Xây dựng qui trình multiplex PCR phát hiện đồng thời HPV (human papilloma virus) và lậu cầu khuẩn (neisseria gonorrhoeae)

Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Số 3 * 2011<br /> <br /> XÂY DỰNG QUI TRÌNH MULTIPLEX PCR PHÁT HIỆN ĐỒNG THỜI HPV<br /> (HUMAN PAPILLOMA VIRUS) VÀ LẬU CẦU KHUẨN<br /> (NEISSERIA GONORRHOEAE)<br /> Trần Đăng Thắng*,**, Nguyễn Văn Trương*, Hồ Thị Thanh Thủy***, Nguyễn Thúy Hương**<br /> <br /> TÓM TẮT<br /> Việc xây dựng qui trình multiplex PCR phát hiện đồng thời hai tác nhân gây bệnh HPV và Neisseria<br /> gonorrhoeae có ý nghĩa quan trọng trong chẩn đoán và điều trị, đồng thời cũng sẽ góp phần giảm thiểu tối đa chi<br /> phí trong sàng lọc các bệnh nhiễm ở đường sinh dục.<br /> Phương pháp: Hệ mồi được chúng tôi xây dựng dựa trên dữ liệu trình tự gien của HPV và Neisseria<br /> gonorrhoeae đã được công bố trên NCBI và khảo sát những điều kiện tối ưu cho việc xây dựng qui trình<br /> multiplex PCR phát hiện đồng thời HPV và Neisseria gonorrhoeae<br /> Kết quả: Hai cặp mồi chúng tôi thiết kế cho quy trình là hoàn toàn đặc hiệu với các trình tự mục tiêu, có<br /> hiệu quả nhân bản cao và độ nhạy hai cặp mồi có nồng độ ngưỡng mà phương pháp có thể xác định được đồng<br /> thời cả hai tác nhân gây bệnh này là 2 x 103 copies/ml. Và thử nghiệm được thực hiện trên 30 mẫu bệnh thu nhận<br /> ở Bệnh viện Hùng Vương, Bệnh Viện Da Liễu có 7 mẫu dương trong đó 4 mẫu dương với HPV (13%), 2 mẫu<br /> dương tính với Neisseria gonorrhoeae (6%) và 1 mẫu đồng nhiễm HPV với Neisseria gonorrhoeae (3%).<br /> Kết luận: Từ kết quả trên, chúng tôi kết luận đã xây dựng thành công quy trình Multiplex –PCR phát hiện<br /> đồng thời thời hai tác nhân gây bệnh HPV và Neisseria gonorrhoeae.<br /> Từ khóa: multiplex PCR, Human Papilloma Virus, Neisseria gonorrhoeae.<br /> <br /> ABSTRACT<br /> ESTABLISHMENT OF MULTIPLEX PCR ASSAY FOR SIMULTANEOUS DETECTION OF<br /> HUMANPAPILLOMA VIRUS AND NEISSERIA GONORRHOEAE<br /> Tran Đang Thang, Nguyen Van Truong, Ho Thi Thanh Thuy, Nguyen Thuy Huong<br /> * Y hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 15 – No. 3 – 2011: 172 - 176<br /> Objective: The process construction of multiplex PCR for simultaneous detection of two pathogens<br /> Neisseria gonorrhoeae and HPV has important implications for diagnosis and treatment, and will also contribute<br /> to minimize the cost of screening genital tract infections.<br /> Method: Primers were designed basing on the sequence database of HPV and Neisseria gonorrhoeae (NCBI)<br /> and we examined optimal conditions for the assay in order to simultaneously detect HPV and Neisseria<br /> gonorrhoeae.<br /> Results: Two primer pairs showed completely specific to the target with a high sensitivity that approached<br /> the threshold which could be determined at 2 x 103 copies / ml. We have tested these primers on 30 samples<br /> collected at Hung Vuong Hospital, and Dermato-Venereological Hospital. There were seven positive samples: four<br /> samples (13%) positive with HPV, two samples (6%) positive with Neisseria gonorrhoeae and one sample (3%)<br /> positive with HPV and Neisseria gonorrhoeae.<br /> Conclusions: Given such results, we have successfully built a Multiplex-PCR assay for simultaneous<br /> <br /> <br /> Bệnh viện Hùng Vương *, Khoa Kỹ Thuật Hóa Học, Đại Học Bách Khoa **, Công ty cổ phần Việt Á***<br /> Tác giả liên lạc: CN. Trần Đăng Thắng ĐT: 0908212026<br /> Email: thangxnhv@yahoo.com<br /> <br /> 174<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Số 3 * 2011<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> detection of Neisseria gonorrhoeae and HPV.<br /> Key words: multiplex PCR, Human Papilloma Virus, Neisseria gonorrhoeae.<br /> thể được ứng dụng hỗ trợ trong chẩn đoán và<br /> ĐẶT VẤN ĐỀ<br /> điều trị, sẽ rất tiện lợi cho việc phát hiện hai tác<br /> Hiện tại, theo ước tính, Việt Nam có khoảng<br /> nhân gây bệnh ở đường sinh dục người, cũng<br /> 800.000 đến 1.000.000 người mắc các bệnh nhiễm<br /> như góp phần giảm thiểu chi phí trong sàng lọc<br /> trùng lây qua đường sinh dục mỗi năm. Trong<br /> các bệnh nhiễm ở đường sinh dục.<br /> đó, HPV và Neisseria gonorrhoeae ngày càng được<br /> VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP<br /> đặc biệt quan tâm. Các bệnh này có thể gây ra<br /> những hậu quả nghiêm trọng như: Vô sinh, lây<br /> Mẫu<br /> truyền sang con (khi người phụ nữ có thai),<br /> Đối chứng dương DNA vi khuẩn N.<br /> hoặc có thể dẫn đến tử vong.<br /> gonorrhoeae được cung cấp từ Trung Tâm Kiểm<br /> Trước đây, việc chẩn đoán các bệnh HPV<br /> Chuẩn Xét Nghiệm Thành Phố (75a Cao Thắng,<br /> và Neisseria gonorrhoeae chủ yếu bằng các<br /> Phường 3, Quận 3, TP.HCM) có nồng độ DNA<br /> phương pháp truyền thống, như là phương<br /> mẫu là 3.107 copies/ml và đối chứng dương HPV<br /> pháp miễn dịch đối với HPV (Human Papilloma<br /> có nồng độ là 3.107 copies/ml được cung cấp từ<br /> Virus) và phương pháp nuôi cấy đối với<br /> Bệnh Viện Hùng Vương.<br /> Neisseria gonorrhoeae, nhưng các phương pháp<br /> Ba mươi mẫu phết âm đạo và dịch mủ bộ<br /> này không đủ nhạy, thời gian kéo dài và tỏ ra<br /> phận sinh dục được thu thập từ Viện Da Liễu,<br /> kém hiệu quả.<br /> Bệnh Viện Hùng Vương.<br /> Hiện tại, trên thế giới cũng như ở Việt Nam,<br /> kit PCR phát hiện cùng lúc C. trachomatis và<br /> Neisseria gonorrhoeae đã được thương mại hóa.<br /> Trái lại, kit phát hiện phát hiện đồng thời HPV<br /> và Neisseria gonorrhoeae cũng có tiềm năng,<br /> nhưng hiện tại ở Viêt Nam chưa có kit phát hiện<br /> đồng thời hai tác nhân này. Vì vậy trong nghiên<br /> cứu này chúng tôi sẽ khảo sát những điều kiện<br /> tối ưu để xây dựng quy trình multiplex PCR<br /> phát hiện đồng thời HPV và Neisseria gonorrhoeae.<br /> Quy trình sau khi được xây dựng thành công có<br /> <br /> Mồi<br /> Hai hệ mồi (được tóm tắt trong bảng 1) sử<br /> dụng trong nghiên cứu này được chúng tôi thiết<br /> kế, dựa vào trình tự các porA gene của N.<br /> Gonorrhoeae và các trình tự gene L1 của tất cả các<br /> type HPV công bố trên ngân hàng gene và được<br /> tổng hợp bởi công ty IDT (MỸ).<br /> <br /> Bảng 1. Kết quả thiết kế hệ primer-probe<br /> Tên<br /> <br /> Chức năng<br /> <br /> Trình tự<br /> <br /> portA-N.gono<br /> portA-N.gono<br /> L1-HPV<br /> L1-HPV<br /> <br /> Mồi xuôi<br /> Mồi ngược<br /> Mồi xuôi<br /> Mồi ngược<br /> <br /> GCCTGCTACTTTCACGCTG<br /> GGATCGGTATCACTCGCTCTG<br /> CGTCCMARRGGAWACTGATC<br /> GCMCAGGGWCATAAYAATGG<br /> <br /> Phương pháp multiplex PCR<br /> DNA từ mẫu dịch phết tế bào âm đạo bệnh<br /> nhân được ly trích bằng phương pháp sử dụng<br /> phenol/chloroform, phỏng theo phương pháp<br /> của Chomczynski & Sacchi (1987): 100 l dịch tế<br /> bào được thêm vào 900 l Trizol. DNA sau đó<br /> được tủa bằng Isopropanol với chất trợ tủa<br /> <br /> Chiều dài<br /> (bp)<br /> 19<br /> 21<br /> 20<br /> 20<br /> <br /> Kích thước sản<br /> phẩm PCR (bp)<br /> 207<br /> 207<br /> 455<br /> 455<br /> <br /> GlycoBlue. DNA thu được sau tủa được cho vào<br /> 50µl dung dịch TE 1X và dùng pipet trộn đều<br /> cho đến khi phần cặn tan hoàn toàn, bảo quản ở<br /> -20oC cho đến khi sử dụng.<br /> Phản ứng multiplex PCR được thiết lập<br /> trong 20 l gồm: Mix phản ứng, dịch DNA<br /> tách chiết, hai cặp mồi portA-N.gonof- portA-<br /> <br /> 175<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Số 3 * 2011<br /> <br /> KẾT QUẢ – BÀN LUẬN<br /> <br /> chứng dương chúng tôi chọn có khả năng sử<br /> dụng tốt phù hợp cho việc khảo sát độ đặc hiệu<br /> của hai cặp mồi chúng tôi thiết kế. Và điều quan<br /> trọng khi nhìn trên hình điện di chúng tôi nhận<br /> thấy ở các giếng 2-4-6-8-10-12-14 cho kết quả âm<br /> tính với hai cặp mồi N. gonorrhoeae –HPV. Như<br /> vậy chúng tôi có thể kết luận rằng hai cặp mồi<br /> chúng tôi thiết kế có khả năng nhân bản hiệu<br /> quả và đặc hiệu với trình tự mục tiêu N.<br /> gonorrhoeae, HPV mà không bắt cặp với các trình<br /> tự của vi sinh vật khác trên người. Hai cặp mồi<br /> chúng tôi sử dụng cho quy trình là hoàn toàn<br /> đặc hiệu với các trình tự mục tiêu, có hiệu quả<br /> nhân bản cao.<br /> <br /> Kết quả khảo sát độ đặc hiệu của hai cặp mồi<br /> <br /> Kết quả khảo sát độ nhạy của quy trình<br /> <br /> Mồi có độ đặc hiệu cao là mồi chỉ bắt cặp<br /> với trình tự N.gonorrhoeae hoặc HPV mà không<br /> bắt cặp với các vi sinh vật khác. Và sản phẩm<br /> khuếch đại đặc trưng là các đoạn DNA có kích<br /> thước như đã nghiên cứu, sau quá trình điện di<br /> được so với thang DNA chuẩn.<br /> <br /> Để khảo sát độ nhạy của quy trình chúng tôi<br /> sử dụng nồng độ DNA trong bản mẫu là 2 x 107<br /> copies/ml. Tiến hành pha loãng mẫu theo bậc 10<br /> và cho chạy phản ứng PCR cho từng nồng độ.<br /> <br /> N. gonor và L1-HPVf- L1-HPVr, H2O (Bio –<br /> pure). Các mẫu sử dụng trong phản ứng gồm:<br /> 2<br /> <br /> 7<br /> <br /> các mẫu chứng có nồng độ từ 10 -10 , các mẫu<br /> thử. Chương trình luân nhiệt như sau: 1 chu<br /> o<br /> <br /> o<br /> <br /> o<br /> <br /> kì 95 C - 5 phút; 40 chu kì 94 C - 30 giây, 50 C<br /> - 30 giây, 72oC - 30 giây; 1 chu kỳ 72 oC - 6<br /> phút.<br /> <br /> Giải trình tự<br /> Sản phẩm PCR của HPV và Neisseria<br /> gonorrhoeae sau đó gửi đến công ty Macrogen,<br /> Hàn quốc để tinh sạch và giải trình tự.<br /> <br /> Hình 1: Kết quả độ đặc hiệu của hai cặp mồi Giếng 1:<br /> HBV (+); Giếng 2: HBV (-); Giếng 3: HPV& N.<br /> gonorrhoeae (+); Giếng 4: HPV & N. gonorrhoeae (-);<br /> Giếng 5: C. trachomatis (+); Giếng 6: C. trachomatis<br /> (-); T: Thang DNA 100bp; Giếng 7: HSV (+); Giếng<br /> 8: HSV (-); Giếng 9: DNA Người(+); Giếng 10:<br /> DNA Người(-); Giếng 11: MTB (+); Giếng 12: MTB<br /> (-)<br /> Giếng 13: CMV (+); Giếng 14: CMV (-).<br /> Theo hình 1, chúng tôi nhận thấy ở giếng 3<br /> hai vạch mục tiêu hiện sáng rõ điều đó có nghĩa<br /> là hai cặp mồi của chúng tôi có khả năng nhân<br /> bản tốt đúng trình tự mục tiêu, còn ở các giếng<br /> 1-5-7-9-11-13 thấy xuất hiện các vạch sáng đúng<br /> với vị trí bắt cặp của 6 mồi HBV, C. trachomatis,<br /> HSV, DNA người và MTB điều đó có nghĩa là 6<br /> <br /> 176<br /> <br /> Hình 2: Kết quả độ nhạy của mẫu. Giếng 1(107):<br /> Nồng độ 2 x 107 copies/ml. Giếng 2(106): Nồng độ 2 x<br /> 106 copies/ml; Giếng 3(105): Nồng độ 2 x 105<br /> copies/ml; Giếng 4(104): Nồng độ 2 x 104 copies/ml;<br /> Giếng 5(103): Nồng độ 2 x 103 copies/ml; Giếng<br /> 6(102): Nồng độ 2 x 102 copies/ml; Giếng 7(101):<br /> Nồng độ 2 x 101 copies/ml; Giếng T: Thang 100bp.<br /> Kết quả hình 2 cho ta thấy, từ giếng 1 đến<br /> giếng 5 các vạch mục tiêu vẫn xuất hiện, giếng 5<br /> (2 x 103 copies/ml) cường độ sáng yếu đi nhiều<br /> và đến giếng 6 thì không còn nhìn thấy vạch<br /> mục tiêu xuất hiện, điều đó chứng tỏ rằng nồng<br /> độ ngưỡng mà phương pháp có thể xác định<br /> được đồng thời cả hai tác nhân gây bệnh là 2 x<br /> 103 copies/ml hay nói cách khác là với phương<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Số 3 * 2011<br /> pháp Multiplex – PCR này thì chúng tôi có thể<br /> phát hiện được sự tồn tại của hai tác nhân gây<br /> bệnh ngay cả khi số lượng của chúng trong mẫu<br /> tối thiểu là 2x103 copies/ml.<br /> <br /> Kết quả khảo sát trên mẫu bệnh thực tế<br /> Sau khi khảo sát các điều kiện tối ưu cho<br /> một phản ứng Multiplex –PCR, chúng tôi<br /> khảo sát trên mẫu bệnh thực tế ở nhiệt độ lai<br /> tối ưu là 50oC.<br /> <br /> Kết quả điện di sản phẩm PCR 12 mẫu bệnh<br /> phẫm (lô 1)<br /> <br /> Hình 3: Kết quả điện di sản phẩm PCR lô 1. Giếng 1:<br /> Chứng Dương; Giếng 2: Chứng Âm Giếng 3 →14:<br /> mẫu số 1 đến mẫu số 12; Giếng T: Thang 100 bp<br /> Nhìn trên hình 3 chúng tôi nhận thấy ở<br /> giếng số 3 có xuất hiện vạch sáng ứng với vị trí<br /> 207bp và 455bp, giếng 5 vạch sáng xuất hiện<br /> ứng với vị trí 207 bp và duy nhất giếng số 9 có<br /> vạch sáng ứng với vị trí 445 bp. Như vậy, có thể<br /> kết luận được rằng trong lô mẫu chúng tôi khảo<br /> sát thì mẫu số 3 đồng nhiễm với HPV và N.<br /> gonorrhoeae, mẫu số 5 dương tính với N.<br /> gonorrhoeae và mẫu số 9 dương tính với HPV.<br /> <br /> Kết quả điện di sản phẩm PCR 12 mẫu bệnh<br /> phẫm (Lô 2)<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> Kết quả điện di trên hình 4 cho thấy trong<br /> 12 mẫu bệnh phẩm chúng tôi khảo sát được<br /> có 2 mẫu nằm ở giếng 13 và giếng 19 dương<br /> tính với HPV và mẫu ở giếng 15 dương tính<br /> với N. gonorrhoeae.<br /> <br /> Kết quả điện di sản phẩm PCR 6 mẫu bệnh<br /> phẫm (Lô3)<br /> Theo như kết quả điện di trên hình 5 cho<br /> thấy trong 6 mẫu bệnh phẩm chúng tôi khảo<br /> sát được có 1 mẫu nằm ở giếng 28 dương tính<br /> với HPV.<br /> <br /> Hình 5: Kết quả điện di sản phẩm PCR Lô 3: Giếng<br /> (+): Chứng Dương; Giếng (-): Chứng Âm; Giếng T:<br /> Thang 280 bp -447 bp -585 bp; Giếng 25→ 30: mẫu<br /> 25 đến 30.<br /> <br /> KẾT LUẬN<br /> Như vậy chúng tôi đã bước đầu xây dựng<br /> thành công quy trình Multiplex – PCR để phát<br /> hiện đồng thời HPV và Neisseria gonorrhoeae với<br /> độ đặc hiệu và độ nhạy cao. Và thử nghiệm<br /> được thực hiện trên 30 mẫu bệnh thu nhận ở<br /> Bệnh viện Hùng Vương, Bệnh Viện Da Liễu có 7<br /> mẫu dương trong đó 4 mẫu dương với HPV<br /> (13%), 2 mẫu dương tính với Neisseria<br /> gonorrhoeae (6%) và 1 mẫu đồng nhiễm HPV với<br /> Neisseria gonorrhoeae (3%). Bước đầu, các kết quả<br /> này đã được kiểm chứng lại bằng giải trình tự<br /> sản phẩm PCR và kết quả của cả hai phương<br /> pháp cho thấy hoàn toàn trùng khớp với nhau.<br /> <br /> TÀI LIỆU THAM KHẢO<br /> Hình 4: Kết quả điện di sản phẩm PCR Lô 2 Giếng<br /> (+): Chứng Dương; Giếng (-): Chứng Âm; Giếng T:<br /> Thang 280 bp -447 bp -585 bp; Giếng 13→ 24: mẫu<br /> 13 đến 24.<br /> <br /> 1.<br /> <br /> 2.<br /> <br /> Cao Thị Bảo Vân (2006). Xây dựng và chuẩn hóa bộ kit phát hiện<br /> C. trachomatis và N. gonorrhoeae trong bệnh phẩm. Viện<br /> Pasteur TP. HCM.<br /> Chernesky M, Freund GG, Hook E III (2007). Detection of<br /> Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeaeInfections in<br /> North American Women by Testing SurePath Liquid-Based Pap<br /> <br /> 177<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> Specimens in APTIMA Assays. Volume 45, pages 2434-2438.<br /> Koumans EH. (2002). Comparison of Methods for Detection of<br /> Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae Using<br /> Commercially Available Nucleic Acid Amplification Tests and a<br /> Liquid Pap Smear Medium. Volume 41, Pages 1507-1511.<br /> Mahony JB, Song X, Chong S., Faught M., Salonga T., Kapala J.<br /> (2001). Evaluation of the NucliSens Basic Kit for Detection of<br /> Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae in Genital Tract<br /> Specimens Using Nucleic Acid Sequence-Based Amplification of<br /> <br /> 3.<br /> <br /> 4.<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Số 3 * 2011<br /> <br /> 5.<br /> <br /> 6.<br /> <br /> 16S rRNA. Volume 39, Pages 1429-1425.<br /> Nguyễn Hoàng Chương (2005). Xây dựng quy trình PCR phát<br /> hiện papillomavirus (hpv) trong dịch phết âm đạo. Y Học TP.<br /> Hồ Chí Minh, Tập 9, số 1.<br /> Whiley PJ, et al (2004). A new confirmatory Neisseria<br /> gonorrhoeae real-time PCR assay DM. targeting the porA<br /> pseudogene.<br /> <br /> TẦN SUẤT NGUY CƠ MẮC TIỀN ĐÁI THÁO ĐƯỜNG<br /> VÀ KHẢ NĂNG RÚT NGẮN THỜI GIAN THỰC HIỆN NGHIỆM PHÁP<br /> DUNG NẠP GLUCOSE<br /> Trần Ngọc Thanh*. Nguyễn Thị Lệ**<br /> <br /> TÓM TẮT<br /> Mở đầu: Việt Nam nằm trong nhóm nước có tỷ lệ bệnh đái tháo đường (ĐTĐ) tăng nhanh nhất trên thế<br /> giới. Theo báo cáo của Trung tâm dinh dưỡng TPHCM cho biết, có từ 40 - 50% có biến chứng ở thời điểm chẩn<br /> đoán. Trong đó, số người dưới 30 tuổi mắc bệnh ngày càng gia tăng, thậm chí có những trẻ dưới 10 tuổi cũng<br /> mắc bệnh và như vậy là tỉ lệ mắc tiền ĐTĐ còn cao hơn nữa.. Do đó, việc tầm soát tiền ĐTĐ mang lại một ích<br /> lợi quan trọng trong bối cảnh chưa có nhiều nghiên cứu về vấn đề này. Nghiệm pháp dung nạp glucose đường<br /> uống là một trong ba cách giúp chẩn đoán ĐTĐ và là cách để phát hiện tiền ĐTĐ. Tuy nhiên, thời gian 2 giờ cần<br /> cho việc thực hiện nghiệm pháp là khá lâu và là một trong những rào cản đối với việc ứng dụng nghiệm pháp này<br /> trong thực tế nên cần thiết phải đánh giá khả năng cải tiến.<br /> Mục tiêu: Xác định tần suất rối loạn dung nạp glucose và khả năng rút ngắn thời gian thực hiện nghiệm<br /> pháp dung nạp glucose.<br /> Đối tượng - phương pháp nghiên cứu: nghiên cứu cắt ngang trên 98 học viên đến thực tập tại Bộ môn<br /> sinh lý học – Đại học Y Dược thành phố Hồ Chí Minh.<br /> Kết quả: Tần suất rối loạn dung nạp glucose (tiền đái tháo đường) là 26,5%. Tần suất rối loạn dung nạp<br /> glucose có liên quan với tiền căn gia đình mắc tiền đái tháo đường hoặc đái tháo đường. (RR= 2,69), với việc chơi<br /> thể thao (RR= 3,23); Ghi nhận tần suất này có gia tăng theo tuổi. Có khả năng rút ngắn thời gian thực hiện<br /> nghiệm pháp dung nạp glucose dành cho các đối tượng có kết quả bình thường tại thời điểm 90 phút và tỉ lệ<br /> trường hợp có thể được rút ngắn là 49%.<br /> Từ khóa: nghiệm pháp dung nạp glucose, đường huyết lúc đói, tiền đái tháo đường, rối loạn dung nạp<br /> glucose.<br /> <br /> ABSTRACT<br /> PREVALENCE OF PRE-DIABETES BY ORAL GLUCOSE TOLERANCE TEST AND THE<br /> PROBABILITY OF SHORTERNING TEST TIME<br /> Tran Ngoc Thanh, Nguyen Thi Le * Y hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 15 – No. 3 – 2011: 176 - 182<br /> Background: Vietnam is one of the most increasing prevalence of diabetes mellitus countries. According to<br /> HCMC Center for Nutrition, approximately 40-50% diabetes patients have had complications at diagnosis. The<br /> number of under 30 year old patients is increasing with pre-diabetes. Therefore, screening and defining the<br /> * Bộ moân Sinh Lí Học, Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch, ** Bộ moân Sinh Lí Học, Đại Học Y Dược TP.HCM.<br /> Tác giả liên lạc: TS. Nguyễn Thị Lệ<br /> ĐT: 0903311507.<br /> Email: bs.nguyenthile@gmail.com<br /> <br /> 178<br /> <br />