Nghiên cứu định lượng memantin hydroclorid bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao

Chia sẻ: _ _ | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:4

Thêm vào BST

Báo xấu

5
lượt xem 2
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Memantin là thuốc ức chế men N- methyl -Daspartate có tác dụng bảo vệ tế bào chống lại sự gia tăng hoạt tính của hệ thống glutamat là nguyên nhân gây ra bệnh sa sút trí tuệ. Bài viết nghiên cứu xây dựng và thẩm định phương pháp định lượng memantin hydroclorid bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao.

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Nghiên cứu định lượng memantin hydroclorid bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao

TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 490 - THÁNG 5 - SỐ 2 - 2020 nhân khi ra viện (p > 0,05). và di chứng của VNNB ở trẻ em: sốt > 40oC và Nghiên cứu trên 118 trẻ được chẩn đoán không đáp ứng với thuốc hạ nhiệt có nguy cơ VNNB từ 1997 đến 2005 tại Malaysia cho thấy sự nặng cao gấp 16,286 lần. Suy hô hấp, số ngày kết hợp của tình trạng tưới máu kém, điểm phải sử dụng an thần cùng với hình ảnh CHT sọ Glasgow ≤ 8, và có ≥ 2 cơn co giật có liên quan não biểu hiện tổn thương đồi thị và tổn thương đến tiên lượng xấu về lâu dài, với độ nhạy 65% tăng tín hiệu trên xung T2. Nhưng mỗi yếu tố và độ đặc hiệu 92%.[4]. không phải là yếu tố liên quan độc lập đến tình Nghiên cứu của Gitali Kakoti và cộng sự năm trạng di chứng của bệnh. 2013 cho thấy tỷ lệ tử vong cao hơn (17,95%) ở trẻ vào viện trước 7 ngày kể từ khi khởi phát TÀI LIỆU THAM KHẢO 1. Solomon T., Ni H., Beasley D. W. et al (2003). bệnh. Tuy nhiên, sự khác biệt này không được Origin and evolution of Japanese encephalitis virus tìm thấy có ý nghĩa thống kê. Tỷ lệ tử vong cao in southeast Asia. J Virol, 77 (5), 3091-3098. hơn đáng kể ở bệnh nhân có GCS từ 3 đến 8 2. Bộ Y Tế. (2008). Hướng dẫn chẩn đoán và xử trí (26,92%, P
vietnam medical journal n02 - MAY - 2020 Năm 2019, Bệnh viện Quân y 354- Tổng cục Hậu Với các điều kiến sắc ký đã chọn, tiến hành cần được Bộ Quốc phòng giao nhiệm vụ đề tài chạy sắc ký với mẫu có nồng độ 20 µg/ml. Kết nghiên cứu tổng hợp nguyên liệu và bào chế quả hình 1 cho thấy trên sắc ký đồ xuất hiện píc viên nén Memantin giải phóng kéo dài. Để đánh của memantin cân đối, sắc nét, chân pic hẹp và giá chất lượng sản phẩm cần có phương pháp thời gian xuất hiện pic khoảng 4,6 phút. định lượng phù hợp với điều kiện thực tế trong 0.080 0.075 nước, dễ triển khai. Do đó, chúng tôi đặt vấn đề 0.070 0.065 0.060 nghiên cứu xây dựng và thẩm định phương pháp 0.055 0.050 định lượng memantin hydroclorid bằng sắc ký 0.045 0.040 AU 0.035 lỏng hiệu năng cao. 0.030 0.025 0.020 0.015 II. NGUYÊN VẬTLIỆUVÀPHƯƠNG PHÁPNGHIÊN CỨU 0.010 0.005 2.1. Nguyên vật liệu, hóa chất và thiết bị 0.000 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00 7.20 7.40 7.60 7.80 8.00 Minutes - Chất chuẩn memantin hydroclorid (Wako – Hình 1. Sắc ký đồ của chuẩn memantin Nhật Bản), memantin HCl do nhóm đề tài tổng hydroclorid ở điều kiện đã chọn hợp được (số lô 010719); methanol (Merck – Từ kết quả này, chúng tôi lựa chọn điều kiện Đức), Nước cất, methanol, acetonitril đạt tiêu phân tích PC là cột C18 (250 x 4,6 mm, 5µm) chuẩn HPLC, và một số hóa chất dung môi khác hoặc tương đương; detector UV đo ở 274 nm; đạt tiêu chuẩn tinh khiết phân tích. pha động là MeOH. Thể tích bơm mẫu là 10µl. - Hệ thống HPLC Waters e2695 (Mỹ); Cột C18 (250 x 4,6 mm), đường kính hạt: 5µm; dectector Tốc độ dung môi pha động là 1,0 ml/phút. Waters PDA 996; Cân phân tích Mettler có độ 3.2 Kết quả thẩm định phương pháp chính xác 0,1 mg - Đức và - Các dụng cụ thí định lượng nghiệm khác: Cối, chày, bình định mức, cốc có Tính tương thích hệ thống, chọn lọc – mỏ, rây và các dụng cụ khác… đạt tiêu chuẩn đặc hiệu. Phân tích đồng thời mẫu chuẩn dùng cho phòng thí nghiệm phân tích. memantin hydroclorid, mẫu trắng trong cùng 2.2.Phương pháp nghiên cứu điều kiện sắc ký đã lựa chọn được. Kết quả cho *Chuẩn bị mẫu. Mẫu chuẩn: Cân chính xác thấy rằng, tại vị trí xuất hiện đáp ứng pic của các 100,0mg memantin hydrochlorid chuẩn vào bình chất cần phân tích trên sắc ký đồ mẫu chuẩn và định mức 100ml. Thêm 50ml dung dịch methanol. đồng thời không xuất hiện pic tương ứng trên Lắc siêu âm trong 10 phút cho tan hết. Bổ sung các mẫu trắng. Pic của memantin hydroclorid thêm methanol đến vạch định mức thu được dung trên mẫu thử là cân đối, sắc nét, độ rộng chân dịch có nồng độ 1 mg/ml. Hút chính xác 10 ml pic nhỏ. Kết quả trên cho thấy phương pháp dung dịch trên cho vào bình định mức 100 ml, bổ đảm bảo độ chọn lọc và đặc hiệu (Hình 2). 0.080 sung methanol đến vạch thu được dung dịch 0.075 0.070 chuẩn gốc có nồng độ 100µg/ml. Từ dung dịch 0.065 0.060 0.055 chuẩn gốc, pha các dung dịch chuẩn làm việc có 0.050 0.045 nồng độ 5, 10, 15, 20 và 25µg/ml. Mẫu trắng là MeOH. 0.040 AU 0.035 0.030 *Lựa chọn điều kiện sắc ký. Các thông số 0.025 0.020 0.015 cho quá trình sắc ký bao gồm: cột C18 (250 x 0.010 0.005 4,6 mm, 5µm), detector UV đo ở 274 nm; pha 0.000 -0.005 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00 7.20 7.40 7.60 7.80 8.00 Minutes động sắc ký MeOH; thể tích bơm mẫu là 10µl; 0.080 0.075 tốc độ dung môi pha động là 1,0 ml/phút [2]. 0.070 0.065 0.060 * Thẩm định phương pháp phân tích 0.055 0.050 0.045 Phương pháp phân tích được thẩm định theo 0.040 AU 0.035 0.030 hướng dẫn chung của ICH (International 0.025 0.020 0.015 Conference on Harmonisation) về thẩm định 0.010 0.005 phương pháp phân tích [3] gồm: Tính tương 0.000 -0.005 -0.010 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80 4.00 4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00 7.20 7.40 7.60 7.80 8.00 thích hệ thống, chọn lọc–đặc hiệu; khoảng nồng Minutes độ tuyến tính; độ chính xác; độ đúng; giới hạn Hình 2. SKĐ khảo sát tính chọn lọc – đặc hiệu phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ). của phương pháp (a) SKĐ mẫu trắng (MeOH); *Xử lý số liệu. Số liệu được phân tích thống (b) SKĐ mẫu chuẩn PC kê trên phần mềm Microsoft Excel Office 2010. Đường chuẩn và khoảng tuyến tính. Tiến hành pha chế một dãy nồng độ các chất chuẩn từ 5; III. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 10; 15; 20; 25 mcg/ml, chạy sắc ký với điều kiện đã 3.1 Kết quả lựa chọn điều kiện sắc ký chọn. Kết quả được trình bày ở bảng 1 và hình 3. 98
TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 490 - THÁNG 5 - SỐ 2 - 2020 Bảng 1: Kết quả xây dựng đường chuẩn của memantin HCl bằng phương pháp HPLC Nồng độ (µg/ml) 5 10 15 20 25 Diện tích pic (µV*s) 33.733 68.041 101.890 136.074 173.103 tính với hệ số tương quan R2 là 0,9997. Phương trình đường chuẩn được xây dựng là: Y = 6.935,5X - 1.463,7. Như vậy, phương pháp định lượng có độ tuyến tính cao giữa đáp ứng diện tích pic và nồng độ dung dịch trong khoảng nồng độ từ 5-25 µg/ml. Độ lặp lại. Chuẩn bị các mẫu hỗn hợp chuẩn LQC, MQC, HQC của PC (nồng độ lần lượt là 5, 15 và 25 µg/ml). Mỗi nồng độ chuẩn bị 3 mẫu. Hình 3: Đường chuẩn biểu diễn sự tương Phân tích sắc ký theo điều kiện đã lựa chọn được quan giữa nồng độ memantin HCl và diện trong cùng một ngày, sau 2 và 3 ngày để xác tích pic đo được định độ lặp lại trong ngày và khác ngày. Kết quả Kết quả khảo sát cho thấy diện tích pic và được trình bày ở bảng 2. nồng độ (C) của mẫu đo có tương quan tuyến Bảng 2: Kết quả đánh giá độ lặp lại trong ngày và khác ngày của PC Ngày 1 Ngày 2 Ngày 3 Nồng độ mẫu phân tích Nồng độ ngoại suy Nồng độ ngoại suy từ Nồng độ ngoại suy từ đường chuẩn đường chuẩn từ đường chuẩn = 5,17 = 5,18 = 5,19 LQC SD = 0,09 SD = 0,07 SD = 0,05 (5 µg/ml) RSD=1,99% RSD=1,27% RSD=1,04% Giá trị thống kê cả 3 ngày = 5,18; SD= 0,06; RSD = 1,22% = 14,84 = 15,01 = 14,97 MQC SD = 0,14 SD = 0,03 SD = 0,04 (15 µg/ml) RSD=0,94% RSD=0,20% RSD=0,26% Giá trị thống kê cả 3 ngày = 14,94; SD= 0,11; RSD = 0,71% = 25,19 = 25,18 =25,14 HQC SD = 0,12 SD = 0,12 SD = 0,12 (25 µg/ml) RSD=0,47% RSD=0,47% RSD=0,49% Giá trị thống kê cả 3 ngày = 25,17; SD= 0,11; RSD = 0,42% Kết quả bảng 2 cho thấy, độ lệch chuẩn tương đối ở các điểm khảo sát trong ngày và khác ngày đều < 2%. Như vậy, phương pháp xây dựng được đảm bảo độ lặp lại của phép thử định lượng. Độ đúng: Độ đúng của phương pháp được thực hiện theo phương pháp thêm chuẩn. Chuẩn bị mẫu thử theo như mô tả ở mục chuẩn bị mẫu thử. Sau đó thêm các lượng chuẩn ở 3 mức LQC, MQC và HQC vào các mẫu này. Phân tích sắc ký theo điều kiện đã lựa chọn được. Xác định Độ thu hồi hoạt chất được xác định dựa vào tỉ lệ % lượng tìm thấy theo đường chuẩn so với lượng thực tế thêm vào. Kết quả được trình bày trong bảng 3 Bảng 3: Kết quả đánh giá độ đúng của phương pháp Lượng thêm vào Độ thu hồi LQC MQC HQC ( ± SD, %) 105,50 ± 0,50 97,58 ± 0,52 95,68 ± 0,52 (RSD = 0,48%) (RSD = 0,53%) (RSD = 0,55%) Kết quả bẳng 3 cho thấy: ở 3 điểm khảo sát, giá đều nằm trong giới hạn của ICH [3]. Như vậy độ thu hồi của phương pháp đều lớn hơn 95%. phương pháp đã xây dựng và thẩm định này phù Do vậy, phương pháp định lượng đáp ứng yêu hợp cho định lượng memantin hydroclorid trong cầu về độ đúng. các mẫu viên nén memantin hydroclorid. Chúng Như vậy, phương pháp phân tích định lượng tôi đã áp dụng phương pháp định lượng này xác memantin hydroclorid bằng HPLC đảm bảo tính định làm lượng memantin HCl tổng hợp được kết tương thích hệ thống, độ đặc hiệu, độ chọn lọc, quả hàm lượng của sản phẩm đạt 99,05% đạt độ đúng và độ chính xác cao, các kết quả đánh tiêu chuẩn USP 38. 99
vietnam medical journal n02 - MAY - 2020 IV. BÀN LUẬN HPLC sử dụng detector UV ở bước sóng 274 nm Memantin HCl là dẫn chất của khung với điều kiện dung môi hòa tan là methanol, cột adamantan do vậy trong các nghiên cứu thường Sunfire C18 (4,6 × 250 mm; 5 µm), tốc độ dòng: sử dụng phương pháp sắc ký khí để định lượng 1,0 ml/phút, thể tích tiêm 10µl, pha động là [6], phương pháp này có độ chính xác cao, tuy MeOH. Phương pháp đã xây dựng là tương thích nhiên đòi hỏi có trang thiết bị đắt tiền, khâu xử với hệ thống sắc ký, đảm bảo độ chọn lọc đặc lý mẫu phức tạp. Ngoài ra, cũng có thể thực hiện hiệu; độ đúng (>95%) và độ chính xác cao (RSD định lượng theo phương pháp UV-VIS bằng cách