến gen aroA trong môi trường BHIB<br /> <br /> TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • 141<br /> <br /> Tạp chí Khoa học - Công nghệ Thủy sản<br /> III. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN<br /> 1. Đặc điểm hình thái<br /> Trên môi trường nuôi cấy BHIA, vi khuẩn<br /> E. ictaluri bị đột biến gen aroA (E. ictaluri ARO) cũng<br /> như vi khuẩn E. ictaluri hoang dại chưa bị đột biến<br /> <br /> Số 1/2015<br /> (E. ictaluri WT) đều phát triển chậm. Cụ thể, ở nhiệt<br /> độ 28 oC, sau 48 giờ nuôi cấy, khuẩn lạc vi khuẩn<br /> hình thành trên mặt đĩa thạch và hình dạng, kích<br /> thước vi khuẩn có các đặc điểm được thể hiện ở<br /> bảng 1 và hình 2, hình 3<br /> <br /> Bảng 1. Đặc điểm khuẩn lạc, hình dạng và kích thước chủng E. ictaluri bị đột biến gen aroA<br /> (E. ictaluri ARO) và chủng chưa bị đột biến gen aroA (E. ictaluri WT)<br /> TT<br /> <br /> Đặc điểm<br /> <br /> E. ictaluri WT<br /> <br /> E. ictaluri ARO<br /> <br /> 1<br /> <br /> Thời gian mọc khuẩn lạc (giờ)<br /> <br /> 24<br /> <br /> 24<br /> <br /> 2<br /> <br /> Hình dạng khuẩn lạc trên môi trường BHIA<br /> sau 48 giờ<br /> <br /> Dạng tròn, trơn, hơi lồi<br /> <br /> Dạng tròn, trơn, hơi lồi<br /> <br /> 3<br /> <br /> Màu sắc khuẩn lạc trên môi trường BHIA sau 48 giờ<br /> <br /> Màu trắng hơi mờ<br /> <br /> Màu trắng hơi mờ<br /> <br /> 4<br /> <br /> Kích thước khuẩn lạc trên BHIA sau 48 giờ (mm)<br /> <br /> 5<br /> <br /> Hình dạng vi khuẩn<br /> <br /> 6<br /> <br /> Khả năng sinh bào tử<br /> <br /> 7<br /> <br /> Kích thước vi khuẩn (µm)<br /> <br /> 8<br /> <br /> Bắt màu thuốc nhuộm Gram<br /> <br /> Kết quả từ bảng 1 cho thấy ở nhiệt độ 280C, sau<br /> 48 giờ nuôi cấy trên môi trường BHIA, đường kính<br /> khuẩn lạc và kích thước vi khuẩn chủng E. ictaluri bị<br /> đột biến gen aroA (E. ictaluri ARO) nhỏ hơn không<br /> đáng kể so với chủng chưa đột biến (E. ictaluri WT).<br /> <br /> 2,45 ± 0,270<br /> <br /> 2,25 ± 0,100<br /> <br /> Que ngắn, đơn<br /> hoặc chuỗi ngắn<br /> <br /> Que ngắn, đơn hoặc<br /> chuỗi ngắn<br /> <br /> Không<br /> <br /> Không<br /> <br /> 2,50 - 3,13 x 0,75 - 1,00<br /> <br /> 2,48 - 2,95 x 0,30 - 0,75<br /> <br /> Hồng (Gram âm)<br /> <br /> Hồng (Gram âm)<br /> <br /> Cụ thể đường kính khuẩn lạc E. ictaluri ARO là<br /> 2,25 ± 0,100 mm so với 2,45 ± 0,270 mm của E.<br /> ictaluri WT; kích thước vi khuẩn E. ictaluri ARO là<br /> 2,48 - 2,95 x 0,30 - 0,75 µm so với 2,50 - 3,13 x<br /> 0,75 - 1,00 µm (bảng 1).<br /> <br /> Hình 2. Khuẩn lạc vi khuẩn E. ictaluri ARO (A) và E. ictaluri WT (B) trên môi trường BHIA<br /> <br /> Hình 3. Vi khuẩn E. ictaluri chưa đột biến gen aroA (A) và vi khuẩn E. ictaluri bị đột biến gen aroA (B)<br /> <br /> 142 • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG<br /> <br /> B<br /> <br /> Tạp chí Khoa học - Công nghệ Thủy sản<br /> <br /> Số 1/2015<br /> <br /> hematoxylin, hình que và có kích thước biến đổi<br /> Cũng từ kết quả bảng 1, hình 2 và hình 3 cho<br /> thấy màu sắc, hình dạng, thời gian mọc khuẩn lạc<br /> cũng tương tự như những mô tả về hình thái chủng<br /> và hình dạng vi khuẩn ở chủng bị đột biến gen aroA<br /> vi khuẩn E. ictaluri hoang dại (E. ictaluri WT) và<br /> (E. ictaluri ARO) và chủng chưa đột biến gen aroA<br /> chủng E. ictaluri đột biến gen aroA (E. ictaluri ARO)<br /> (E. ictaluri WT) đều tương tự nhau. Cụ thể, khuẩn<br /> mà chúng tôi nghiên cứu. Điều này chứng tỏ chủng<br /> lạc có màu trắng hơi mờ đục, dạng tròn trơn, hơi<br /> E. ictaluri bị đột biến gen aroA có hình dạng khá ổn<br /> lồi, rìa có dạng không đồng nhất (Hình 2A, B). Khi<br /> định, không thay đổi sau khi đột biến và có thể nuôi<br /> nhuộm Gram và soi dưới kính hiển vi ở độ phóng<br /> cấy và bảo quản. Kết quả này cũng phù hợp với<br /> đại 1000 lần, vi khuẩn chủng E. ictaluri ARO và E.<br /> nghiên cứu của Võ Văn Nha (2013).<br /> ictaluri WT đều bắt màu hồng (vi khuẩn Gram âm)<br /> 2. Đặc điểm sinh lý, sinh hóa chủng E. ictaluri bị<br /> và có hình que ngắn, đơn hoặc chuỗi ngắn và không<br /> đột biến gen aroA<br /> sinh bào tử (hình 3 A, B).<br /> Các đặc tính sinh lý, sinh hóa của chủng vi khuẩn<br /> Kết quả nghiên cứu về đặc điểm hình thái 108<br /> E. ictaluri bị đột biến gen aroA (E. ictaluri ARO) và<br /> chủng E. ictaluri thu được từ 181 cá tra bị bệnh gan<br /> chưa bị đột biến (E. ictaluri WT) được kiểm tra bằng<br /> thận mủ của Từ Thanh Dung và cộng sự (2004) cho<br /> kít API 20E kết hợp với phương pháp truyền thống.<br /> thấy, khuẩn lạc tạo thành có màu trắng đục, rìa có dạng<br /> Kết quả thu được được thể hiện ở bảng 2.<br /> không đồng nhất, vi khuẩn bắt màu hồng thuốc nhuộm<br /> Bảng 2. Đặc điểm sinh lý, sinh hóa của E. ictaluri ARO và E. ictaluri WT<br /> Đặc điểm sinh lí, sinh<br /> hóa<br /> <br /> Hình dạng<br /> Gram<br /> Di động<br /> Oxidase<br /> Catalase<br /> O/F<br /> ONPG<br /> ADH<br /> LDC<br /> ODC<br /> CIT<br /> H2S<br /> URE<br /> TDA<br /> IND<br /> VP<br /> GEL<br /> GLU<br /> Gas<br /> Khử Nitrate<br /> MAN<br /> INO<br /> SOR<br /> RHA<br /> SAC<br /> MEL<br /> AMY<br /> ARA<br /> Lactose<br /> Độ muối (‰)<br /> 0;5;10;15; 20<br /> 25; 30<br /> <br /> Các kí hiệu viết tắt<br /> <br /> Oxidase<br /> Catalase<br /> Oxydation/<br /> Fermentation<br /> Orthonitrophenyl<br /> Arginin<br /> Lysin<br /> Ornithin<br /> Sodium citrat<br /> Sodium thisulfat<br /> Urê<br /> Tryptophan<br /> Indol<br /> Sodium piruvac<br /> Gelatin<br /> Glucose<br /> Hơi<br /> Nitrate<br /> Manitol<br /> Inositol<br /> Sorbitol<br /> Rhamnose<br /> Sacrose<br /> Melibiose<br /> Amygdalin<br /> Arabinose<br /> Lactose<br /> Natri clorua<br /> <br /> E. ictaluri ARO<br /> <br /> E. ictaluri WT<br /> <br /> E. ictaluri theo Bergey’s, 1994<br /> <br /> Que<br /> +<br /> +<br /> <br /> Que<br /> +<br /> +<br /> <br /> Que<br /> +<br /> +<br /> <br /> +/+<br /> <br /> +/+<br /> <br /> +/+<br /> <br /> +<br /> +<br /> +<br /> +<br /> -<br /> <br /> +<br /> +<br /> +<br /> +<br /> -<br /> <br /> +<br /> V<br /> +<br /> V<br /> +<br /> -<br /> <br /> +<br /> -<br /> <br /> +<br /> -<br /> <br /> Ghi chú: +: dương tính; -: âm tính; V: biến đổi (có chủng âm tính, chủng dương tính)<br /> <br /> TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • 143<br /> <br /> Tạp chí Khoa học - Công nghệ Thủy sản<br /> Kết quả từ bảng 2 cho thấy các đặc điểm sinh<br /> lý, sinh hóa của chủng vi khuẩn E. ictaluri bị đột biến<br /> gen aroA (E. ictaluri ARO) như: Gram âm, di động,<br /> cho phản ứng oxydase âm tính, catalase và lysin<br /> dương tính, âm tính với các loại đường ngoại trừ<br /> glucose (dương tính) đều tương đồng với chủng E.<br /> ictaluri “hoang dại” chưa đột biến (E. ictaluri WT) và<br /> tương đồng với khóa phân loại Bergey’s (Holt và<br /> cộng sự, 1994).<br /> Theo mô tả trong hệ thống phân loại của<br /> Bergey giống Edwardsiella có các đặc điểm là: Vi<br /> khuẩn dạng hình que thẳng, nhỏ, kích thước 1 μm x<br /> 2 - 3 μm, gram âm, có khả năng di động bằng vành<br /> lông rung (peritrichous flagella) (E. ictaluri di động<br /> ở 250C, không di động ở 370C), yếm khí tùy tiện,<br /> có oxydation/fermentation (O/F) đều dương tính.<br /> Giống Edwardsiella có khả năng sử dụng đường<br /> glucose, kết quả sinh ra axít và thường sinh hơi,<br /> <br /> Số 1/2015<br /> oxidase âm tính, catalase dương tính,<br /> voges-proskauer (VP) và simmon citrate âm tính,<br /> lysine decarboxylase (LDC) dương tính, ornithine<br /> decarboxylase (ODC) dương tính, khử Nitrate.<br /> Tất cả các loài thuộc giống này đều có khả năng<br /> lên men đường maltose và D-mannose. Như vậy,<br /> với những đặc điểm sinh lý, sinh hóa đã thu được<br /> từ nghiên cứu của chúng tôi ở trên có thể khẳng<br /> định rằng chủng E. ictaluri bị đột biến gen aroA<br /> (E. ictaluri ARO) cũng cho các đặc điểm sinh lý,<br /> sinh hóa không khác gì so với chủng E. ictaluri<br /> “hoang dại” chưa đột biến (E. ictaluri WT).<br /> 3. Đặc điểm sinh trưởng chủng E. ictaluri bị đột<br /> biến gen aroA<br /> Kết quả theo dõi sinh trưởng chủng E. ictaluri<br /> ARO và E. ictaluri “hoang dại” chưa đột biến<br /> (E. ictaluri WT) trên môi trường BHIB trong 24 giờ<br /> được thể hiện ở hình 4.<br /> <br /> Hình 4. Kết quả khảo sát đường cong sinh trưởng chủng E. ictaluri đột biến gen<br /> aroA (aroA) và E. ictaluri hoang dại trên môi trường BHI<br /> <br /> Kết quả từ hình 4 cho thấy chủng vi khuẩn<br /> E. ictaluri bị đột biến gen aroA (E. ictaluri ARO)<br /> trong môi trường BHIB cho sinh trưởng tương tự<br /> như chủng vi khuẩn E. ictaluri chưa bị đột biến<br /> (E. ictaluri WT) sau 24 giờ nuôi cấy. Phân tích Anova<br /> single factor so sánh sự khác biệt về sinh trưởng<br /> của chủng E. ictaluri ARO so với chủng E. ictaluri<br /> WT trong cùng điều kiện nuôi cấy trên môi trường<br /> BHIB cho thấy không có sự khác biệt về sự sinh<br /> trưởng của hai chủng vi khuẩn này (p>0,05).<br /> IV. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ<br /> 1. Kết luận<br /> Vi khuẩn E. ictaluri bị đột biến gen aroA (E. ictaluri<br /> ARO) có hình dạng ổn định, kích thước thay đổi<br /> <br /> 144 • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG<br /> <br /> không đáng kể so với trước khi bị đột biến, có thể<br /> nuôi cấy và bảo quản được như chủng E. ictaluri<br /> “hoang dại” ban đầu chưa đột biến. Ngoài ra, đặc<br /> điểm sinh lý, sinh hóa theo khóa phân loại Bergey’s<br /> của vi khuẩn E. ictaluri bị đột biến gen aroA, cũng<br /> như khả năng sinh trưởng trên môi trường BHIB<br /> tương tự như chủng vi khuẩn E. ictaluri chưa bị đột<br /> biến (E. ictaluri WT) sau 24 giờ theo dõi ở nhiệt độ<br /> 280C.<br /> 2. Kiến nghị<br /> Có thể sử dụng chủng E. ictaluri bị đột biến<br /> gen aroA (E. ictaluri ARO) nuôi cấy, bảo quản và<br /> tăng sinh khối để làm nguyên liệu sản xuất vaccine<br /> nhược độc phòng bệnh gan thận mủ cá tra.<br /> <br />