DNA/RNA APTAMER: Tổng quan về phương pháp sàng lọc, hiện trạng và hạn chế ứng dụng trong y học

Chia sẻ: _ _ | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:9

Thêm vào BST

Báo xấu

28
lượt xem 2
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Bài viết giới thiệu tổng quan về aptamer, nguyên tắc cơ bản trong phương pháp chọn lọc aptamer, tình hình hiện tại trong việc sử dụng aptamer, những vẫn đề còn tồn tại trong quá trình phát triển aptamer để phát triển thuốc trong liệu pháp hướng đích và gợi ý hướng nghiên cứu mới trong lĩnh vực này.

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: DNA/RNA APTAMER: Tổng quan về phương pháp sàng lọc, hiện trạng và hạn chế ứng dụng trong y học

DNA/RNA aptamer: T Research Scientist, Institute of Fluid Mechanics Busan, Friedrich-Alexander-University of Erlangen-Nürnberg (LSTME) TS. 20- Institute of Fluid Mechanics là Systematic Evolution of Ligands by EXponential enrichment Busan, Friedrich-Alexander-University of Erlangen-Nürnberg (LSTME) (SELEX) [1][2 Email: tran.thoa@lstme.org -Alexander- Universitat Erlangen- - Junior Re và RNA ap nhóm : 1. [6][7][8] 1][2][7] 15-1017 4][5][6][7] loops, stems, hairpins, pseudoknots, bulges, triplexes, or quadruplexes 4][8][9] https://doi.org/10.15625/vap.2021.0030 208
qua SELEX d a trên c u trúc c a y u t c d ng c a aptamer và các k thu t hi n có c a s phòng thí nghi m. Nói cách khác, c n nay không [4][6][8] n nào c a SELEX cho các nhân t nguyên t c, nh ng yêu c u c n thi t cho quy trình SELEX bao g m s ch n l c d a 7][10]. trên m c c nh tranh ái l c, s nhân b n b t RT_PCR, PCR nh enzym, quy trình này g s b c ki u l i quá trình ch n l c t nhiên theo h c thuy t Darwin [6][15][16]. M t quy trình SELEX ng b u v i m n các [1][2][3][10] (A) aptamer 8][9]. nhau [8][9][10]. Cá 4][7][10] (B) 2. aptamer c phát tri g n cho nhi c hi u khác nhau, bao g m các ion, phân t nh i phân t và toàn b t u h t aptamers c thi t k liên k t v i protein [1][2][3][11][12][13][14]. Aptamers cho ho t tính và ái l c liên k v i các kháng th nh, tính linh ho t và t ng h p hóa h cd c s d ng n cho các ch d u sinh h c (biomarker) cho b nh cho trong m u tr , bao g m protein, th th (qui trình ch n l hình 1A), t bào kh i u di chuy n trong h tu n hoàn và toàn b t bào (qui trình ch n l Hình 1. n trong ch n l c aptamer 1B) [15]. cho protein (A) và t ng v t (B) Quy trình thi t k u ki n ch n l c aptamer thông 209
oligonucleotide DNA có trình t ng c t ng nhóm nhà khoa h u trúc h p hóa h c ch a kho ng 1012 n 1017 trình t khác nucleotides nhân t t ng h n DNA ban c t ng h p, u [8][9]. Có m t s nhóm khá n i ti ng trong m ng quá trình sàng l c trình t g n v này là nhóm c a GS. Hirao (vi n RIKEN, Nh t B n)8 c tu n t : nhân t i các trình t , lo i b và c i h c Cambrige, Anh nh ng trình t n Qu c) [9]. Nhóm Hirao t p trung vào chèn các nh ng trình t g n k t v i nhân t i có tính k c vào trình t , (Hình 1). -SELEX [8], còn nhóm Holliger dùng -SELEX, trình t ch a toàn b n v i trình t c dùng nhi t t o i vi t bài này c u trúc b c hai s v i nhân t c g n c nh th y vi c l a ch n không t nhiên v n còn ho c t u ki n nghiêm ng t. S g n k t nhi u thách th c, bao g m th i gian và chi phí, quy gi a trình t DNA/RNA ng u nhiên v i nhân t trình ph c t p và khó ki ng c c tách ra kh i nh ng trình t vi c bi t, v i vi i thì oligonucleotide không liên k t ho c liên k t y u thông vi c t ng h p và gi i trình t vô cùng k c r a. Các oligonucleotide liên k t v i m c h t cao và t c ph c h c làm giàu b ng PCR (trong d ng cho ngu n c un c ki m soát DNA SELEX) [16][17] ho c RT-PCR (trong RNA t t. SELEX) [18][19][20][21]. T DNA s sau khi khu i, c c phân l p thành m 3. Tình hình c a vi c ng d ng aptamer trong vi n DNA s ng u tr b nh hi n nay nhi n hình là dùng h t 3.1. Trong ng d ng ti n lâm sàng t n n i ch a hu nh quang và phân tách b ng i b t k s phát tri n thu c m i nào, thu c d a t os ][17], còn ch n l c trên aptamer yêu c u các th nghi m ti n lâm sàng RNA thì t s n ph c ch p thu chuy n sang th nghi m lâm sàng t ng h nm c i. Th nghi m ti n lâm sàng này c n ti n t o l p l i tr n kh u cho chu trình hành trên t ng v i ho c s d ng mô ch n l c m i. S d ng nhi u chu k ch n l c và c thông tin v ng h c, khu i, s ng trình t u s b gi m và ch cl ch an toàn c a aptamers. Chi c bao g m các trình t có ái l c liên k t cao v i nhân t chính c a h u h u tr d a trên m c tiêu. SELEX b sung, ch ng h - aptamer là ho t ch c SELEX hay negative-SELEX, có th ch c gi a các t bào, protein-protein c các trình t liên ho c th th -ph i t k c hi u v aptamers sau s c nghiên c u ti tìm hi u v an toàn, n c n dùng, kh n Các quá trình sàng l c ti n hành qua hóa, phân ph i và ho ng v t 6-20 chu k g nv iv iy ut (B ng 1) c tách riêng qua quá trình nhân b n b ng cloning và gi i trình t [1][2][3][10]. G 3.2. Hi n tr ng c a aptamer trong ng d ng lâm i ta s d i trình t th h m i sàng nâng cao hi u su t ch n l c [11]. Các ng viên i toàn b t bào c ch n này s m tra v nh y, và các th th c a t nh m m c tiêu các tác c hi ch n ra trình t t t nh t [5][6][7]. Các nhân phân ph i m c tiêu, các ph i t u tr nh c hi ng 2004, lo i thu c FDA ch p dùng nh gi thu ng t h u ích trong ch u tr . th c bi i hu nh quang Tuy nhiên, b t ch c tính tiên ti n c a lo i c và sau khi v i y u t a m i trình t . kháng th hóa h c này, v n còn m t kho ng cách l n Trình t t t nh c ch n ra l ki m gi c ch l c và các aptamer dùng tra l n n a v nh c hi g nv iy ut u tr . Theo Dunn M. R et al trong m t bài t ng , ho t tính c a nó v i y u t c quan g y trên t p chí Nature Review thì trong s ng d ng [6][7]. 1003 thí nghi m in vitro, 584 là aptamer cho các protein ch d u b nh và 141 là aptamer cho t bào c nh, b nh. Tuy nhiên, trong s i b n v ng và ho c ch n v c th nghi c li t kê l c c i bi n c kháng l i nuclease phân trong (B ng 2). gi ng [4][6][10]. M t s 210
B ng 1. c hi n ki m tra ti n lâm sàng Tên c a Công th c Y ut ng v t th nghi m Reference aptamer RA-36 DNA Thrombin Chu t, chu t, th , chu t [22] lang và kh ARC126 Th và chu t chuy n gen RNA and modified RNA PDGF-B [23] [24] ARC127 rho / PDGF-B RNA oligonucleotide in L- AX102 CXCL12 Chu t, chu t c ng [25][26] configuration Transferrin receptor and TEPP-DOX DNA (EpCAM) on metastatic Chu t [27][28] cancer cells Chu t, chu t, th , chu t Pegaptanib DNA VEGF [29] lang và kh Trimeric apt DNA HER2 Chu t cái BALB/c [25][30] PNDA-3 DNA Periostin Chu t 4T1 [22] Unmodified DNA TTA1 -O-Me DNA Tenascin- C Chu t cái [31][33] GBI-10 LNA- modified -O-Me OPN-R3 Osteopontin Chu t cái [26][34] DNA Chu t và chu không [31][65] AS1411 DNA Nucleolin lông [66] ESTA Thiolation DNA E-selectin Chu t [67][68] Olaptesed pegol SDF-1 Chu t và chu t c ng [39][40] (NOX-A12) ARC81 Unmodified ARC117 Th [41] ARC119 NOX 1255 DNA GnRH Chu t c ng [42][43] NOX1257 B ng 2. nghi m lâm sàng, c p nh n 8/2020 t trang https://clinicaltrials.gov Tên Tài li u Công th c và Mã s và hi n tr ng th aptamer/y u Trình t B u tr tham bi i nghi m lâm sàng t kh o completed) completed) -nt RNA - m vàng do completed) Macugen 5'- fluoropyrimidi lão hóa(AMD) (pegaptanib CGGAAUCAGU nes B nh ti ng phù terminated) [27][44] sodium) / AGAUGCUUAU -O-methyl m VEGF AGAUCCG -3' purines B nh ti completed) -inverted dT sinh b nh võng m c completed). Approved on Dec 2004 in the United States and the European Union for AMD treatment 211
41 nt DNA 5'- aptamer, Sgc8 ATCTAACTGCT was linked to a Ga-Sgc8/ NCT03385148 phage I, Ch i GCGCCGCCGGG bi-functional [45] PTK7 completed tr c tràng AAAATACTGTA group NOTA CGGTTAGA-3' for 68Ga chelation. -nt RNA - completed) 5'- AMD fluoropyrimidi ARC1905 CGCCGCGGUCU Idiopathic polypoidal nes completed) Ophthotech / CAGGCGCUGA choroidal vasculopathy -O-methyl [20][46] C5 GUCUGAGUUU Geographic atrophy purines completed) CCUGCG -3' -inverted dT unknown) NCT00056199 (phage I, completed) -nt RNA NCT00150202 (phage II, - completed) 5'- fluoropyrimidi NCT00239928 (phage III, Hippel-Lindau Disease EYE001/ CGGAAUCAGU nes completed) Macular Degeneration [44] VEGF AGAUGCUUAU -O-methyl NCT00021736 (phage II/III, Diabetic Macular AGAUCCG-3' purines completed) Edema -inverted dT NCT00321997 (phage II/III, completed) NCT00040313 (phage II, completed) completed) completed) -nt RNA terminated) E-10030 -O-methyl Ophthotech/ Not available AMD purines completed) PDGF -inverted dT terminated) NCT01940900 (phase III, terminated) NCT01944839) RB006 (drug): -nt RNA completed) aptamer REG1 H i ch ng m ch vành -ribo purine anticoagulatio completed) c p tính PEG-L- or n system t ng thông tim GUGGACUAUA - (RB006 plus completed) (d ch) [47] CCGCGUAAUG fluoropyrimidi RB007) / B ng m ch vành CUGCCUCCAC- ne RB007 Coagulation completed) Can thi p m ch vành idT (antidote): factor IXa qua da -nt terminated because of severe -O-methyl anaphylactic reactions ARC1779/ 5' PEG- von Willebrand disease -nt DNA A1 domain of GCGUGCAGUG Thrombotic -inverted dT completed) von CCUUCGGCCGT thrombocytopenic [48] -O-methyl Willebrand GCGGTGCCUCC purpura von Willebrand terminated) factor GUCACGC-3 disease type 2b 212
Acute myocardial completed) infarction Percutaneous coronary intervention withdrawn) Thrombosis terminated) Heart disease (for 5'- example, used during NU172 CGCCTAGGTTG -nt DNA cardiopulmonary ARCA/ [49] GGTAGGGTGGT unknown, not verified recently) bypass to maintain a Thrombin GGCG-3 steady-state of anticoagulation) 5'- PEG- hexylamine- mGmGmAmAmU -nt RNA ARC19499 mAmUmAdCmU -O-methyl (BAX499)/ mUmGmGdCmUd purine Haemophilia [50] terminated) TFPI CmGmUmUmAm -inverted dT GmGmUmGdCm GmUmAmUmAm UmAidT-3 completed) Acute myeloid 5- AS1411 -nt DNA leukemia GGTGGTGGTGG unknown) (AGRO001) / -rich DNA Metastatic renal cell [36] TTGTGGTGGTG Nucleolin carcinoma GTGG -3 completed) Advanced solid tumor terminated) NCT00976378 (phase I, Multiple myeloma and completed) non-Hodgkin 5'- -nt RNA NCT01194934 (phase I, lymphoma GCGUGGUGUG (Spiegelmer) completed) Chronic lymphocytic NOX-A12 / AUCUAGAUGU -ribonucleic NCT01521533 (phase II, leukemia [26] CXCL12 AUUGGCUGAU acid completed) Autologous stem cell CCUAGUCAGG NCT01486797 (phase II, transplantation UACGC-3' ongoing, Hematopoietic stem cell transplantation (phage I, completed) Chronic inflammatory diseases 5'- -nt RNA completed) Type 2 diabetes GCACGUCCCUC (Spiegelmer) NOX-E36/ mellitus ACCGGUGCAA -ribonucleic [51] CCL2 completed) Systemic lupus GUGAAGCCGU acid erythematosus GGCUCUGCG -3' completed) Albuminuria NCT01547897 (phase II, Renal impairment completed) completed) -nt RNA Anemia NOX-H94/ GGGAUUAAGU (Spiegelmer) End-stage renal disease Hepcidin completed) AAAUGAGGAG -ribonucleic Anemia of chronic [52] peptide NCT01691040 (phase II, UUGGAGGAAG acid diseases hormone completed) Inflammation completed) 213
4. K t lu n Environmental Science & Health 10, 9-21 Aptamer có ch t kháng th (2019). c hi u và ái l c cao v i [5] Zhou, J. & Rossi, J. Aptamers as targeted ch d u b nh h c, do v y có ti u therapeutics: current potential and challenges. tr b chu i Nat Rev Drug Discov 16, 181-202 (2017). DNA/RNA khác mang nhi u ti u tr [6] Stoltenburg, R., Reinemann, C. & Strehlitz, B. t. Do v n nay, ch có SELEX--a (r)evolutionary method to generate m tr b nh và 13 aptamer high-affinity nucleic acid ligands. Biomol Eng n mu n trong th nghi m lâm sàng. 24, 381-403 (2007). Theo ph n l n các báo cáo thì lí do chính là do thi u [7] Dunn, M.R., Jimenez, R.M. & Chaput, J.C. , ho t tính ho ng và các thông Analysis of aptamer discovery and technology. c lý c a Nature Reviews Chemistry 1, 0076 (2017). i vi n l c aptamer [8] Taylor, A.I. & Holliger, P. Directed evolution of ngoài nh ng h n ch và bias tr ng ch n l c trình t artificial enzymes (XNAzymes) from diverse u vào, thì hi n hành trên t bào nuôi repertoires of synthetic genetic polymers. Nat c ng phòng thí nghi m ho Protoc 10, 1625-42 (2015). protein tái t h t là m t v l n. Do [9] Kimoto, M., Yamashige, R., Matsunaga, K., v y, s thi u trúc gi y u t Yokoyama, S. & Hirao, I. Generation of high- ch n l c v i ch d u sinh h i là m t affinity DNA aptamers using an expanded trong nh ng nguyên nhân khi n hi u qu vi u tr genetic alphabet. Nat Biotechnol 31, 453-7 b ch m tr . M ng kh c ph c c a v này có (2013). th là ch n vi c sàng l c trên các organ-on- a-chip k t [10] Zhang, Y., Lai, B.S. & Juhas, M. Recent h pv is d d t Advances in Aptamer Discovery and k u vào hi u qu ng th i m t Applications. Molecules 24(2019). aptamer t o ra c ck th phân [11] Pleiko, K. et al. Differential binding cell-SELEX tích ho t tính, ph n ng v và có nghiên c u method to identify cell-specific aptamers using th pv c ph chuy n high-throughput sequencing. Sci Rep 9, 8142 hóa thánh s n ph i. (2019). [12] Park, J.W., Tatavarty, R., Kim, D.W., Jung, H.T. L & Gu, M.B. Immobilization-free screening of c ki n th c nghiên c u, ni aptamers assisted by graphene oxide. Chem mê, l n trong nghiên Commun (Camb) 48, 2071-3 (2012). c u hi i th y, [13] Shin, S.R. et al. Aptamer-Based Microfluidic ng d n c Electrochemical Biosensor for Monitoring Cell- Takanori Uzawa, phòng thí nghi t Nano y Secreted Trace Cardiac Biomarkers. Anal Chem h c, vi n RIKEN, Wakoshi, Saitama, Nh t B n. Th i 88, 10019-10027 (2016). gian làm vi c t ng th và quý [14] Wang, D.L. et al. Selection of DNA aptamers giá vô cùng v ng against epidermal growth factor receptor with nghiên c u c high affinity and specificity. Biochem Biophys c a mình, Phan Minh H ng hành cùng m Res Commun 453, 681-5 (2014). trong su t ch ng tôi ti p c n v ng nghiên [15] Hung, L.Y., Wang, C.H., Hsu, K.F., Chou, C.Y. c nhi u l n trên phòng thí nghi tôi & Lee, G.B. An on-chip Cell-SELEX process for v n có th v a làm m v a làm m i nghiên c u automatic selection of high-affinity aptamers khoa h c. specific to different histologically classified ovarian cancer cells. Lab Chip 14, 4017-28 (2014). [1] Ellington, Ellington, A.D. & Szostak, J.W. In [16] Lee, Y.J. et al. Periostin-binding DNA aptamer vitro selection of RNA molecules that bind inhibits breast cancer growth and metastasis. Mol specific ligands. Nature 346, 818-22 (1990). Ther 21, 1004-13 (2013). [2] Robertson, D.L. & Joyce, G.F. Selection in vitro [17] Mendonsa, S.D. & Bowser, M.T. In vitro of an RNA enzyme that specifically cleaves selection of high-affinity DNA ligands for human single-stranded DNA. Nature 344, 467-8 (1990). IgE using capillary electrophoresis. Anal Chem [3] Tuerk, C. & Gold, L. Systematic evolution of 76, 5387-92 (2004). ligands by exponential enrichment: RNA ligands [18] Bompiani, K.M., Monroe, D.M., Church, F.C. & to bacteriophage T4 DNA polymerase. Science Sullenger, B.A. A high affinity, antidote- 249, 505-10 (1990). controllable prothrombin and thrombin-binding [4] Kim, S.H., Thoa, T.T.T. & Gu, M.B. Aptasensors RNA aptamer inhibits thrombin generation and for environmental monitoring of contaminants in thrombin activity. J Thromb Haemost 10, 870-80 water and soil. Current Opinion in (2012). 214
[19] Kim, M.Y. & Jeong, S. In vitro selection of RNA [34] Talbot, L.J. et al. Pharmacokinetic aptamer and specific targeting of ErbB2 in breast characterization of an RNA aptamer against cancer cells. Nucleic Acid Ther 21, 173-8 (2011). osteopontin and demonstration of in vivo [20] Mi, Z. et al. RNA aptamer blockade of efficacy in reversing growth of human breast osteopontin inhibits growth and metastasis of cancer cells. Surgery 150, 224-30 (2011). MDA-MB231 breast cancer cells. Mol Ther 17, [35] Mongelard, F. & Bouvet, P. AS-1411, a 153-61 (2009). guanosine-rich oligonucleotide aptamer targeting [21] nucleolin for the potential treatment of cancer, N. High-affinity RNA ligands to basic fibroblast including acute myeloid leukemia. Curr Opin growth factor inhibit receptor binding. Proc Natl Mol Ther 12, 107-14 (2010). Acad Sci U S A 90, 11227-31 (1993). [36] Bates, P.J., Laber, D.A., Miller, D.M., Thomas, [22] Zavyalova, E. et al. The Evaluation of S.D. & Trent, J.O. Discovery and development of Pharmacodynamics and Pharmacokinetics of the G-rich oligonucleotide AS1411 as a novel Anti-thrombin DNA Aptamer RA-36. Front treatment for cancer. Exp Mol Pathol 86, 151-64 Pharmacol 8, 922 (2017). (2009). [23] Sennino, B. et al. Sequential loss of tumor vessel [37] Kang, S.A. et al. Blocking the adhesion cascade pericytes and endothelial cells after inhibition of at the premetastatic niche for prevention of breast platelet-derived growth factor B by selective cancer metastasis. Mol Ther 23, 1044-1054 aptamer AX102. Cancer Res 67, 7358-67 (2007). (2015). [24] Akiyama, H. et al. Intraocular injection of an [38] Mann, A.P. et al. Identification of thioaptamer aptamer that binds PDGF-B: a potential ligand against E-selectin: potential application treatment for proliferative retinopathies. J Cell for inflamed vasculature targeting. PLoS One Physiol 207, 407-12 (2006). 5(2010). [25] Zboralski, D., Hoehlig, K., Eulberg, D., [39] Roccaro, A.M. et al. SDF-1 inhibition targets the Frömming, A. & Vater, A. Increasing Tumor- bone marrow niche for cancer therapy. Cell Rep Infiltrating T Cells through Inhibition of 9, 118-128 (2014). CXCL12 with NOX-A12 Synergizes with PD-1 [40] Liu, S.C. et al. Blockade of SDF-1 after Blockade. Cancer Immunol Res 5, 950-956 irradiation inhibits tumor recurrences of (2017). autochthonous brain tumors in rats. Neuro Oncol [26] Hoellenriegel, J. et al. The Spiegelmer NOX- 16, 21-8 (2014). A12, a novel CXCL12 inhibitor, interferes with [41] McCauley, T.G. et al. Pharmacologic and chronic lymphocytic leukemia cell motility and pharmacokinetic assessment of anti-TGFbeta2 causes chemosensitization. Blood 123, 1032-9 aptamers in rabbit plasma and aqueous humor. (2014). Pharm Res 23, 303-11 (2006). [27] Macdonald, J. et al. Bifunctional Aptamer- [42] Wlotzka, B. et al. In vivo properties of an anti- Doxorubicin Conjugate Crosses the Blood-Brain GnRH Spiegelmer: an example of an Barrier and Selectively Delivers Its Payload to oligonucleotide-based therapeutic substance EpCAM-Positive Tumor Cells. Nucleic Acid class. Proc Natl Acad Sci U S A 99, 8898-902 Ther 30, 117-128 (2020). (2002). [28] Glassman, P.M. et al. Targeting drug delivery in [43] Leva, S. et al. GnRH binding RNA and DNA the vascular system: Focus on endothelium. Adv Spiegelmers: a novel approach toward GnRH Drug Deliv Rev (2020). antagonism. Chem Biol 9, 351-9 (2002). [29] Vinores, S.A. Pegaptanib in the treatment of wet, [44] age-related macular degeneration. Int J Inhibition of receptor binding by high-affinity Nanomedicine 1, 263-8 (2006). RNA ligands [30] Mahlknecht, G. et al. Aptamer to ErbB-2/HER2 [45] Shangguan, D., Tang, Z., Mallikaratchy, P., enhances degradation of the target and inhibits Xiao, Z. & Tan, W. Optimization and tumorigenic growth. Proc Natl Acad Sci U S A modifications of aptamers selected from live 110, 8170-5 (2013). cancer cell lines. Chembiochem 8, 603-6 (2007). [31] Hicke, B.J. et al. Tumor targeting by an aptamer. [46] Biesecker, G., Dihel, L., Enney, K. & Bendele, J Nucl Med 47, 668-78 (2006). R.A. Derivation of RNA aptamer inhibitors of [32] Daniels, D.A., Chen, H., Hicke, B.J., Swiderek, human complement C5. Immunopharmacology K.M. & Gold, L. A tenascin-C aptamer identified 42, 219-30 (1999). by tumor cell SELEX: systematic evolution of [47] Rusconi, C.P. et al. RNA aptamers as reversible ligands by exponential enrichment. Proc Natl antagonists of coagulation factor IXa. Nature Acad Sci U S A 100, 15416-21 (2003). 419, 90-4 (2002). [33] Hicke, B.J. et al. Tenascin-C aptamers are [48] Diener, J.L. et al. Inhibition of von Willebrand generated using tumor cells and purified protein. factor-mediated platelet activation and J Biol Chem 276, 48644-54 (2001). thrombosis by the anti-von Willebrand factor A1- 215
domain aptamer ARC1779. J Thromb Haemost light-regulation efficiency. Nucleic Acids Res 38, 7, 1155-62 (2009). 2111-8 (2010). [49] Buff, M.C. et al. Dependence of aptamer activity [50] Waters, E.K. et al. Aptamer ARC19499 mediates on opposed terminal extensions: improvement of a procoagulant hemostatic effect by inhibiting tissue factor pathway inhibitor. Blood 117, therapeutic applications. Nucleic Acids Symp Ser 5514-22 (2011). (Oxf), 61-2 (2008). [51] Maasch, C., Buchner, K., Eulberg, D., Vonhoff, [52] Schwoebel, F. et al. The effects of the anti- S. & Klussmann, S. Physicochemical stability of hepcidin Spiegelmer NOX-H94 on NOX-E36, a 40mer L-RNA (Spiegelmer) for inflammation-induced anemia in cynomolgus monkeys. Blood 121, 2311-5 (2013). 216