ĐỊNH LƢỢNG 17- HYDROPROGESTERONE MÁU
Chữ viết tắt:
17 - Hydroxyprogesterone: 17-OHP
Tăng sản tuyến thượng thận bẩm sinh: CAH (Congential Adrenal Hyperplasia)
I. NGUYÊN LÝ
17-hydroxyprogesterone (17-OHP) là một hormone steroid được sản xuất như
là một phần của quá trình tạo ra hormone cortisol. Xét nghiệm định lượng 17-OHP
trong máu để phát hiện và/hoặc đánh giá tăng sản tuyến thượng thận bẩm sinh
(CAH), một tình trạng di truyền dẫn đến giảm cortisol, giảm aldosterone của thượng
thận và tăng sản xuất hormon sinh dục nam (androgen).
Trong các giếng phản ứng có gắn sẵn kháng thể kháng 17-OHP. Khi cho bệnh
phẩm vào giếng, 17-OHP trong mẫu thử cạnh tranh với 17OHP đánh dấu enzym
peroxidase (kháng nguyên gắn enzym) gắn với kháng thể gắn trong giếng. Sau khi
ủ, các phần không gắn loại bỏ bằng rửa. Phức hợp miễn dịch được tạo thành giữa
kháng thể- kháng nguyên gắn enzym được phát hiện bằng cách cho cơ chất TMB
(tetramethylbenzidine ), phản ứng chuyển cơ chất thành sản phẩm màu xanh. Đậm
độ màu phản ứng tạo lên tỉ lệ nghịch với nồng độ 17-OHP trong mẫu. Dung dịch
acid Sulphuric được thêm vào để dừng phản ứng. Kết quả tạo ra phức hợp màu
vàng, được đo độ hấp thụ ánh sáng tại bước sóng 450nm bằng máy đọc ELISA
(plate reader).
II. CHUẨN BỊ
1. Ngƣời thực hiện
Người thực hiện kỹ thuật có trình độ phù hợp
2. Phƣơng tiện, hóa chất
2.1. Phương tiện:
+ Máy đọc ELISA, được trang bị để đo độ hấp thụ ở bước sóng 450nm
+ Thiết bị rửa các giếng xét nghiệm bằng tay hoặc tự động
+ Pipettes để cung cấp lượng dung dịch từ 10 đến 1000μl
+ Vortex trộn
+ Nước cất
+ Ống nghiệm dùng một lần, đồng hồ
+ Dụng cụ lấy máu: Bông cồn, bơm tiêm, ống đựng máu, găng tay…
+ 01 Giá đặt các giếng phản ứng
+ 02 miếng dán đậy các giếng phản ứng khi làm xét nghiệm
2.2. Hóa chất:
96 giếng gắn kháng thể kháng 17-OHP IgG
Dung dịch dừng phản ứng: 1 lọ 12mL chứa acid sulfuric, 0,15 mol/L
Dung dịch Conjiugate chứa 17-OHP gắn enzym peroxidase
Dung dịch cơ chất TMB: 1 lọ chứa 3,3, 5,5 tetramethylbenzidine (H2O2-
TMB 0,25 g/L)
Chuẩn 170HP: 6 lọ x 1mL: 0.0 ng/mL, 0.2 ng/mL , 0.4 ng/mL, 1.6 ng/m\Ll,
6.4 ng/mL, 19.2 ng/mL
3. Ngƣời bệnh
Cần giải thích cho người bệnh và người nhà người bệnh hiểu về mục đích của
việc lấy máu làm xét nghiệm.
4. Phiếu xét nghiệm
- Phiếu xét nghiệm theo đúng quy định của Bộ Y tế và bệnh viện.
- Trên phiếu xét nghiệm cần ghi đầy đủ thông tin của người bệnh: họ và tên,
tuổi, giới tính, số giường, khoa phòng, chẩn đoán, xét nghiệm cần làm.
- Trên phiếu xét nghiệm cần có: chữ ký và họ tên bác sĩ chỉ định xét nghiệm,
họ tên người lấy mẫu, thời gian chỉ định xét nghiệm và thời gian lấy mẫu bệnh
phẩm.
III. CÁC BƢỚC TIẾN HÀNH
1. Lấy bệnh phẩm
- Huyết thanh được khuyến cáo sử dụng cho xét nghiệm này
- Lấy 3 mL máu tĩnh mạch vào ống không có chất chống đông. Máu không vỡ
hồng cầu.
- Ly tâm mẫu ở 4000 vòng trong 5 phút, tách huyết thanh
- Bệnh phẩm ổn định 1 ngày ở 15-25oC. Nếu không thực hiện xét nghiệm trong
ngày, phải bảo quản đông lạnh.
- Bệnh phẩm chỉ tan đông 1 lần và phải để bệnh phẩm đạt nhiệt độ phòng trước
khi phân tích. Trộn kỹ bệnh phẩm sau khi rã đông. Để tránh hiện tượng bay
hơi, bệnh phẩm, chất chuẩn, chất kiểm tra chất lượng nên phân tích trong
vòng 2 giờ.
2. Tiến hành kỹ thuật
- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực hiện phân tích mẫu: máy đã
được cài đặt chương trình xét nghiệm định lượng 17-OHP máu. Máy đã được
chuẩn với xét nghiệm 17-OHP. Kết quả kiểm tra chất lượng với xét nghiệm 17-
OHP đạt yêu cầu, không nằm ngoài dải cho phép và không vi phạm luật kiểm tra
chất lượng.
- Người thực hiện phân tích mẫu nhập dữ liệu về thông tin người bệnh và chỉ
định xét nghiệm vào máy phân tích hoặc hệ thống mạng (nếu có)
- Thực hiện xét nghiệm theo protocol của máy.
IV. NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ
- Giá trị tham chiếu 17-OHP trong huyết thanh, huyết tương:
Trẻ nhỏ: 0.2-0.9 ng/mL
Nam: 0.2-2.3 ng/mL
Nữ: 0.2-1.3 ng/mL (thời kỳ kinh nguyệt: 1.0-4.5 ng/mL)
- Nồng độ 17-OHP trong huyết thanh phụ thuộc vào tuổi, với nồng độ cao nhất là
trong suốt thai kỳ và ngay sau khi sinh. Ở trẻ 1 tuần tuổi nồng độ 17-OHP huyết
thanh giảm 50 lần so với nồng độ 17-OHP trong máu cuống rốn. Đối với trẻ nam
30-60 ngày tuổi sau sinh có sự tăng 17-OHP thoáng qua. Trong suốt thời kỳ thơ ấu
giá trị 17-OHP ở cả hai giới duy trì không đổi ở mức thấp, và sau đó tăng dần lên
trong thời kỳ dậy thì (giá thị 17-OHP khoảng 3.03 nmol/l ~10.0 ng/mL). Cũng như
cortisol, 17-0HP thay đổi trong ngày, với nồng độ đạt cao nhất vào buổi sáng và
thấp nhất vào ban đêm. Đối với phụ nữ 17-OHP cũng tăng trong thời kỳ kinh
nguyệt, và trong 3 tháng đầu thai kỳ.
- Nếu trẻ sơ sinh có nồng độ 17-OHP cao đáng kể, thì trẻ có khả năng mắc CAH.
Nếu một người có mức độ tăng vừa phải, thì người đó có thể bị CAH ít nghiêm
trọng hơn hoặc có thể bị thiếu 11-beta-hydroxylase (một khiếm khuyết enzyme khác
có liên quan đến CAH).
- Kết quả 17-OHP bình thường có nghĩa là người bệnh không mắc CAH do thiếu
21-hydroxylase.
- Nồng độ thấp hoặc giảm ở người mắc CAH cho thấy có đáp ứng với điều trị.
V. NHỮNG YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG VÀ HƢỚNG XỬ TRÍ
Phản ứng chéo: 17 OH prognenolone : 1.3%
Progesterone : 1.2%