Điện di protein hai chiều trong nghiên cứu sàng lọc thuốc trích từ cây dừa cạn lên tế bào u nguyên bào thần kinh

Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 1 * 2016 Nghiên cứu Y học<br /> <br /> <br /> ĐIỆN DI PROTEIN HAI CHIỀU TRONG NGHIÊN CỨU<br /> SÀNG LỌC THUỐC TRÍCH TỪ CÂY DỪA CẠN LÊN TẾ BÀO<br /> U NGUYÊN BÀO THẦN KINH<br /> Võ Văn Thành Niệm*, Trịnh Thị Thu Thảo**, Trương Đình Khải***, Trịnh Thị Diệu Thường****,<br /> Hoe Li Nah*****, Bùi Chí Bảo*<br /> <br /> TÓM TẮT<br /> Giới thiệu: U nguyên bào thần kinh (UNBTK) là một dạng khối u đặc phát triển từ tế bào mào thần kinh<br /> của hệ thần kinh giao cảm ngoại biên, thường hình thành trong quá trình thai nhi và những năm đầu sau khi<br /> sinh. Gần đây phương pháp điện di protein hai chiều được áp dung cho sàng lọc thuốc cho thấy hệ protein quan<br /> trọng trong con đường tín hiệu ung thư nói chung và UNBTK nói riêng. Những thông tin về biến đổi trong hệ<br /> thống biểu hiện protein trong tế bào UNBTK trước và sau tác động của thuốc sẽ góp phần phục vụ cho những cơ<br /> chế mới trong điều trị ung thư.<br /> Mục tiêu: Khảo sát tác động của dịch chiết từ hoa dừa cạn (Catharanthus roseus) lên sự biểu hiện protein<br /> trong tế bào phân lập từ khối u UNBTK.<br /> Phương pháp: Phân lập và nuôi cấy tế bào từ khối u UNBTK sinh thiết từ bệnh nhân, sau đó tiến hành xử<br /> lý với thuốc trích từ cây dừa cạn, ly trích protein từ tế bào đã xử lý thuốc. Hệ thống điện di protein 2 chiều lần<br /> đầu được thiết lập tại phòng thí nghiệm thần kinh, Trung tâm y sinh học phân tử. Protein tổng số được chạy với<br /> hệ thống điện di hai chiều để kiểm tra so sánh hai hệ protein có và không tác động thuốc.<br /> Kết quả: Nuôi cấy thành công dòng tế bào UNBTK, đồng nhất từ passage 1 (P1) đến P3. Thành công thiết<br /> lập hệ thống điện di protein 2 chiều với protein tổng số 80 g/ml, chạy được dãy pH từ 3-10. Phân tích hình ảnh<br /> kết quả ở pH 3-10 cho thấy giữa hai nhóm đối chứng và nhóm xử lý dịch chiết Catharanthus roseus có sự khác<br /> biệt. Mẫu NB 25 và mẫu NB 49 lần lượt có hơn 50% số protein tăng biểu hiện, 50% protein giảm biểu hiện, xuất<br /> hiện 57 và 26 điểm protein mới, mất đi 26 và 9 điểm protein so với mẫu đối chứng.<br /> Kết luận: Nghiên cứu đã nuôi cấy, tăng sinh thành công dòng tế UNBTK sinh thiết từ khối u. Bên cạnh đó,<br /> thấy được tác động thay đổi biểu hiện hệ thống protein trong tế bào của thuốc trích từ cây dừa cạn bằng phương<br /> pháp điện di hai chiều. Kết quả này giúp hỗ trợ nhiều nghiên cứu cơ chế con đường tín hiệu protein để làm rõ con<br /> đường đáp ứng thuốc của ung thư UNBTK.<br /> Từ khóa: U nguyên bào thần kinh, điện di hai chiều, cây dừa cạn.<br /> ABSTRACT<br /> 2-DIMENSIONAL (2-D) ELECTROPHORESIS ASSAY IN INVESTIGATING THE EFFECT OF DRUG<br /> EXTRACTED FROM CATHARANTHUS ROSEUS ON NEUROBLASTOMA<br /> Vo Van Thanh Niem, Trinh Thi Thu Thao, Truong Đinh Khai, Trinh Thi Dieu Thuong, Hoe Li Nah,<br /> Bui Chi Bao * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Supplement of Vol. 20 - No 1 - 2016: 129 - 135<br /> <br /> Background: Neuroblastoma (NB), often formed during fetal and early postnatal, are tumors developed from<br /> neural crest of the peripheral sympathetic nervous system, 90% of cases are detected in their early years. Recently,<br /> <br />  <br /> Trung tâm Y sinh học phân tử, Đại học Y Dược Tp. HCM. Đại học Khoa học tự nhiên Tp. HCM.<br /> <br /> Bộ môn Ngoại Nhi Đại học Y Dược Tp Hồ Chí Minh<br />  <br /> Khoa Y học cổ truyền Đại học Y Dược Tp Hồ Chí Minh. United Scientific Co., Ltd. Malaysia<br /> Tác giả liên lạc: TS. Bùi Chí Bảo. ĐT: 0909708225 Email: bcbao@ump.edu.vn<br /> <br /> Thần kinh 129<br /> Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 1 * 2016<br /> <br /> two-dimensional protein electrophoresis approach showed us important proteins in signaling pathways for cancer<br /> screening, particularly in NB. The information about the alternations in protein expression system in NB cells<br /> before and after effects of the drug will provide knowledge for the new cancer treatment.<br /> Objectives: Investigate the effects of drug extracted from Catharanthus roseus on protein expression in NB<br /> cell line.<br /> Methods: Isolation and cell cultures from NB patients’s biopsies. These samples then treated with drugs<br /> from Catharanthus roseus. Extracted proteins were used for 2D electrophoresis system which was first set up in<br /> neuroscience lab, Center for molecular biomedicine. The result was used to comparing two systems with and<br /> without the impact of drugs.<br /> Results: NB cell lines are successfully cultured, consistent from passage 1 (P1) to P3. 2D systems were<br /> established with total protein 80 g/ml, pH range 3-10. Scan images were analysed by ImageMaster 2D Platinum<br /> 7.0 DIGE software (GE HealthCare), at pH 3-10 showed difference between the control group and treated group<br /> with Catharanthus roseus extract. NB 25 and NB 49 samples have more than 50% protein increased expression<br /> and 50% protein reducted expression, 57 and 26 new spots appeared, 26 and 9 spots disappeared in comparing<br /> with control, respectively.<br /> Conclusion: The study was successfully culturing NB cell lines from tumor biopsies. Two-dimensional<br /> electrophoresis method can detect protein expression changes under drug effect. These results help to clarify the<br /> signaling pathway of drug response in NB.<br /> Key word: neuroblastoma, 2-D proteomic, vinblastine<br /> ĐẶT VẤN ĐỀ hưởng quan trọng khác như ALK, PHOX2B,<br /> nhân tố ngoài di truyền , RNAs không mã hóa.<br /> U nguyên bào thần kinh (UNBTK) là một<br /> UNBTK là mối đe dọa rất lớn đến sự sống sót<br /> dạng khối u đặc phát triển từ tế bào mào thần<br /> của các bệnh nhi.<br /> kinh của hệ thần kinh giao cảm ngoại biên. Tỷ lệ<br /> Gần đây, Vinblastine có chứa thành phần<br /> mắc UNBTK là 10,7 trên 1.000.000 trẻ trong độ<br /> chính là Vinca alkaloid chiết xuất từ cây dừa cạn<br /> tuổi 0-14 tuổi(2). Mỗi năm có thêm khoảng 700<br /> Catharanthuhs roseus được sử dụng như một loại<br /> bệnh nhân phát hiện có hình thành UNBTK,<br /> thuốc kháng ung thư và đã góp phần vào những<br /> chiếm 8% trong chuẩn đoán u ác tính ở trẻ dưới<br /> thành công của liệu pháp hóa trị(8). Vinblastine có<br /> 15 tuổi. Tỷ lệ tử vong khoảng 15%, hơn một nửa<br /> tác dụng chống ung thư thông qua cơ chế ức chế<br /> trường hợp mắc bệnh được đánh giá ở mức rủi<br /> sự hình thành thoi vô sắc ở pha prometaphase<br /> ro cao, tỷ lệ sống sót của bệnh nhân vào khoảng<br /> trong quá trình nguyên phân dẫn đến ngừng<br /> 40%(13). Ở Việt Nam theo thống kê Tại Bệnh viên<br /> phân chia tế bào(6).<br /> Nhi Trung Ương, hàng năm có vào khoảng 30 –<br /> 40 trường hợp UNBTK được chẩn đoán và điều Hệ “proteomics” được Marc Wilkin đề cập<br /> trị. Tỷ lệ tử vong chung đối với các trường hợp đầu những năm 1990(10), trở thành một công cụ<br /> UNBTK được điều trị thống kê từ năm 2002-2006 không thể thiếu trong quá trình nghiên cứu và<br /> là 60%(11). 30% UNBTK phát sinh ở tuyến thượng sàng lọc các hệ protein nhằm hỗ trợ điều trị các<br /> thận, 60% hình thành trong ổ bụng, phần còn lại bệnh di truyền, ung thư. Điện di hai chiều<br /> hình thành ở hạch giao cảm ở ngực, đầu, nách và protein là một trong những công cụ proteomic<br /> xương chậu(13). UNBTK bắt nguồn từ những bất quan trọng trong nghiên cứu về sự thay đổi biểu<br /> thường ở NST: mất đoạn ở cánh ngắn nhiễm sắc hiện hệ thống protein trong tế bào dưới tác động<br /> thể số 1, khuếch đại MYCN, tăng đoạn ở cánh của thuốc. Phương pháp điện di protein hai<br /> dài nhiễm sắc thể số 17(5,7,9). Một số nhân tố ảnh chiều được thiết lập dựa trên nguyên tắc phân<br /> tách protein theo hai thông số điểm đẳng điện và<br /> <br /> <br /> 130 Chuyên Đề Nội Khoa II<br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 1 * 2016 Nghiên cứu Y học<br /> <br /> khối lượng phân tử protein. Ưu điểm nổi bật thiết từ khối mô được nuôi trong môi trường<br /> của phương pháp điện di protein hai chiều là DMEM bổ sung 10% huyết thanh thai bò (FBS),<br /> khả năng phát hiện những biến đổi không được 1% penicillin và streptomycin, ở 370C, 5% CO2.<br /> dự đoán trước của hệ thống protein được biểu Mẫu khối u được nghiền bằng biện pháp cơ học<br /> hiện trong những thay đổi của các điều kiện (khoang điện 300mc/V) và hóa học (dung dịch<br /> khác nhau(4). Protein sẽ được phân tách theo Trypsin/EDTA 0,5%) giúp tách thành tế bào đơn.<br /> chiều thứ nhất dựa trên điểm đẳng điện trên một Xử lý thuốc<br /> thanh gel polyacrylamide có sự thay đổi theo<br /> Tế bào được nuôi cấy trong đĩa 6 giếng tới<br /> gradient pH. Chiều thứ hai của kĩ thuật này sử<br /> khi đạt 60% bề mặt nuôi cấy, sau đó được xử với<br /> dụng phương pháp SDS-PAGE để phân tách<br /> dịch chiết từ cây dừa cạn trong 24 giờ. DMSO<br /> theo khối lượng các protein đã được phân ly trên<br /> 0,1% sử dụng làm mẫu chứng(3).<br /> thanh gel theo điểm đẳng điện tương ứng của<br /> chúng. Đây là phương pháp rất nhạy, có thể phát Phân tách protein và chạy điện di hai chiều<br /> hiện cùng lúc hàng nghìn protein và đo đạc độ Chuẩn hoá quy trình điện di protein 2 chiều<br /> đậm nhạt của các điểm protein bằng máy đọc. trên mẫu protein E.coli thương mại với nồng độ<br /> Việc thu nhận các protein từ bản gel cũng dễ 1,35 mg/ml, sử dụng bộ hoá chất ReadyPrepTM 2-<br /> dàng thực hiện cho các thí nghiệm phân tích xa D Starter Kit (Bio-Rad). Sau đó protein của 2 mẫu<br /> hơn, đặc biệt là kết hợp với kĩ thuật phân tích tế bào NB 25 và NB 49 được tách chiết bằng<br /> khối phổ (MS) để định lượng và xác định chính dung dịch ly giải: 7M urea, 2M thiourea, 4%<br /> xác protein quan tâm. Trong nghiên cứu này (w/v) CHAPS, 2% (w/v) IPG buffer pH 3–10, 2%<br /> chúng tôi bước đầu ứng dụng điện di 2 chiều (w/v) dithiothreitol và tiến hành chạy điện di 2<br /> trong khảo sát hệ proteomics của dòng tế bào chiều bằng hệ thống Ettan IPGphor 3 Isoelectric<br /> UNBTK dưới sự tác động của thuốc chiết xuất từ Focusing System và hệ thống điện di protein<br /> cây dừa cạn. SDS-PAGE của Bio-Rad, sau đó gel được nhuộm<br /> với Comassive blue (Sigma, Cat. B6529), rửa gel<br /> ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU<br /> với dung dịch nào methanol acid acetic tỷ lệ 3:1<br /> Vật liệu trên máy lắc ngang ở nhiệt đô phòng. Sau đó<br /> Khối mô UNBTK (được sự đồng thuận của tấm gel với điểm chuyên biệt cho protein được<br /> gia đình bệnh nhân) thu từ bệnh viện Nhi Đồng phân tích kết quả bằng phần mềm ImageMaster<br /> 2 TP.HCM thu nhận từ tháng 9-2013 đến tháng 2D Platinum 7.0 DIGE (GE HealthCare). Các<br /> 10-2015. Phân loại nguy cơ của UNBTK dựa vào thông số được thống kê bằng phương pháp<br /> tiêu chí của hệ thống phân loại trẻ em: Children thống kê SPSS 16, với thể tích các điểm protein<br /> Oncology Group 2010(2), trong đó giai đoạn xếp được tính theo công thức: %V= đ ể n/<br /> loại theo hệ thống phân chia giai đoạn quốc tế Σ cá đ ể .<br /> (International Neuroblastoma Staging System - KẾT QUẢ<br /> INSS) gồm giai đoạn 1, 2, 3 4 và 4S(1); mô học, tuổi<br /> (lớn hoặc nhỏ hơn 18 tháng) và sự khuếch đại Phân lập và nuôi cấy sơ cấp<br /> MYCN đã được nghiên cứu trước đó trên mẫu Khoảng 1,2x107 tế bào được thu nhận ngày<br /> UNBTK của người Việt Nam(6). Chỉ chọn nhóm 0. Ở ngày thứ ba, quan sát thấy có tế bào bám<br /> bệnh mới chẩn đoán lần đầu, và không chọn tuy nhiên chưa nhiều và môi trường còn chứa<br /> nhóm bệnh UNBTK tái phát. nhiều mảnh vụn còn sót lại sau quá trình sử<br /> dụng cơ học để tách tế bào đơn. Ngày thứ sáu<br /> Phương pháp<br /> sau nhiều lần thay môi trường các mảnh vỡ<br /> Phân lập và nuôi cấy tế bào mô, tế bào đã được loại bỏ dần, các tế bào bám<br /> Trong nghiên cứu này tế bào UNBTK sinh<br /> <br /> <br /> Thần kinh 131<br /> Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 1 * 2016<br /> <br /> đều hơn, và bắt đầu tăng sinh. Ngày thứ chín nhất, cố một số cụm tế bào biệt hóa và một số<br /> một số tế bào thể hiện trạng thái biệt hóa, tiếp cụm tế bào ở dạng chưa biệt hóa. Sự tăng sinh<br /> tục tăng sinh. Khối u chứa nhiều loại tế bào của tế bào được ghi nhận trong 12 ngày, với số<br /> khác nhau, do đó trong quá trình nuôi cấy lượng tế bào ổn định là 2x105 (Hình 1).<br /> hình thái của các tế bào không ở dạng đồng<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Hình 5: Kết quả nuôi cấy sơ cấp tế bào đơn thu nhận từ mẫu khối u NB49 (x20). Tế bào được quan sát sau 3<br /> ngày, 6 ngày, 9 ngày, 12 ngày.<br /> Nuôi cấy thứ cấp<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Hình 2: Kết quả nuôi cấy thứ cấp tế bào đơn thu nhận từ mẫu khối u NB49(X20). Tế bào đươc quan sát sau 2<br /> ngày, 4 ngày, 6 ngày, 8 ngày.<br /> Tế bào được quan sát trong 8 ngày sau cấy protein tổng số E.Coli đi kèm trong bộ<br /> truyền, các tế bào NB49 mọc khá ổn định, đến ReadyPrepTM 2-D Starter Kit (Cat.163-2105, Bio-<br /> ngày thứ 8, bề mặt dĩa đã được các tế bào bao Rad), để chắc chắn rằng quy trình này có khả<br /> phủ. năng tạo cho ra kết quả các điểm protein tốt<br /> Qua quá trình nuôi cấy thứ cấp (P2), tế bào phục vụ cho nghiên cứu.<br /> thu nhận phát triển bền vững hơn, tăng sinh<br /> nhanh hơn so với quá trình nuôi cấy sơ cấp ban<br /> đầu (Hình 2). Các tế bào này sẽ được xử lý với<br /> thuốc dịch trích Vinblastine từ cây dừa cạn nồng<br /> độ 200ng/ml trong 24 giờ.<br /> Kết quả chuẩn hóa quy trình điện di<br /> protein hai chiều bằng mẫu protein E.Coli.<br /> Để chạy điện di 2D, quy trình điện di trên hệ<br /> thống Ettan IPGphor 3 Isoelectric Forcusing<br /> Hình 6: Kết quả chuẩn quy trình điện di hai chiều<br /> System (GE) được tối ưu hóa. Quy trình điện di<br /> mẫu protein tổng số từ E.Coli (Bio-Rad).<br /> protein hai chiều được thử nghiệm trên mẫu<br /> <br /> <br /> 132 Chuyên Đề Nội Khoa II<br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 1 * 2016 Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Quá trình chuẩn hóa quy trình trên mẫu Kết quả chạy điện di protein hai chiều trên<br /> protein E.Coli đã cho kết quả đồng nhất với hệ mẫu NB25 và NB 49<br /> thống quy chiếu của GE (Hình 3). Các điểm Khi so sánh giữa mẫu đối chứng và mẫu<br /> protein đã phân tách rõ ràng trên gel. Từ kết quả đã qua xử lý, có những thay đổi trong biểu<br /> trên, chúng tôi quyết định áp dụng quy trình hiện protein giữa 2 mẫu. Hình 4 cho thầy các<br /> điện di protein hai chiều này đối với mẫu NB25 điểm màu xanh là các điểm protein tương<br /> và NB49. đồng giữa hai mẫu đã được phần mềm nhận<br /> diện. Các điểm màu đỏ là các điểm protein<br /> không tương đồng.<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Hình 4: Kết quả điện di hai chiều mẫu NB25, NB 49. A: mẫu đối chứng, B: mẫu xử lý thuốc với nồng độ<br /> 200ng/ml<br /> Bảng 2: Số điểm tương đồng và không tương đồng giữa hai mẫu NB25 và NB49<br /> Mẫu NB25 đối chứng Mẫu NB25 xử lý Mẫu NB49 đối chứng Mẫu NB49 xử lý<br /> Số điểm tương đồng 42 71<br /> Số điểm không tương đống 26 57 26 9<br /> Trong thí nghiệm này chúng tôi tìm thấy ở Nhưng thậm chí trong các điểm protein biểu<br /> mẫu NB 25 xử lý thuốc có 42 điểm protein hiện tương đồng giữa hai mẫu cũng có sự khác<br /> tương đồng, 57 điểm protein mới xuất hiện và nhau ở phần trăm thể tích các điểm protein so<br /> 26 điểm protein mất đi so với mẫu đối chứng, với tổng thể tích các điểm protein. Những thay<br /> ở mẫu NB 49 các số này lần lượt là 71, 26 và 9. đổi về tỷ lệ thể tích của một điểm protein so với<br /> tổng thể tích giữa mẫu đối chứng và xử lý sẽ<br /> được trình bày trong Bảng 2 và Bảng 3.<br /> Bảng 3: Tỷ lệ thể tích của các điểm protein tương đồng khi so sánh giữa hai mẫu đối chứng và xử lý của mẫu NB 25<br /> %V mẫu %V mẫu %V mẫu %V mẫu %V mẫu %V mẫu<br /> Stt Stt Stt<br /> đối chứng xử lý đối chứng xử lý đối chứng xử lý<br /> 1 23,43 5,62 15 0,82 0,52 29 0,56 0,17<br /> 2 0,99 0,22 16 0,58 0,21 30 0,97 0,12<br /> 3 3,03 0,22 17 0,67 0,26 31 0,61 0,49<br /> 4 0,46 0,84 18 0,26 0,79 32 0,63 0,70<br /> 5 1,10 1,12 19 6,65 1,03 33 0,65 1,24<br /> 6 2,21 3,63 20 0,58 0,22 34 0,62 2,09<br /> 7 1,06 0,95 21 0,35 1,12 35 0,76 2,54<br /> <br /> <br /> <br /> Thần kinh 133<br /> Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 1 * 2016<br /> <br /> %V mẫu %V mẫu %V mẫu %V mẫu %V mẫu %V mẫu<br /> Stt Stt Stt<br /> đối chứng xử lý đối chứng xử lý đối chứng xử lý<br /> 8 0,62 0,59 22 2,91 5,73 36 0,97 1,92<br /> 9 1,05 0,31 23 1,79 3,64 37 4,88 7,14<br /> 10 0,87 0,16 24 1,50 0,83 38 3,64 4,88<br /> 11 1,01 0,21 25 0,83 1,55 39 2,75 3,94<br /> 12 0,54 0,09 26 1,10 0,59 40 1,29 2,37<br /> 13 0,45 0,07 27 0,33 0,09 41 0,72 0,10<br /> 14 0,58 0,10 28 0,44 0,13 42 1,14 0,20<br /> Bảng 4: Tỷ lệ thể tích của các điểm protein tương đồng khi so sánh giữa hai mẫu đối chứng và xử lý của mẫu NB 49<br /> %V mẫu %V mẫu %V mẫu %V mẫu %V mẫu đối %V mẫu<br /> Stt Stt Stt<br /> đối chứng xử lý đối chứng xử lý chứng xử lý<br /> 1 1,72 1,25 25 0,98 0,82 49 1,20 1,25<br /> 2 0,23 0,65 26 1,18 0,79 50 8,32 8,94<br /> 3 0,34 1,04 27 4,60 2,72 51 5,19 5,85<br /> 4 0,52 0,57 28 0,47 0,67 52 0,61 0,75<br /> 5 1,02 0,86 29 0,50 0,82 53 0,93 1,17<br /> 6 0,45 0,60 30 1,00 0,90 54 0,39 0,62<br /> 7 0,35 0,58 31 2,23 1,61 55 0,90 1,59<br /> 8 0,74 0,74 32 2,48 2,59 56 0,41 1,01<br /> 9 0,33 0,90 33 3,33 2,76 57 0,47 0,36<br /> 10 0,30 0,72 34 3,09 2,50 58 0,45 0,59<br /> 11 0,86 0,74 35 4,12 2,54 59 0,48 0,48<br /> 12 6,77 8,72 36 2,22 1,57 60 0,63 0,65<br /> 13 0,50 1,54 37 0,69 0,64 61 0,21 0,39<br /> 14 0,75 0,18 38 0,56 0,37 62 0,15 0,38<br /> 15 0,90 1,17 39 0,31 0,45 63 0,47 0,57<br /> 16 0,44 1,22 40 2,91 1,75 64 0,59 0,60<br /> 17 0,37 0,73 41 1,14 1,30 65 1,03 0,93<br /> 18 0,40 0,28 42 0,63 0,25 66 0,26 0,34<br /> 19 1,06 1,35 43 1,55 1,54 67 0,82 1,12<br /> 20 0,51 1,17 44 1,12 1,36 68 0,52 0,61<br /> 21 0,91 2,51 45 0,81 0,72 69 0,37 0,64<br /> 22 0,32 0,36 46 3,40 3,84 70 0,33 0,60<br /> 23 0,67 0,71 47 1,68 1,78 71 0,57 0,81<br /> 24 0,90 0,78 48 1,25 1,14<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Hình 7: So sánh thay đổi phần trăm thể tích của các điểm protein tương đồng giữa hai mẫu đối chứng và xử lý.<br /> Thông tin ở Bảng 2, Bảng 3 sẽ được chuyển Chúng tôi ghi nhận được rằng ở mẫu NB 25,<br /> đổi sang dạng thông tin bằng hình ảnh qua trong tổng số điểm tương đồng thì có hơn 50%<br /> Hình 5. protein giảm biểu hiện sau khi xử lý với thuốc,<br /> <br /> <br /> 134 Chuyên Đề Nội Khoa II<br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 1 * 2016 Nghiên cứu Y học<br /> <br /> còn mẫu NB 49 thì lại có hơn 50% các điểm TÀI LIỆU THAM KHẢO<br /> protein tăng biểu hiện so với mẫu đối chứng. 1. Bùi Chí Bảo (2014). Khảo sát tác động gen HBx của Virus<br /> Những thay đổi này là kết quả của quá trình đáp viêm gan B trong sự hình thành đa bội. Y học TP Hồ Chí<br /> Minh, 18: 291-295.<br /> ứng của thuốc đối với các tế bào UNBTK. 2. Bùi Chí Bảo (2015). Xây đựng quy trình phân loại nhóm<br /> nguy cơ cao của U nguyên bào thần kinh khuếch đại<br /> BÀN LUẬN MYCN. Y học TP Hồ Chí Minh, 19: 1-7.<br /> Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã tiến 3. Castel V, Grau E, Noguera R, and Martinez F (2007).<br /> Molecular biology of neuroblastoma. Clinical and<br /> hành sàng lọc sự thay đổi biểu hiện của hệ thống Translational Oncology, 9: 478-483.<br /> protein trong tế bào UNBTK trước và sau khi trải 4. Cellulaire B (2002). Two-dimensional gel electrophoresis<br /> in proteomics: old, old fashioned, but it still climbs up the<br /> qua sự tác động của thuốc Vinblastine trích từ<br /> mountains. Proteomics, 2: 3-10.<br /> cây dừa cạn Catharanthuhs roseus. Có sự khác biệt 5. Fujita T, et al. (2008). CHD5, a tumor suppressor gene<br /> lớn trong thay đổi biểu hiện protein ở hai mẫu deleted from 1p36.31 in neuroblastomas. Journal of the<br /> National Cancer Institute, 100: 940-949.<br /> NB25 và NB49 sau khi xử lý với thuốc. Hai mẫu 6. Gigant B, et al. (2005). Structural basis for the regulation of<br /> NB25 và NB49 đều thuộc giai đoạn 4, nhưng có tubulin by vinblastine. Nature, 435: 519-522.<br /> mức độ khuếch đại MYCN khác nhau: NB 25 7. Huang M and Weiss WA (2013). Neuroblastoma and<br /> MYCN. Cold Spring Harbor perspectives in medicine, 3:<br /> (670 bản copy), NB 49 (135 bản copy)(2), mẫu NB a014415.<br /> 25 có số bản copy MYCN gấp 5 lần mẫu NB 49 8. Jordan MA and Wilson L (2004). Microtubules as a target<br /> for anticancer drugs. Nature Reviews Cancer, 4: 253-265.<br /> có thể là nguyên nhân cho sự khác biệt trên.<br /> 9. Louis CU, and Shohet JM (2015). Neuroblastoma:<br /> Nhưng do giới hạn của đề tài chúng tôi chưa thể Molecular Pathogenesis and Therapy. Annual Review of<br /> chạy khối phổ để xác định rõ protein nào tăng Medicine, 66: 49–63.<br /> 10. Nguyễn Thị Lang (2014). Proteomic và sinh học hiện đại. In:<br /> hoặc giảm biểu hiện, ngoài ra, chúng tôi chỉ có<br /> Ngô Trần Ái. Proteomics và chức năng của Proteomincs, 1:<br /> thể tiến hành thí nghiệm trên 2 mẫu NB 25 và 5-12.<br /> NB 49. Do đó cần tiến hành trên nhiều mẫu hơn 11. Phùng Tuyết Lan (2007). Nghiên cứu phân loại và nhận<br /> xét kết quả điều trị UNBTK ở trẻ em tại bệnh viện Nhi<br /> để có thể xác định chính xác mối liên hệ số bản trung ương (2002 - 2006). Tạp chí Nhi Khoa, 6(1): 68-73.<br /> copy MYCN và biểu hiện các protein khi đáp 12. Theissen J, et al. (2014). Chromosome 17/17q gain and<br /> ứng thuốc. unaltered profiles in high resolution array-CGH are<br /> prognostically informative in neuroblastoma. Genes,<br /> KẾT LUẬN Chromosomes and Cancer, 53: 639-649.<br /> 13. United States Cancer Statistics Working Group. (2014).<br /> Kết quả của nghiên cứu này sẽ làm nền tảng United States Cancer Statistics: 1999–2011 incidence and<br /> mortality web-based report. Atlanta (GA): Department of<br /> cho những nghiên cứu chuyên sâu hơn sử dụng<br /> Health and Human Services, Centers for Disease Control and<br /> hệ thống giải trình tự peptide qua LC/Ms để tìm Prevention, and National Cancer Institute.<br /> ra nhóm protein đặc trưng trong quá trình đáp<br /> ứng thuốc của những tế bào UNBTK. Điều này sẽ Ngày nhận bài báo: 24/11/2015<br /> góp phần quan trọng trong chuẩn đoán và điều trị Ngày phản biện nhận xét bài báo: 30/11/2015<br /> ung thư UNBTK. Nghiên cứu này được tài trợ bởi<br /> Ngày bài báo được đăng: 15/02/2016<br /> Sở Khoa học và Công nghệ tỉnh Sóc Trăng.<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Thần kinh 135<br />