Phân lập và định danh vi khuẩn Aeromonas hydrophila trên ếch thái lan "Rana tigerina" nuôi tại khu vực ven đô thành phố Hồ Chí Minh

Chia sẻ: Nguyen Quoc Nam | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:6

Thêm vào BST

Báo xấu

290
lượt xem 73
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

This study was conducted from September 2006 to September 2007 to identify major pathogens, especially bacteria, of diseased frog (Rana tigerina) farmed in the peri –urban area of Ho Chi Minh City. Challenge of cultured frog with Aeromonas hydrophila. That were isolated from diseased frogs with clinical signs of ulcerative syndrome were carried out. Experimental frogs were injected on the vetral left thigh with a variety of bacterial concentrations. Average 18-25g sized frog (Rana tigerina) were stocked at 10 frogs/tank. ...

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Phân lập và định danh vi khuẩn Aeromonas hydrophila trên ếch thái lan "Rana tigerina" nuôi tại khu vực ven đô thành phố Hồ Chí Minh

180 NGHIEÂN CÖÙU KHOA HOÏC KYÕ THUAÄT PHAÂN LAÄP VAØ ÑÒNH DANH VI KHUAÅN Aeromonas hydrophila TREÂN EÁCH THAÙI LAN “Rana tigerina” NUOÂI TAÏI KHU VÖÏC VEN ÑOÂ THAØNH PHOÁ HOÀ CHÍ MINH CHARACTERIZATION OF BACTERIA ISOLATED FROM FARMED FROG (Rana tigerina) IN PERI – URBAN OF HCM CITY Traàn Hoàng Thuûy Boä moân Sinh hoïc vaø Quaûn lyù Nguoàn lôïi Thuûy saûn, Khoa Thuûy saûn Tröôøng Ñaïi hoïc Noâng Laâm Tp. HCM ABSTRACT lôùn veà kinh teá cho ngöôøi daân. Phong traøo nuoâi eách coù phaàn chöõng laïi. Theo baùo caùo cuûa Vieän Nghieân This study was conducted from September 2006 Cöùu Söùc Khoûe Ñoäng Vaät Thuûy Saûn- Thaùi Lan to September 2007 to identify major pathogens, (AAHRI) naêm 1997, 120 loaøi vi khuaån phaân laäp ñöôïc especially bacteria, of diseased frog (Rana tigerina) töø eách bình thöôøng vaø eách beänh ôû caùc traïi thuoäc 8 farmed in the peri –urban area of Ho Chi Minh tænh cuûa Thaùi Lan. Nhöõng vi khuaån xaùc ñònh ñöôïc City. Challenge of cultured frog with Aeromonas chuû yeáu laø vi khuaån Gram aâm nhö: Aeromonas hydrophila. That were isolated from diseased frogs hydrophila, A.sobria, Pseudomonas…. Moät soá nghieân with clinical signs of ulcerative syndrome were cöùu khaùc cuûa Somsiri vaø ctv,1997, cuõng tìm thaáy carried out. Experimental frogs were injected on A.hydrophila treân eách bò beänh lôû loeùt ôû Thaùi Lan the vetral left thigh with a variety of bacterial trong quaù trình phaân laäp vaø ñònh danh. Döïa treân concentrations. Average 18-25g sized frog (Rana nhöõng keát quaû ñaõ nghieân cöùu taïi Thaùi Lan, ñoàng tigerina) were stocked at 10 frogs/tank. There were thôøi xuaát phaùt töø tình hình thöïc teá veà dòch beänh four treatments with triplicate each: control trong nöôùc, vieäc tìm ra nguyeân nhaân vaø bieän phaùp (injected with 0.85% sterile NaCl), 9x106 cfu/ml, phoøng trò beänh höõu hieäu laø yeâu caàu caàn thieát. Chuùng 9x10 7 cfu/ml, and 9x10 8 cfu/ml for bacterial toâi tieán haønh “Phaân laäp vaø ñònh danh vi khuaån infection challenges. The mortalities occurred at A.hydrophila treân eách Thaùi Lan Rana tigerina nuoâi bacterial concentration of 9x106 cfu/ml, 9x107 cfu/ taïi khu vöïc ven ñoâ TP.Hoà Chí Minh”. ml, and 9x108 cfu/ml were 57%, 90% and 100%, respectively. No bacteria were isolated from frogs Muïc ñích cuûa nghieân cöùu naøy laø phaân laäp vaø in the control at the end of experiment. ñònh danh ñöôïc vi khuaån Aeromonas hydrophila treân eách nuoâi bò beänh ñoàng thôøi tieán haønh gaây caûm Signs of moribund frogs included light-reddish nhieãm ngöôïc vi khuaån A.hydrophila treân eách nuoâi fluid in the body cavity and haemorrhage on the khoûe maïnh ñeå xaùc ñònh xem A.hydrophila coù ñuùng skin of abdomen and thigh. Aeromonas hydrophila laø vi khuaån gaây beänh lôû loeùt vaø ñoû chaân treân eách were isolated frog diseased frog in bacterial Thaùi Lan nuoâi taïi Khu vöïc ven ñoâ TP.Hoà Chí Minh injection challenge treatments. Those results point hay khoâng? Töø ñoù coù höôùng nghieân cöùu tieáp theo out the importance of Aeromonas hydrophila as veà vaán ñeà phoøng vaø trò beänh cho eách, goùp phaàn causal agents of ulcerative syndrome in frog. duy trì vaø phaùt trieån nuoâi eách coâng nghieäp taïi khu vöïc Thaønh phoá Hoà Chí Minh trong thôøi gian tôùi. GIÔÙI THIEÄU VAÄT LIEÄU VAØ PHÖÔNG PHAÙP Thaønh Phoá Hoà Chí Minh nhöõng naêm gaàn ñaây roä leân phong traøo nuoâi eách vôùi nhieàu hình thöùc nuoâi Noäi dung khaùc nhau. Nguoàn eách gioáng ñöôïc nhaäp veà töø Thaùi Lan. EÁch Thaùi Lan Rana tigerina voøng ñôøi ngaén, Phaân laäp vaø ñònh danh vi khuaån A.hydrophila taêng tröôûng nhanh vaø thích hôïp vôùi ñieàu kieän nuoâi treân maãu eách beänh thu taïi khu vöïc Quaän 9, Q. Thuû taïi khu vöïc ven ñoâ Thaønh phoá Hoà Chí Minh. Tuy Ñöùc, huyeän Cuû Chi, Hoùc Moân. nhieân, song song vôùi söï phaùt trieån nuoâi eách coâng nghieäp ñoù laø söï gia taêng ñaùng keå tình hình dòch Gaây caûm nhieãm ngöôïc vi khuaån A.hydrophila beänh laøm eách cheát haøng loaït maø khoâng roõ nguyeân treân eách gioáng khoûe maïnh. nhaân. EÁch beänh coù nhöõng bieåu hieän laâm saøng nhö meät moûi boû aên, xuaát hieän nhöõng veát lôû loeùt treân da Phöông phaùp vaø toån thöông ôû chaân sau, buïng xuaát huyeát, chaân baïi lieät, queïo coå, muø maét, sình buïng. tyû leä cheát leân tôùi Phöông phaùp phaân laäp vaø ñònh danh vi khuaån töø 80-90%. Do thieáu kinh nghieäm trong kyõ thuaät nuoâi eách nuoâi bò beänh theo phöông phaùp truyeàn thoáng neân dòch beänh thöôøng xuyeân xaûy ra, gaây thieät haïi cuûa Bergey Taïp chí KHKT Noâng Laâm nghieäp, soá 1&2/2007 Ñaïi hoïc Noâng Laâm Tp. HCM
NGHIEÂN CÖÙU KHOA HOÏC KYÕ THUAÄT 181 - Thu maãu eách beänh töø moät soá traïi nuoâi taïi ngoaøi hieän tröôøng leân eách gioáng khoûe maïnh coù khu vöïc nghieân cöùu. Thu maãu vaøo caùc thôøi ñieåm troïng löôïng töø 18-25g/con. trong thôøi gian 14 ngaøy. xaûy ra dòch beänh vaø thu maãu ñònh kyø moãi thaùng moät laàn, töø thaùng 9/2006 ñeán thaùng 9/2007. Thí nghieäm goàm: nghieäm thöùc ñoái chöùng, nghieäm thöùc coù maät ñoä vi khuaån 9x106cfu/ml, - Tieán haønh giaûi phaãu eách beänh thu maãu maùu, 9x107cfu/ml vaø 9x108cfu/ml. moãi nghieäm thöùc ñöôïc gan, laùch, thaän. tuïy nuoâi caáy treân moâi tröôøng NA laäp laïi 3 laàn. (Nutrien Agar). UÛ ôû 37oC trong thôøi gian töø 18-24 giôø. Choïn khuaån laïc rieâng leû phaân laäp, caáy truyeàn, Maät ñoä EÁch thí nghieäm 10con/beå (kích thöôùc beå laøm thuaàn taêng sinh sau ñoù nhuoäm gram, thöû caùc 30cm x 40cm x 35cm). phaûn öùng sinh hoùa, ñònh danh baèng boä kit API- 20E (BioMerieus, Phaùp). Sau khi phaân laäp ñöôïc vi Lieàu gaây beänh: Tieâm vaøo cô ñuøi moãi eách 0,1ml khuaån Aeromonas hydrophila chuùng toâi tieán haønh huyeàn dòch vi khuaån. Loâ ñoái chöùng moãi eách ñöôïc gaây caûm nhieãm leân eách gioáng khoûe maïnh. Neáu vi tieâm 0,1 ml nöôùc muoái sinh lyù. khuaån thu ñöôïc töø eách bò beänh nhaân taïo (vôùi daáu hieäu beänh lyù töông töï) laø vi khuaån phaân laäp ñöôïc Trong quaù trình boá trí thí nghieäm eách ôû taát caû töø maãu eách beänh ngoaøi hieän tröôøng thì keát luaän vi caùc loâ thí nghieäm ñöôïc chaêm soùc nhö nhau. Theo khuaån ñoù chính laø taùc nhaân gaây beänh. doõi caùc bieåu hieän baát thöôøng cuûa eách, thu maãu eách cheát hoaëc coù bieåu hieän beänh, yeáu. Tieán haønh moå, Phöông phaùp gaây beänh thöïc nghieäm phaân laäp ñònh danh nhöõng eách beänh vaø nhöõng eách coøn soáng soùt sau thôøi gian keát thuùc thí nghieäm. Chuùng toâi tieán haønh gaây caûm nhieãm ngöôïc vi khuaån A.hydrophila phaân laäp ñöôïc töø eách beänh Sô ñoà khaùi quaùt quaù trình thöïc hieän EÁch beänh Giaûi phaãu Thu maãu (Maùu, Gan, Tuïy, thaän, dòch buïng) Nuoâi caáy treân moâi tröôøng thaïch NA (Nutrient Agar) UÛ ôû 37 oC thôøi gian 18-24 giôø Phaân laäp vi khuaån (choïn khuaån laïc rieâng leû) Laøm thuaàn Giöõ gioáng Nhuoäm gram Thöû caùc phaûn öùng sinh hoùa (Oxidease, catalase, di ñoäng) Quan saùt hình thaùi vi khuaån Ñònh danh vi khuaån Gaây beänh thöïc nghieäm Ñaïi hoïc Noâng Laâm Tp. HCM Taïp chí KHKT Noâng Laâm nghieäp, soá 1&2/2007
182 NGHIEÂN CÖÙU KHOA HOÏC KYÕ THUAÄT KEÁT QUAÛ THAÛO LUAÄN A.hydrophila tieán haønh gaây caûm nhieãm ngöôïc leân eách khoûe maïnh. Keát quaû phaân laäp vi khuaån töø eách beänh thu ngoaøi hieän tröôøng Keát quaû gaây caûm nhieãm ngöôïc Sau khi thu maãu eách beänh töø caùc traïi thuoäc khu Sau khi tieán haønh gaây beänh thöïc nghieäm vi vöïc nghieân cöùu, chuùng toâi tieán haønh phaân laäp 145 khuaån A.hydrophila treân eách gioáng khoûe maïnh coù maãu vi khuaån töø caùc cô quan nhö: Maùu tim, Gan, troïng löôïng töø 18-25g, trong thôøi gian 14 ngaøy. Laùch, tuïy, Thaän, dòch buïng. Keát quaû ñònh danh nhö Keát quaû cho thaáy: sau: 45 maãu A.hydrophila, 68 maãu (bao goàm 14 gioáng vi khuaån) nhö: Chryseobacterium indologenes, Sau 8 giôø keå töø khi baét ñaàu tieâm vi khuaån, ôû Salmonella choleraesuis ssp/arizonal, Vibrio, nghieäm thöùc coù maät ñoä vi khuaån laø 9x108cfu/ml: Pasteurella pneumotropica, Pseudomonas eách coù bieåu hieän meät moûi baát ñoäng khoâng aên vaø flurescens/putida, Enterobacteria, Citrobacter baét ñaàu coù eách bò cheát freundii ….32 maãu chöa ñònh danh ñöôïc.(Bieåu ñoà 1). Sau 10 giôø keå töø khi baét ñaàu tieâm vi khuaån, eách Töø keát quaû ñònh danh vi khuaån thu ñöôïc treân ôû nghieäm thöùc coù maät ñoä vi khuaån 9x107cfu/ml cuõng eách beänh ngoaøi hieän tröôøng, keát hôïp vôùi caùc keát baét ñaàu cheát raûi raùc vaø sau 12 giôø thì eách ôû nghieäm quaû nghieân cöùu tröôùc ñaây cuûa Vieän Nghieân Cöùu Söùc thöùc coù maät ñoä vi khuaån 9x106cfu/ml baét ñaàu cheát. Khoûe Ñoäng Vaät Thuûy Saûn-Thaùi Lan (AAHRI) naêm EÁch cheát cô theå bò tích nöôùc, xuaát huyeát döôùi da, 1997; Somsiri vaø ctv,1996. Chuù n g toâ i choï n tuoät nhôùt, taïi veát tieâm ôû ñuøi sau cô bò hoaïi töû. Aeromonas hydrophila Chöa ñònh danh ñöôïc 31% 22% Caùc loaøi VK khaùc 47% Bieåu ñoà 1. Tyû leä % vi khuaån ñònh danh ñöôïc töø eách beänh ngoaøi hieän tröôøng Taïp chí KHKT Noâng Laâm nghieäp, soá 1&2/2007 Ñaïi hoïc Noâng Laâm Tp. HCM
NGHIEÂN CÖÙU KHOA HOÏC KYÕ THUAÄT 183 Hình 1. EÁch bò beänh sau khi tieâm vi khuaån Aeromonas hydrophila 90% Tyû leä eách coøn soáng sau TN 80% 70% 60% 50% 87% (%) 40% 30% 43% 20% 10% 10% 0% 0% Ñoái chöùng 9x106cfu/ml 9x107cfu/ml 9x108cfu/ml Noàng ñoä vi khuaån (cfu/ml) Bieåu ñoà 3. Tyû leä soáng cuûa eách Sau thôøi gian gaây caûm nhieãm ngöôïc Chuùng toâi tieán haønh moå, phaân laäp, ñònh danh Sau 14 ngaøy theo doõi thí nghieäm, chuùng toâi ghi 85 maãu vi khuaån taïi moät soá cô quan nhö: Dòch öù nhaän keát quaû: sau 24 giôø eách ôû nghieäm thöùc coù trong khoang buïng, gan, laùch, thaän, cô vaø maùu tim. noàng ñoä vi khuaån 9x108cfu/ml eách cheát 100%. ôû Keát quaû ghi nhaän ñöôïc nhö sau: 52 maãu laø nghieäm thöùc coù noàng ñoä vi khuaån 9x107cfu/ml sau A.hydrophila chieám 61,17%, 21 maãu laø caùc vi khuaån 14 ngaøy eách cheát 90%. ÔÛ nghieäm thöùc coù noàng ñoä khaùc (Seratia liquefaciens, Chyseomonas luteola, vi khuaån 9x106cfu/ml eách cheát 57%. Nghieäm thöùc Enterobacter, Salmonella arizonae, Escherichia coli ñoái chöùng 13%. Pasteurella…). (Bieåu ñoà 2). Bieåu ñoà 3 cho thaáy tyû leä eách coøn soáng soùt sau Tieáp tuïc theo doõi thí nghieäm, sau 2 ngaøy EÁch ôû thôøi gian boá trí thí nghieäm. Chuùng toâi tieán haønh nghieäm thöùc tieâm noàng ñoä vi khuaån 9x108 cfu/ml moå taát caû nhöõng eách coøn soáng sau 14 ngaøy, phaân cheát 100%. Sau 5 ngaøy taát caû nhöõng eách coøn soáng laäp, ñònh danh keát quaû cho thaáy: quan saùt thaáy taïi veát tieâm coù hieän töôïng lôû loeùt, hoaïi töû. Moät soá eách coù hieän töôïng lôû loeùt treân da Nghieäm thöùc ñoái chöùng moå 26 eách (87%), khoâng vaø töù chi. Moå quan saùt noäi taïng eách cheát, yeáu thaáy coù söï hieän dieän cuûa vi khuaån A.hydrophila. gan, laùch, thaän coù hieän töôïng muû traéng. Tuy nhieân 10 ngaøy sau khi tieâm, nhöõng eách coøn soáng soùt taïi Nghieäm thöùc coù noàng ñoä vi khuaån 9x106cfu/ml veát tieâm coù hieän töôïng kheùp mieäng, vaø keát thuùc soá eách soáng soùt 13 eách (43%) quan saùt ngoaøi thaáy thí nghieäm nhöõng eách coøn soáng veát thöông ñaõ laønh, bình thöôøng. Moå quan saùt noäi taïng taát caû caùc eách eách aên bình thöôøng. gan, laùch, thaän ñeàu bò muû. Tuy nhieân, khoâng laøm eách cheát. Ñaïi hoïc Noâng Laâm Tp. HCM Taïp chí KHKT Noâng Laâm nghieäp, soá 1&2/2007
184 NGHIEÂN CÖÙU KHOA HOÏC KYÕ THUAÄT Hình 2. Hình daïng khuaån laïc vi khuaån A.hydrophila phaân laäp töø eách beänh Hình 3. A.hydrophila gaây hoaïi töû cô ñuøi eách Nghieäm thöùc coù noàng ñoä vi khuaån 9x107cfu/ml KEÁT LUAÄN soá eách soáng soùt 03 eách(10%). Quan saùt beân ngoaøi moät soá eách veát thöông ñaõ kheùp mieäng nhöng chöa A.hydro phila laø vi khuaån chieám öu theá trong hoaøn toaøn laønh (hình 3), moå noäi taïng caùc cô quan quaù trình phaân laäp ñöôïc töø eách beänh lôû loeùt ngoaøi ñeàu bò muû. Vi khuaån ñònh danh vaãn coù söï hieän hieän tröôøng. dieän cuûa A.hydrophila nhöng ít hôn keát quaû ñònh danh ban ñaàu. Sau khi gaây beänh thöïc nghieäm, vi khuaån thu ñöôïc töø eách bò beänh thöïc nghieäm cuõng chính laø vi Töø keát quaû ghi nhaän ñöôïc sau thôøi gian thí khuaån khi tieâm vaøo eách khoûe. EÁch coù caùc bieåu hieän nghieäm, chuùng toâi ñöa ra keát luaän A.hydrophila töông töï eách beänh ngoaøi hieän tröôøng. chính laø moät trong soá nhöõng vi khuaån gaây beänh lôû loeùt treân eâch nuoâi taïi khu vöïc ven ñoâ thaønh phoá A.hydrophila chính laø moät trong soá vi khuaån Hoà Chí Minh. Keát quaû naøy cuõng gioáng vôùi keát quaû gaây beänh lôû loeùt treân eách Thaùi Lan nuoâi taïi khu nghieân cöùu cuûa Somsiri vaø ctv (1997), khi gaây caûm vöïc ven ñoâ Thaønh phoá Hoà Chí Minh. nhieãm ngöôïc treân eách Thaùi Lan vôùi A.hydrophila vaø A.sobria thì trieäu chöùng laâm saøng treân eách phuø Keát quaû thu ñöôïc töông töï keát quaû nghieân cöùu hôïp vôùi bieåu hieän ban ñaàu khi phaân laäp 2 loaøi vi beänh treân eách Thaùi Lan cuûa Somsiri vaø ctv naêm khuaå n naø y . Gibbs,(1973) cuõ n g cho raè n g 1997 ôû Thaùi Lan. A.hydrophila ñöôïc xem laø nguyeân nhaân gaây neân trieäu chöùng lôû loeùt vaø tyû leä cheát cao ñoái vôùi eách trong ñieàu kieän phoøng thí nghieäm. Taïp chí KHKT Noâng Laâm nghieäp, soá 1&2/2007 Ñaïi hoïc Noâng Laâm Tp. HCM
NGHIEÂN CÖÙU KHOA HOÏC KYÕ THUAÄT 185 TAØI LIEÄU THAM KHAÛO Kantimanee Panwichien and Supranee Chinabut, 1997. Somsiri T., S. Chinabut, and S. Soontornvit, Temdoung Somsiri., Supranee Chinabut and 1997. Challenge of cultured frogs (Rana tigerina) Suriyan Soontornvit, 1996. Challenge of cultured with Aeromonas Species. In: T.W Flegel and I.H. frogs (Rana tigerina) with Aeromonas spp. In MacRae (eds.), Diseases in Asian Aquaculture III. Proceedings of World Aquaculture,1996. The 1996 Fish Health Section, Asian Fisheries Society, Annual Meeting of the World Aquaculture Society. Manila. Kanchanakhan. S., 1998. An ulcerative disease of Vieän nghieân cöùu nuoâi troàng Thuûy Saûn II, 1992. Baøi the cultured Tiger Frog, Rana tigerina, in giaûng veà beänh caù toâm. Boä Thuûy Saûn. Thailand: Virological Exammination. AAHRI Newsletter Article Vol. 7(2). Vieän nghieân cöùu nuoâi troàng Thuûy Saûn II, 1992. Caùc baøi thöïc haønh nghieân cöùu vaø chuaån ñoaùn beänh Caù- Temdoung Somsiri. Diseases of cultured frogs in Toâm. Boä Thuûy Saûn. Thailan. Aquatic Animal Health Research Institute Department of Fisheries Jatujak Bangkok 10900. Leâ Thanh Huøng, 2000. Kyõ thuaät nuoâi coâng nghieäp eách Thaùi Lan (Rana rugulosa). Tröôøng Ñaïi hoïc Noâng Laâm Thaønh phoá Hoà Chí Minh. Ñaïi hoïc Noâng Laâm Tp. HCM Taïp chí KHKT Noâng Laâm nghieäp, soá 1&2/2007