Hiệu quả của môi trường Geyc trong bảo quản lạnh sâu tinh trùng người

Chia sẻ: Sunshine_3 Sunshine_3 | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:6

Thêm vào BST

Báo xấu

52
lượt xem 3
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Theo thời gian, nhiều môi tr−ờng đã đ−ợc sử dụng để bảo quản lạnh tinh trùng ng−ời. Những công bố về hiệu quả của các môi tr−ờng trong bảo quản lạnh tinh trùng rất khác nhau. Theo các tác giả Silva A.L, Yamasaki R, de Sala M.M, Cabrera M da G, de Sa M.F (1996) [6], qua nghiên cứu “Đánh giá hiệu quả khi thêm sodium citrate vμ fructose hoặc sodium citrate vμo môi tr−ờng có egg yolk, glycerol vμ TEST trong bảo quản lạnh tinh trùng ng−ời” đã có nhận xét: tỷ lệ tinh trùng di động vμ tỷ lệ tinh trùng sống đều giảm ở cả 2 khoảng thời...

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Hiệu quả của môi trường Geyc trong bảo quản lạnh sâu tinh trùng người

hiÖu qu¶ cña m«i tr−êng GEYC trong b¶o qu¶n l¹nh s©u tinh trïng ng−êi TrÞnh B×nh, TrÞnh Sinh Tiªn NguyÔn Ngäc Hïng vµ NguyÔn ThÞ B×nh §¹i häc Y Hµ Néi Sö dông m«i tr−êng GEYC ®−îc tù pha t¹i phßng thÝ nghiÖm b¶o qu¶n 30 mÉu tinh trïng ng−êi b»ng l¹nh s©u cho kÕt qu¶ chÊt l−îng tinh trïng sau b¶o qu¶n ®¶m b¶o theo tiªu chuÈn cña AATB. M«i tr−êng GEYC cã thÓ chñ ®éng tù pha t¹i phßng thÝ nghiÖm cã gi¸ thµnh phï hîp víi ®iÒu kiÖn ViÖt Nam. (Tõ viÕt t¾t: GEYC: Glycerol-Egg Yolk-Citrat; CSF: Cryosurvival factor; TT: tinh trïng) I. ®Æt vÊn ®Ò qu¶n so víi nhãm glycerol. VÒ mÆt h×nh th¸i, tû lÖ tinh trïng b×nh th−êng ë nhãm TEST – Yolk Theo thêi gian, nhiÒu m«i tr−êng ®· ®−îc sö còng cao h¬n (p < 0,05). KÕt qu¶ ®· kh¼ng ®Þnh dông ®Ó b¶o qu¶n l¹nh tinh trïng ng−êi. Nh÷ng sö dông TEST – Yolk lµ m«i tr−êng b¶o qu¶n c«ng bè vÒ hiÖu qu¶ cña c¸c m«i tr−êng trong l¹nh tinh dÞch sÏ ®em l¹i mÉu tinh dÞch sau b¶o b¶o qu¶n l¹nh tinh trïng rÊt kh¸c nhau. qu¶n l¹nh cã chÊt l−îng tèt h¬n so víi viÖc sö Theo c¸c t¸c gi¶ Silva A.L, Yamasaki R, de dông glycerol. Do ®ã, c¸c t¸c gi¶ ®· cã khuyÕn Sala M.M, Cabrera M da G, de Sa M.F (1996) c¸o TEST – Yolk lµ m«i tr−êng ®−îc lùa chän [6], qua nghiªn cøu “§¸nh gi¸ hiÖu qu¶ khi ®Çu tiªn ®Ó b¶o qu¶n l¹nh tinh trïng ng−êi. thªm sodium citrate vµ fructose hoÆc sodium ë ViÖt Nam, b¶o qu¶n l¹nh tinh trïng ng−êi citrate vµo m«i tr−êng cã egg yolk, glycerol vµ ®Ó phôc vô cho viÖc ch¨m sãc søc khoÎ sinh TEST trong b¶o qu¶n l¹nh tinh trïng ng−êi” ®· s¶n lµ vÊn ®Ò rÊt cÇn thiÕt vµ míi mÎ. Trong sè cã nhËn xÐt: tû lÖ tinh trïng di ®éng vµ tû lÖ tinh c¸c m«i tr−êng ®−îc c¸c nhµ chuyªn m«n trªn trïng sèng ®Òu gi¶m ë c¶ 2 kho¶ng thêi gian thÕ giíi còng nh− trong n−íc ®· sö dông ®Ó b¶o qu¶n so víi tr−íc khi b¶o qu¶n. C¸c chØ sè b¶o qu¶n l¹nh tinh trïng, m«i tr−êng nµo phï nµy kh«ng cã sù kh¸c biÖt khi so s¸nh 3 lo¹i hîp víi ®iÒu kiÖn, hoµn c¶nh ViÖt Nam? Nh− m«i tr−êng vµ ë 2 kho¶ng thêi gian b¶o qu¶n. vËy, m«i tr−êng b¶o qu¶n cã ý nghÜa quan Sau tan ®«ng 2 giê, c¸c chØ sè ®Òu gi¶m so víi träng ®Õn chÊt l−îng b¶o qu¶n tinh trïng. §Ó ph©n tÝch ngay sau khi tan ®«ng. cã thÓ võa chñ ®éng ®−îc m«i tr−êng, võa ®¶m N¨m 1999, J.K Sherman [5] kÕt luËn: tû lÖ b¶o ®−îc chÊt l−îng b¶o qu¶n tinh trïng còng tinh trïng sèng sau b¶o qu¶n nÕu sö dông m«i nh− víi gi¸ thµnh hîp lý chóng t«i m¹nh d¹n tr−êng b¶o qu¶n lµ glycerol-egg yolk hay nghiªn cøu “HiÖu qu¶ cña m«i tr−êng GEYC glycerol ®¬n thuÇn ®Òu kh«ng cã sù kh¸c nhau. trong b¶o qu¶n l¹nh s©u tinh trïng ng−êi” víi N¨m 2000, c¸c t¸c gi¶ Hallak J, Sharma môc tiªu: §¸nh gi¸ hiÖu qu¶ cña m«i tr−êng R.K, Wellstead C, Agarwal A [3] ®· nghiªn cøu GEYC trong b¶o qu¶n tinh trïng ng−êi b»ng so s¸nh khi sö dông m«i tr−êng b¶o qu¶n lµ l¹nh s©u. TEST-Yolk vµ glycerol ë c¸c kho¶ng thêi gian II. §èi t−îng vµ ph−¬ng ph¸p b¶o qu¶n 0; 60; 120; 180 phót. KÕt qu¶ cho nghiªn cøu thÊy: tû lÖ tinh trïng di ®éng gi¶m ë c¶ hai nhãm, nh−ng tû lÖ tinh trïng di ®éng nhãm 1. §èi t−îng nghiªn cøu. TEST-Yolk cao h¬n ë c¸c kho¶ng thêi gian b¶o - 30 mÉu tinh dÞch cã tinh dÞch ®å b×nh - C«ng tr×nh ®−îc thùc hiÖn t¹i Lao. b¶o qu¶n M« - Ph«i cña tr−êng §¹i häc Y Hµ Néi. 9
th−êng ®−îc xÐt nghiÖm vµ b¶o qu¶n l¹nh s©u 1 Penicillin 1triÖu UI 01 lä t¹i phßng b¶o qu¶n M« - Ph«i, Tr−êng §¹i häc 2 Streptomycin 1 gam 01 lä Y Hµ Néi. 3 Egg yolks Bét kh« 40 gam - Tiªu chuÈn chän ®èi t−îng nghiªn cøu: 4 Glycerol PA 30 ml + Nam giíi trong ®é tuæi sinh s¶n. 5 Glycocol Glycin 2 gam + §· kh«ng xuÊt tinh tõ 3 ®Õn 5 ngµy. 6 Glucose 2,6 gam + Kh«ng sèt, kh«ng dïng thuèc, kh«ng 7 Natri citrat PA 2,3 gam uèng r−îu t¹i thêi ®iÓm lÊy mÉu. 8 N−íc cÊt 2 lÇn, 130 ml 2. Ph−¬ng ph¸p nghiªn cøu. khö ion kim lo¹i Sö dông ph−¬ng ph¸p nghiªn cøu can - Kü thuËt pha: thiÖp. §¸nh gi¸ tr−íc vµ sau can thiÖp t¹i c¸c thêi ®iÓm kh¸c nhau. 1. LÊy 30 ml n−íc cÊt hoµ tan hÕt tinh thÓ (5; 6;7) ®−îc dung dÞch A. 2.1. XÐt nghiÖm tinh dÞch. 2. Läc v« khuÈn dung dÞch A. Lç mµng läc < a. Kh¶o s¸t ®¹i thÓ. 0.22 µm. b. Kh¶o s¸t vi thÓ: §¸nh gi¸ mËt ®é vµ 3. Cho Glycerol vµ Egg yolks vµo dung dÞch ®é di ®éng tinh trïng b»ng kÝnh hiÓn vi quang ®· läc, l¾c ®Òu b»ng m¸y. häc vµ buång ®Õm Makler. TiÕn hµnh sau khi mÉu tinh dÞch ®· ly gi¶i hoµn toµn. 4. Cho ®ñ n−íc cÊt ®Ó ®−îc 200ml. - §¸nh gi¸ tû lÖ tinh trïng di ®éng. 5. ñ ë tñ sÊy 56oC trong 30 phót. + Tinh trïng di ®éng tiÕn tíi nhanh. 6. ChuÈn ®é pH #7,2 b»ng NaHCO3 hoÆc HCl 1N lµ ®¹t ®−îc dung dÞch cÇn pha. + Tinh trïng di ®éng chËm vµ t¹i chç. * Kü thuËt b¶o qu¶n tinh trïng. + Tinh trïng kh«ng di ®éng. - Cho m«i tr−êng b¶o qu¶n l¹nh vµo tinh dÞch: §Õm tæng céng 200 tinh trïng trªn vi tr−êng b»ng m¸y b¸ch ph©n b¹ch cÇu. Sau ®ã tÝnh tû - §ãng gãi. lÖ phÇn tr¨m mçi lo¹i. - H¹ nhiÖt ®é: Sö dông m¸y h¹ nhiÖt ®é tõ - §¸nh gi¸ mËt ®é tinh trïng. tõ -Nicool 10. Kh«ng cÇn pha lo·ng tinh dÞch, bÊt ®éng - L−u tr÷. tinh trïng b»ng nhiÖt tr−íc khi ®Õm. - Tan ®«ng: Tan ®«ng c¸c mÉu tinh dÞch - §¸nh gi¸ h×nh th¸i. ®−îc b¶o qu¶n l¹nh s©u ®Ó kiÓm tra ë c¸c thêi ®iÓm sau b¶o qu¶n 1 ngµy, 2 ngµy, 30 ngµy vµ + Kü thuËt nhuém Giemsa. 90 ngµy. + Kü thuËt nhuém phiÕn ®å theo ph−¬ng 2.3. Xö lý sè liÖu. ph¸p Papanicolaou. C¸c sè liÖu ®−îc xö lý theo phÇn mÒm Epi- - §¸nh gi¸ tû lÖ tinh trïng sèng: ph−¬ng Info Version 6.0 cña WHO. KiÓm ®Þnh sù kh¸c ph¸p nhuém eosin. biÖt b»ng test t vµ sù kh¸c biÖt cã ý nghÜa c. §¸nh gi¸ mÉu tinh dÞch b×nh th−êng: thèng kª khi p < 0,05. Theo tiªu chuÈn chän mÉu tinh dÞch cã tinh dÞch ®å b×nh th−êng theo WHO 1999 [8]. 3. ChØ tiªu ®¸nh gi¸. 2.2. ChuÈn bÞ m«i tr−êng b¶o qu¶n l¹nh - Tû lÖ tinh trïng di ®éng nhanh. Glycerol - egg yolk - citrat (GEYC) [1]: - Tû lÖ tinh trïng di ®éng (nhanh & chËm) * Pha theo c«ng thøc cña Ackerman. - Tû lÖ tinh trïng sèng. - Thµnh phÇn: Thµnh phÇn ®Ó pha 200 ml m«i tr−êng 10
- ChØ sè CSF di ®éng nhanh = % tinh trïng 1.2. Tû lÖ % tinh trïng di ®éng (nhanh & di ®éng nhanh sau b¶o qu¶n: % tinh trïng di chËm) tr−íc vµ sau b¶o qu¶n: ®éng nhanh tr−íc b¶o qu¶n × 100. B¶ng 2: Tû lÖ % tinh trïng di ®éng - ChØ sè CSF di ®éng (nhanh & chËm) = % (nhanh & chËm): X ± SD. tinh trïng di ®éng (nhanh & chËm) sau b¶o So qu¶n: % tinh trïng di ®éng (nhanh & chËm) Tr−íc b¶o qu¶n (A) 70,0 ± 10,0 A víi B tr−íc b¶o qu¶n × 100. 1 ngµy 48,5 ± 12,1 - ChØ sè tinh trïng sèng = % tinh trïng sèng Sau b¶o sau b¶o qu¶n: % tinh trïng sèng tr−íc b¶o 2 ngµy 43,1 ± 11,3 qu¶n (B) P < 0,001 qu¶n × 100. 30 ngµy 43,1 ± 8,4 GEYC III. kÕt qu¶ 90 ngµy 45,0 ± 10,2 Tõ th¸ng 5/2002 ®Õn th¸ng 8/2002, 30 mÉu KÕt qu¶ trªn cho thÊy: tinh dÞch ®· ®−îc lÊy t¹i phßng xÐt nghiÖm b¶o - Nh×n chung, tû lÖ tinh trïng di ®éng qu¶n M« - Ph«i, Tr−êng §¹i häc Y Hµ Néi. (nhanh & chËm) sau b¶o qu¶n ë tÊt c¶ c¸c thêi Nh÷ng mÉu tinh dÞch nµy ®Òu ®−îc kÕt luËn lµ ®iÓm ®¸nh gi¸ ®Òu gi¶m. b×nh th−êng theo tiªu chuÈn cña WHO (1999) - Tû lÖ di ®éng (nhanh & chËm) cña tinh vµ ®−îc b¶o qu¶n b»ng l¹nh s©u (-196°C) m«i trïng sau b¶o qu¶n: gi¸ trÞ trung b×nh thÊp nhÊt tr−êng GEYC. §¸nh gi¸ t¹i c¸c kho¶ng thêi ë kho¶ng thêi gian b¶o qu¶n 30 ngµy (43,1%), gian b¶o qu¶n 1 ngµy, 2 ngµy, 30 ngµy, 90 cao nhÊt ë kho¶ng thêi gian b¶o qu¶n 1 ngµy ngµy. C¸c chØ tiªu ®¸nh gi¸ tr−íc vµ sau b¶o (48,5%) vµ ®Òu thÊp h¬n tû lÖ tinh trïng di qu¶n lµ tû lÖ di ®éng vµ sèng cña tinh trïng. ®éng (nhanh & chËm) tr−íc b¶o qu¶n (43,1% 1. ¶nh h−ëng cña b¶o qu¶n b»ng l¹nh s©u. so víi 70,0%; 48,5% so víi 70,0%). Sù kh¸c 1.1. Tû lÖ % tinh trïng di ®éng nhanh tr−íc biÖt nµy cã ý nghÜa thèng kª (p < 0,001). vµ sau b¶o qu¶n: 1.3. Tû lÖ % tinh trïng sèng tr−íc vµ sau B¶ng 1: Tû lÖ % tinh trïng di ®éng nhanh b¶o qu¶n: (X ± SD). B¶ng 3: Tû lÖ % tinh trïng sèng: X ± SD. Tr−íc b¶o qu¶n (A) 41,9 ± 20 So Tr−íc b¶o qu¶n (A) 81,0 ± 6,9 So A víi B A víi B 1 ngµy 21,4 ± 8,6 1 ngµy 61,2 ± 12,9 Sau b¶o Sau b¶o 2 ngµy 19,8 ± 8,6 2 ngµy 58,1 ± 11,7 qu¶n (B) P < 0,001 qu¶n (B) P < 0,001 GEYC 30 ngµy 20,2 ± 6,6 30 ngµy 61,0 ± 11,3 GEYC 90 ngµy 21,6 ± 8,2 90 ngµy 59,7 ± 11,1 Qua b¶ng 3.1 cho thÊy: Qua b¶ng 3 cho thÊy: - Nh×n chung, tû lÖ tinh trïng di ®éng nhanh - Tû lÖ tinh trïng sèng sau b¶o qu¶n ë tÊt sau b¶o qu¶n ë c¸c thêi ®iÓm ®Òu gi¶m. c¶ c¸c thêi ®iÓm ®¸nh gi¸ ®Òu gi¶m. - Tû lÖ di ®éng nhanh cña tinh trïng sau - Tû lÖ sèng cña tinh trïng sau b¶o qu¶n: b¶o qu¶n: gi¸ trÞ trung b×nh thÊp nhÊt ë kho¶ng gi¸ trÞ trung b×nh thÊp nhÊt ë kho¶ng thêi gian thêi gian b¶o qu¶n 2 ngµy (19,8%), cao nhÊt ë b¶o qu¶n 2 ngµy (58,1%), cao nhÊt ë kho¶ng kho¶ng thêi gian b¶o qu¶n 90 ngµy (21,6%) vµ thêi gian b¶o qu¶n 1 ngµy (61,2%) vµ ®Òu thÊp ®Òu thÊp h¬n tû lÖ tinh trïng di ®éng nhanh h¬n tû lÖ tinh trïng sèng tr−íc b¶o qu¶n tr−íc b¶o qu¶n (41,9%). Sù kh¸c biÖt cã ý (58,1% so víi 81,0%; 61,2% so víi 81,0%). Sù nghÜa thèng kª (p < 0,001). kh¸c biÖt cã ý nghÜa thèng kª (p < 0,001). 11
2. §¸nh gi¸ t¸c dông cña m«i tr−êng GEYC qua c¸c kho¶ng thêi gian b¶o qu¶n kh¸c nhau. B¶ng 4. ChØ sè chÊt l−îng tinh trïng ë c¸c kho¶ng thêi gian b¶o qu¶n khi sö dông m«i tr−êng GEYC (X ± SD). Thêi gian BQ 1 ngµy (I) 2 ngµy (II) 30 ngµy (III) 90 ngµy (IV) PI,II,III,IV ChØ sè (%) CSF (D§ nhanh) 56,7 ± 0,2 52,3 ± 18,3 55,7 ± 23,0 56,7 ± 18,8 p > 0,05 CSF (D§ nhanh & chËm) 69,0 ± 5,2 62,3 ± 16,5 62,3 ± 12,2 64,0 ± 13,5 p > 0,05 ChØ sè TT sèng 76,0 ± 3,5 72,0 ± 13,0 75,3 ± 13,8 73,7 ± 13,8 p > 0,05 M«i tr−êng b¶o qu¶n tinh trïng ®−îc c¸c Qua kÕt qu¶ trªn cho thÊy: nhµ nghiªn cøu quan t©m bëi vai trß cña nã ®Ó n©ng cao chÊt l−îng tinh trïng sau b¶o qu¶n. - ChØ sè CSF di ®éng nhanh cã gi¸ trÞ trung Theo thêi gian ®· cã nhiÒu m«i tr−êng ®−îc sö b×nh thÊp nhÊt ë kho¶ng thêi gian b¶o qu¶n 2 dông, c«ng bè vÒ hiÖu qu¶ cña c¸c m«i tr−êng ngµy (52,3%) vµ cao nhÊt ë kho¶ng thêi gian trong b¶o qu¶n tinh trïng còng rÊt kh¸c nhau. b¶o qu¶n 1 ngµy (56,7%). Tuy nhiªn, khi so N¨m 1949, Polge [5] ®· sö dông glycerol lµ s¸nh tõng cÆp, sù kh¸c biÖt nµy kh«ng cã ý m«i tr−êng b¶o qu¶n l¹nh tinh trïng ®· ®em l¹i nghÜa thèng kª (PI,II,III,IV > 0,05). Nh− vËy kh«ng kÕt qu¶ kh¶ quan, cho ®Õn nay Ng©n hµng tinh cã sù liªn quan chØ sè CSF cao hay thÊp víi tr−êng §¹i häc tæng hîp Arkansas vÉn sö dông kho¶ng thêi gian l−u tr÷ dµi hay ng¾n trong m«i glycerol ®¬n thuÇn. C¸c nghiªn cøu 10 n¨m tr−êng GEYC. ë c¸c kho¶ng thêi gian b¶o qu¶n gÇn ®©y ®−îc c«ng bè, ®· ®Ò cËp nhiÒu ®Õn chØ sè nµy ®Òu ®¹t yªu cÇu do AATB quy ®Þnh. c¸c m«i tr−êng phèi hîp bëi nhiÒu thµnh phÇn - ChØ sè CSF di ®éng (nhanh & chËm) cã nh−: egg yolk, glycerol, glucose, fructose, gi¸ trÞ trung b×nh thÊp nhÊt ë kho¶ng thêi gian glycine, citrate [Na citrate, K citrate], TES [N- b¶o qu¶n 2 ngµy (62,3%) vµ cao nhÊt ë tris (hydroxymethyl) aminomethane sulfonic kho¶ng thêi gian b¶o qu¶n 1 ngµy (69,0%). Khi acid], tris [(hydroxymethyl) aminomethane],… so s¸nh tõng cÆp, sù kh¸c biÖt kh«ng cã ý §· chøng tá r»ng m«i tr−êng phèi hîp ®ã ®· nghÜa thèng kª (PI,II,III,IV > 0,05). Nh− vËy kh«ng ®em l¹i chÊt l−îng tinh trïng sau b¶o qu¶n tèt cã sù liªn quan chØ sè CSF cao hay thÊp víi h¬n so víi glycerol ®¬n thuÇn. Hallak [3] ®· kho¶ng thêi gian l−u tr÷ dµi hay ng¾n khi dïng kh¼ng ®Þnh sö dông m«i tr−êng TEST (TES & m«i tr−êng GEYC. ë c¸c kho¶ng thêi gian b¶o tris) – Yolk tèt h¬n glycerol. Foote R.H [2] kÕt qu¶n, chØ sè nµy ®Òu ®¹t yªu cÇu do AATB quy luËn m«i tr−êng egg yolk-citrate-glucose- ®Þnh. glycerol vµ egg yolk-tris-glucose-glycerol tèt - ChØ sè tinh trïng sèng cã gi¸ trÞ thÊp nhÊt h¬n rÊt nhiÒu so víi glycerol ®¬n thuÇn. Trong ë kho¶ng thêi gian b¶o qu¶n 2 ngµy (72,0%) nghiªn cøu nµy sö dông m«i tr−êng GEYC, kÕt vµ cao nhÊt ë kho¶ng thêi gian b¶o qu¶n 1 qu¶ cho thÊy: ngµy (76,0%). Khi so s¸nh tõng cÆp, sù kh¸c ChØ sè CSF di ®éng nhanh vµ CSF di ®éng biÖt kh«ng cã ý nghÜa thèng kª (PI,II,III,IV > 0,05). (nhanh vµ chËm) còng nh− tû lÖ % tinh trïng di IV. bµn luËn ®éng nhanh vµ chËm ë c¸c kho¶ng thêi gian * M«i tr−êng glycerol ®¬n thuÇn vµ c¸c m«i sau b¶o qu¶n ®Òu cã gi¶m so víi tr−íc b¶o tr−êng phèi hîp nhiÒu thµnh phÇn: qu¶n víi p < 0,001 (b¶ng 1; 2 vµ 3). Tuy nhiªn møc ®é gi¶m cã kh¸c nhau. 12
KÕt qu¶ trªn cho thÊy sö dông m«i tr−êng Chóng t«i tù pha lÊy, trong ®ã kh«ng cã thµnh GEYC b¶o qu¶n tinh trïng ng−êi phï hîp víi phÇn TEST, c¸c nguyªn liÖu kh¸c ®Òu nhËp tõ nhËn xÐt cña c¸c t¸c gi¶ trong vµ ngoµi n−íc. n−íc ngoµi, quy tr×nh t−¬ng ®èi phøc t¹p, ®ßi * M«i tr−êng cã egg yolk vµ c¸c m«i tr−êng hái tiªu chuÈn cao vÒ v« trïng vµ an toµn sinh phèi hîp kh«ng cã egg yolk: häc, cho nªn ph¶i bæ sung thªm kh¸ng sinh. Tuy nhiªn gi¸ thµnh so víi m«i tr−êng kh¸c M«i tr−êng nhiÒu thµnh phÇn cã egg yolk ®· trªn thÞ tr−êng th× t−¬ng ®èi rÎ. Mçi lÇn chóng ®−îc kh¼ng ®Þnh trong b¶o qu¶n tinh trïng. t«i pha 200ml, chia thµnh c¸c èng nhá 2ml b¶o N¨m 1999, theo J.K. Sherman [5] cã rÊt nhiÒu qu¶n ë -200C, sö dông trong 3 th¸ng. Kh«ng sö trung t©m b¶o qu¶n tinh trïng trªn thÕ giíi sö dông l¹i sau tan ®«ng. M«i tr−êng Sperm dông m«i tr−êng cã chøa egg yolk nh−: Ng©n freeze nhËp ngo¹i ®−îc ®ãng gãi v« trïng. hµng gen vµ tinh trïng, tr−êng §¹i häc Tæng Chai 20ml, b¶o qu¶n ë 20C-80C, gi¸ thµnh kh¸ hîp Nebraska vµ Ng©n hµng gen l¹nh quèc tÕ cao. sö dông TESNaK-EYG cã glucose kh«ng cã citrate. Ng©n hµng l¹nh Califonia vµ Phßng thÝ Sau tan ®«ng, quan s¸t nh÷ng mÉu tinh nghiÖm gen l¹nh Quèc tÕ sö dông TEST-EYG trïng ®−îc b¶o qu¶n trong m«i tr−êng GEYC kh«ng cã glucose, cã citrate. HiÖn nay cßn d−íi kÝnh hiÓn vi quang häc, chóng t«i nhËn nhiÒu quan ®iÓm kh¸c nhau vÒ m«i tr−êng egg thÊy cã nhiÒu h¹t egg yolk xen lÉn víi tinh yolk vµ c¸c thµnh phÇn kh¸c. trïng. Nh÷ng h¹t nµy cã thÓ g©y khã kh¨n khi läc röa tinh trïng sau b¶o qu¶n. §Ó kh¾c phôc Silva A.L [6] ®· kÕt luËn m«i tr−êng TEST- vÊn ®Ò nµy cÇn ®−îc phèi hîp nghiªn cøu chi Yolk, TEST-Yolk thªm 20% sodium citrate, 2% tiÕt h¬n. fructose vµ TEST-Yolk thªm 20% sodium citrate khi sö dông b¶o qu¶n tinh trïng ®Òu tèt Qua nh÷ng kÕt qu¶ thu ®−îc, chóng t«i cho nh− nhau. Cßn theo Stanic P [7] vµ Hammadeh r»ng víi −u thÕ vÒ chÊt l−îng, gi¸ c¶, chñ M.E [4], m«i tr−êng TEST-Yolk tèt h¬n HSPM ®éng, tiÖn lîi vµ tÝnh khoa häc, m«i tr−êng (m«i tr−êng Tyrode cã glycerol). C¸c t¸c gi¶ GEYC thÝch hîp cho b¶o qu¶n tinh trïng b»ng khuyÕn c¸o TEST-Yolk lµ m«i tr−êng ®−îc lùa l¹nh s©u. Tuy nhiªn, ®Ó ®¸p øng ®−îc cho thùc chän ®Çu tiªn b¶o qu¶n tinh trïng. tiÔn c¸c nhµ l©m sµng còng nh− øng dông réng r·i trong b¶o qu¶n tinh trïng cÇn cã nh÷ng ChØ sè CSF di ®éng (nhanh & chËm) ë nghiªn cøu tiÕp theo víi quy m« vµ thêi gian kho¶ng thêi gian sau b¶o qu¶n 1 ngµy, 2 ngµy, lín h¬n ®Ó cã kÕt luËn tho¶ ®¸ng h¬n. 30 ngµy vµ 90 ngµy ®Òu ®¹t kh¸ cao (69,0%; 62,3%; 62,3% vµ 64%) (B¶ng 3.4). KÕt qu¶ V. kÕt luËn nµy chøng tá hiÖu qu¶ cña m«i tr−êng GEYC Nghiªn cøu hiÖu qu¶ cña m«i tr−êng GEYC cho b¶o qu¶n tinh trïng trong l¹nh s©u ®¹t yªu trong b¶o qu¶n l¹nh s©u tinh trïng ng−êi, cÇu do AATB quy ®Þnh. chóng t«i cã nh÷ng kÕt luËn sau: Víi nh÷ng m«i tr−êng nhiÒu thµnh phÇn cã 1. ChÊt l−îng tinh trïng sau b¶o qu¶n b»ng egg yolk, cã hoÆc kh«ng cã TEST th× chÊt l−îng m«i tr−êng GEYC ®¶m b¶o theo tiªu chuÈn cho b¶o qu¶n cã kh¸c nhau kh«ng? Trong 10 cña AATB. n¨m gÇn ®©y kh«ng thÊy nghiªn cøu nµo c«ng 2. M«i tr−êng GEYC cã thÓ tù chñ ®éng pha bè. Theo Foote R.H [2], sö dông m«i tr−êng egg t¹i phßng thÝ nghiÖm víi gi¸ thµnh phï hîp víi yolk-citrate-glucose-glycerol vµ egg yolk-tris- ®iÒu kiÖn ViÖt Nam. glucose-glycerol cho kÕt qu¶ tû lÖ di ®éng sau tan - B¸o c¸o lµ mét phÇn trong luËn v¨n cao häc. ®«ng t−¬ng øng lµ 35% vµ 37%. T¸c gi¶ khuyÕn B¹n ®äc cã thÓ t×m ®äc toµn v¨n t¹i th− viÖn c¸o mét m«i tr−êng cã egg yolk vµ tris nªn ®−îc tr−êng §HYHN, trung t©m th«ng tin Y häc vµ sö dông trong b¶o qu¶n tinh trïng. th− viÖn Quèc gia. Víi m«i tr−êng GEYC chóng t«i ¸p dông tµi liÖu tham kh¶o pha theo c«ng thøc do Ackerman giíi thiÖu. 13
1. Tr−¬ng C«ng Hæ, Hå M¹nh T−êng 5. J.K.Sherman. (1990), “ Cryopreservation (2001), “Ph−¬ng ph¸p tr÷ tinh trïng”, Ph−¬ng of human semen”, CRC Handbook of the ph¸p xÐt nghiÖm tinh dÞch, BÖnh viÖn Phô s¶n Laboratory Diagnosis and Treatment of Tõ Dò, Thµnh phè Hå ChÝ Minh. Infertility, pp: 229-258. 2. Foote R.H., Mc Gonagle., Goldstein M., 6. Silva A.L., Yamasaki R., de-Sala M.M., Feldschuh J. (2002), “The influence of Cabrera M-da-G., de-Sa M.F. (1996), “The cryoprotective media and processing addition of fructose or sodium citrate does not procedures on motility and migration of frozen- improve recovery rates of cryopreserved thawed human sperm”, Asian J Androl, 4(2), human spermatozoa”, Int-J-Fertil-Menopausal- pp: 137-41. Stud, 41(3), pp: 304-9. 3. Hallak J., Sharma R.K., Wellstead C., 7. Stanic P., Tandara M., Sonicki Z., Agarwal A. (2000), “Cryopreservation of human Simunic V., Radakovic B., Sukhanek E. (2000), spermatozoa: comparison of TEST-Yolk buffer “Comparison of protective media and freezing and glycerol”, Int-J-Fertil-Womens-med, 45(1), techniques for cryopreservation of Human pp: 38-42. semen”, Eur-J-Obstet-Gynecol-Reprod-Biol, 4. Hammadeh M.E., Greiner S., 91(1), pp: 65-70. Rosenbaum P., Schmidt W. (2001), 8. World health organisation (1999). WHO “Comparison between human sperm laboratory manual for the examination of preservation medium and TEST – Yolk buffer human semen and sperm – Cervical mucus on protecting chromatin and morphology interation, fourth edition, Cambridge University integradity of human spermatozoa in fertile and press.34. subfertile men after freeze – thawing procedure”, J Androl, 22(6), pp: 1012 – 8. Summary The effect of GEYC on deep-cryopreserved human spermatozoa Deep-cryopreserved 30 samples of human spermatozoa in GEYC medium, it is prepared at Lab, shows that quality of cryopreserved spermatozoa conforms to criteria of AATB. GEYC medium would be performed at Laboratory with low cost andBBPP suitability of Vietnamese condition. 14