Bài thuyết trình: Kháng thể tái tổ hợp, phương thức sản xuất và ứng dụng

Chia sẻ: _ _ | Ngày: | Loại File: PPTX | Số trang:28

Thêm vào BST

Báo xấu

19
lượt xem 5
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Bài thuyết trình "Kháng thể tái tổ hợp, phương thức sản xuất và ứng dụng" trình bày các nội dung chính sau đây: Khái niệm kháng thể tái tổ hợp; Đặc điểm kháng thể tái tổ hợp; Cấu trúc kháng thể tái tổ hợp; Sản xuất kháng thể tái tổ hợp; Kỹ thuật tạo kháng thể tái tổ hợp trong vi khuẩn Ecoli. Mời các bạn cùng tham khảo nội dung bài giảng!

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Bài thuyết trình: Kháng thể tái tổ hợp, phương thức sản xuất và ứng dụng

KHÁNG THỂ TÁI TỔ HỢP, PHƯƠNG THỨC SẢN XUẤT VÀ ỨNG DỤNG GV hướng dẫn: PGS.TS Trương Quốc Phong
THÀNH VIÊN Trần Thị Thảo Anh 20190306 Lê Hoàng Hưng 20190340 Nguyễn Xuân Lương 20190351 Phạm Thị Minh Phương 20190373 Nguyễn Ngọc Tân 20190380 Trần Minh Thao 20190382 Trương Phúc Thịnh 20190386
01 02 GIỚI THIỆU CHUNG ƯU ĐIỂM 03 04 PHƯƠNG THỨC SẢN ỨNG DỤNG XUẤT
01 GIỚI THIỆU CHUNG
1. KHÁI NIỆM. Kháng thể tái tổ hợp (Ricombinant Antibodies) là loại kháng thể được tạo ra trong phòng thí nghiệm, sử dụng công nghệ ADN tái tổ hợp, tách biệt hoàn toàn với sự kiểm soát của hệ miễn dịch.
2. ĐẶC ĐIỂM. Các kháng thể tái tổ hợp có thể có các định dạng khác nhau, bao gồm: các globulin miễn dịch có chiều dài đầy đủ (Ig), các đoạn kháng thể đơn hóa trị như biến đoạn chuỗi đơn (scFv) và liên kết kháng nguyên đoạn (Fab), và các định dạng đa phân tử như các thể tiểu đường (dimeric scFv) hoặc triabodies (scFvs trimeric).
3. CẤU TRÚC KHÁNG THỂ. Hai chuỗi nặng giống nhau ● Vùng bám bổ thể Hai chuỗi nhẹ giống nhau ● Khi được cắt bởi 2 mảnh Papain sẽ tạo ra ra 2 mảnh: mảnh bám kháng Mỗi chuỗi có 1 vùng biến đổi và nguyên (Fab) và mảnh không biến đổi 1 vùng không biến đổi ● Cầu disulfide Vùng siêu biến ● Carbonhydrate Vùng bản lề
02 ƯU ĐIỂM
01 Cần ít lượng kháng nguyên tinh sạch để sản xuất hơn so với mAbs. Hạn chế khả năng đặc hiệu của kháng thể đơn 02 dòng. Có thể được tổng hợp dựa vào bất kỳ kháng 03 nguyên nào, bao gồm: kháng nguyên người và có độ bảo tồn cao, các tác nhân không gây đáp ứng miễn dịch, và kể cả những phân tử độc tố. Các thông số trong liên kết sinh học có thể được 04 lựa chọn cho các điều kiện liên kết kháng thể kháng nguyên mong muốn.
05 Nồng độ phối tử kháng nguyên và sự lắp ráp oligomeric có thể được kiểm soát dễ dàng. Những tiến bộ trong việc tự động hóa quy trình sinh 06 học tạo kháng thể tái tổ hợp đã làm giảm đáng kể công sức, thời gian và chi phí cần thiết. Nhờ thư viện kháng thể tái tổ hợp các chất kết dính 07 từ quá trình tạo dòng sinh học có thể được đặc trưng dễ dàng thông qua giải trình tự DNA.
Vật chủ mà hầu hết các phương pháp kháng thể tái 08 tổ hợp đã được phát triển là vi khuẩn Escherichia coli. Sự phát triển của vi khuẩn nhanh chóng và không tốn kém.
PHƯƠNG THỨC SẢN 03 XUẤT
1. SẢN XUẤT KHÁNG THỂ TÁI TỔ HỢP. • Các kháng thể tái tổ hợp được tạo ra thông qua các phương pháp kỹ thuật di truyền/tái tổ hợp khác nhau, được gọi là công nghệ hiển thị. Hiển thị nấm men Hiển thị nấm Hiển thị tế bào phage đông vật có vú
• Các bước sản xuất kháng thể tái tổ hợp: o Bước 1: Tạo ra một thư viện kháng thể chứa một số lượng lớn các phage.
o Bước 2: Kháng nguyên quan tâm được cố định trên bề mặt rắn và thư viện kháng thể được áp dụng trên đó.
o Bước 3: Các dòng vô tính đích cụ thể được khuếch đại và sàng lọc.
2. KỸ THUẬT TẠO KHÁNG THỂ TÁI TỔ HỢP TRONG VI KHUẨN ECOLI. o Tạo Protein dung hợp: Protein dung hợp (protein lai) được mã hóa bởi một gen lai do sự dung hợp in vitro hai đoạn gen khác nhau. Vì vậy, protein dung hợp sẽ mang trình tự amino acid của hai protein khác biệt. Sự dung hợp gen được thực hiện bằng Protein dung hợp. Bao gồm gen được tạo dòng cách gắn phần mã hóa của gen được tạo (gen A) và một gen khác của vi khuẩn (gen B), do đó protein dung hợp có chứa một phần protein của dòng ở gần đầu cuối 3’ của gen vi khuẩn vi khuẩn. SD: đoạn Shine-Dalgarno. (ví dụ: gen lacZ).
o Các hệ thống vector biểu hiện các gen dung hợp với gen lacZ. 01 02 Một số hệ thống vector được Một hệ thống vector tương tự khác phát triển để biểu hiện các gen cũng được phát triển để sản xuất dung hợp với gen lacZ các protein dung hợp
o Xây dựng plasmid biểu hiện và phát hiện các protein dung hợp. Gắn plasmid vector (pUR hoặc pEX) thích hợp với đoạn DNA ngoại lai để tạo ra một sự dung hợp trong khung đọc. Biến nạp các vector này vào E.coli (chủng K12 71/18 hoặc JM 103 cho các vector pUR, chủng M5219 cho các vector pEX).
o Tách chiết các protein dung hợp để sản xuất kháng thể. Protein dung hợp có thể được tách chiết theo một số cách: dùng dịch chiết urea, sắc ký ái lực aminophenyl thiogalactoside, điện di SDS polyacrylamide gel hoặc phối hợp giữa các cách này. Nhuộm gel và phát hiện băng protein mới, sau đó cắt băng này ra khỏi gel, đông khô khoảng 2 ngày rồi nghiền thành bột mịn. Bột này sẽ được dùng tiêm vào thỏ để sản xuất kháng thể.