Khảo sát hoạt tính chống oxy hóa và định lượng polyphenol toàn phần trong lá trầu không (Piper betle, Piperaceae)

JSLHU<br /> JSLHU<br /> OF LAC HONG<br /> JOURNAL OF SCIENCE<br /> UNIVERSITY<br /> https://tapchikhdt.lhu.edu.vn<br /> www.jslhu.edu.vn<br /> OF LAC HON G UNIVERS ITY T p chí Khoa h c L c H ng<br /> p chí Khoa h c c<br /> <br /> <br /> KH O SÁT HO T TÍNH CH NG OXY HÓA VÀ NH L NG<br /> POLYPHENOL TOÀN PH N TRONG LÁ TR U KHÔNG (PIPER<br /> BETLE, PIPERACEAE)<br /> Study on antioxidant activity and quantification of total polyphenols from<br /> Piper betle leaves<br /> Nguy n Th T Qu nh1,a, Nguy n Th H ng H nh2,b,<br /> Nguy n Th Nh Qu nh3,c, Hoàng c Thu n4,d,Lê Th Thu H ng5,e<br /> 1,2,3,4,5<br /> Khoa D c, Tr ng i h c L c H ng, Biên Hòa, ng Nai, Vi t Nam<br /> c<br /> ds.nhuquynhnguyen@gmail.com, dhoangthuand08@gmail.com, ehongle5792@gmail.com<br /> <br /> TÓM T T. Tr u không là m t d c li u c s d ng ph bi n trong t p t c nhai tr u c a Vi t Nam và c s d ng sát<br /> khu n, làm lành v t th ng. Nh m làm sáng t thành ph n hóa h c và tác d ng sinh h c c a Tr u không, tài ti n hành xác<br /> nh hàm l ng polyphenol toàn ph n và ho t tính ch ng oxy hóa c a lá Tr u không. K t qu kh o sát thành ph n hóa h c<br /> cho th y trong d c li u lá Tr u không ch a nhi u h p ch t polyphenol. Xác nh hàm l ng polyphenol toàn ph n b ng<br /> ph ng pháp Folin-Ciocalteu. Quy trình nh l ng polyphenol toàn ph n c th m nh v i l p l i và úng t (RSD<br /> < 5%); t l ph c h i n m trong gi i h n cho phép (95% - 105%). K t qu cho th y hàm l ng polyphenol toàn ph n trong<br /> Tr u không c xác nh là 2,52% theo chu n gallic. Ho t tính ch ng oxy hóa c xác nh theo phu ng pháp ánh b t<br /> g c t do v i thu c th DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl). K t qu cho th y d ch chi t toàn ph n lá Tr u không cho<br /> ho t tính ch ng oxy hóa v i IC50 là 20,25 µg/ml, cao ethyl acetat cho ho t tính m nh nh t trong các cao v i IC50 là 8,6 µg/ml.<br /> T KHÓA: Folin-Ciocalteu, ho t tính ch ng oxy hóa, Tr u không<br /> ABSTRACT. Piper betle is popular plant in the custom of chewing betel in Vietnam and used for antiseptic, wound healing.<br /> In order to research the biological affects, this scientific report presented the study on the total polyphenol content and<br /> antioxidant activity of Piper betle leaves by The Folin-Ciocalteu method (The results showed that the Piper betle leaves are<br /> rich in polyphenol compounds with 2,52% gallic acid equivalents; Validation results showed that the quantification method<br /> has good repeatability and accuracy with (RSD < 5%), recovery ratio from (95-105%) which are within acceptable limit).<br /> The other study on the antioxidant activity was realized by 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl -DPPH- radical scavenging method<br /> (The results indicated that total Piper betle extract was efficient with 20,25 µg/ml of IC50, ethyl acetat's extract was the most<br /> efficient with 8,6 µg/ml of IC50.<br /> KEYWORDS: Folin-Ciocalteu, antioxidant, Piper betle<br /> 1. GI I THI U 2. TH C NGHI M<br /> Xã h i càng phát tri n thì v n s c kh e c a con ng i 2.1 it ng nghiên c u<br /> ngày càng c quan tâm. Nh ng v n n t môi tr ng<br /> Nguyên li u:<br /> c ng nh m t trái c a s phát tri n các ngành công nghi p<br /> Lá Tr u không c thu hái Biên Hòa, ng Nai vào<br /> mang n cho chúng ta nhi u m i nguy h i v s c kh e: môi<br /> tháng 01/2019. M u cây c nh danh v i tên khoa h c là<br /> tr ng b ô nhi m nghiêm tr ng, con ng i luôn c ng th ng<br /> Piper betle, Piperaceae và c l u t i b môn D c li u –<br /> trong công vi c và h c t p, vi c n u ng tr nên công nghi p<br /> i h c L c H ng.<br /> hóa là nh ng nguyên nhân khi n cho s gia t ng hình thành<br /> Hóa ch t và dung môi:<br /> g c t do trong c th con ng i. Theo các nghiên c u, g c<br /> Hóa ch t và thu c th dùng trong phân tích s b thành<br /> t do là nguyên nhân gây ra các b nh nghiêm tr ng, áng k<br /> ph n hóa h c: Dragengroff, Valse-Mayer, Hager, NaOH,<br /> nh t là: b nh v a x ng m ch, ung th , Alzheimer và lão<br /> FeCl3, H2SO4,…<br /> hóa nhanh [1-5]. Chính vì v y, vi c lo i b g c t do trong c<br /> Dung môi - hóa ch t s d ng cho th nghi m ho t tính<br /> th là gi i pháp b o v s c kh e con ng i tr c nguy c<br /> ch ng oxy hóa và nh l ng polyphenol toàn ph n: n-hexan,<br /> c a b nh. Các h p ch t polyphenol phân b r ng rãi trong<br /> chloroform, ethyl acetat, methanol, DPPH t tiêu chu n<br /> th c v t, và là nh ng ch t ch ng oxy hóa m nh v i kh n ng<br /> phân tích.Thu c th Folin - Ciocalteu (Merck), natri<br /> ng n ch n, lo i các g c t do [6]. Ngoài ra, polyphenol còn<br /> carbonat do Trung Qu c s n xu t và acid gallic 98,00% do<br /> có nhi u ho t tính sinh h c khác nh : kháng histamin, kháng<br /> Trung tâm Ki m nghi m Thu c – M ph m – Th c ph m<br /> khu n, kháng virus và kháng viêm.<br /> t nh Phú Yên cung c p.<br /> Lá Tr u không là m t d c li u c s d ng nhi u trong<br /> Trang thi t b :<br /> dân gian làm lành v t th ng, ch ng d ng v i thành<br /> Máy quang ph UV-Vis Shimadzu 2550 v i ph n m m<br /> ph n hóa h c có nhi u polyphenol [7]. Hi n nay, các nghiên<br /> UVProbe V. 1,11 (Japan).<br /> c u trong n c v cây Tr u không còn h n ch . Vì th , tài<br /> ti n hành nghiên c u xác nh polyphenol toàn ph n trong lá Received: May, 31, 2019<br /> Tr u không và ho t tính ch ng oxy hóa là c n thi t, nh m Accepted: July, 25th, 2019<br /> góp ph n làm sáng t ho t tính sinh h c c a Tr u không. *Corresponding Author<br /> Email: hongle5792@gmail.com<br /> <br /> <br /> T p chí Khoa h c L c H ng 99<br /> Kh o sát ho t tính ch ng oxy hóa và nh l ng polyphenol toàn ph n trong lá tr u không (piper betle, piperaceae)<br /> 2.2 Ph ng pháp nghiên c u At m C .C% Dt<br /> P% = . . .100<br /> Th nghi m kh o sát ho t tính ch ng oxy hóa th c hi n Ac m t .(100 - H)% D c<br /> v i thu c th Folin Ciocalteu và nh l ng polyphenol<br /> toàn ph n th c hi n v i thu c th DPPH. Trong ó: P%: hàm l ng polyphenol toàn ph n, c<br /> bi u di n b ng % kh i l ng t ng ng chu n acid gallic<br /> 2.2.1 Chi t xu t d c li u (g)/ kh i l ng m u th khô (g) (GAE/g DL); At: h p thu<br /> Chu n b cao s d ng cho kh o sát ho t tính ch ng oxy c a m u th ; Ac: h p thu c a m u chu n; mc: kh i l ng<br /> hóa: cân 50 g b t lá Tr u không ( ã tr m) cho vào erlen m u chu n (g); mt: kh i l ng m u th (g); C%: tinh khi t<br /> nút mài, chi t v i 500 ml MeOH 70%, siêu âm trong 30 phút cu chu n acid gallic (%); Dt: pha loãng c a m u th ; Dc:<br /> t i 50 oC, th c hi n l p l i 2 l n. D ch chi t sau khi l c c pha loãng c a m u chu n.<br /> cô dung môi d i áp su t th p thu c cao toàn ph n (TP). 3. K T QU VÀ TH O LU N<br /> Cao này c gi l i 1 ph n th c hi n các thí nghi m ti p<br /> theo. L ng cao TP còn l i c phân tán v i n c sau ó 3.1 Kh o sát s b thành ph n hóa th c v t<br /> l c phân b l ng-l ng b ng các dung môi có phân c c K t qu s b thành ph n hóa h c theo ph ng pháp<br /> t ng d n theo trình t n-hexan (HEX), chloroform (CF), Ciuley[9] cho th y lá Tr u không có nhi u h p ch t<br /> ethyl acetat (EA) (3 l n x 1 lít). L ng d ch chi t còn là cao polyphenol: flavonoid, tanin, triterpenoid. Ngoài ra, còn có<br /> n c (N). Cô quay áp su t th p thu c các cao phân o n các thành ph n khác nh acid h u c , tinh d u và h p ch t<br /> t ng ng. polyuronic.<br /> Chu n b cao s d ng cho nh l ng polyphenol toàn<br /> ph n: Cân 1 g b t khô lá Tr u không cho vào erlen 50 ml, 3.2 Kh o sát ho t tính ch ng oxy hóa<br /> thêm 20 ml MeOH vào, siêu âm trong 30 phút 50 0C, th c Ti n hành kh o sát ho t tính ch ng oxy hóa v i thu c th<br /> hi n 2 l n, g p d ch chi t vào bình nh m c 50 ml, thêm DPPH trên cao toàn ph n và các cao phân o n c a lá Tr u<br /> dung môi n v ch, l c u. Hút chính xác 5 ml d ch chi t không. K t qu c trình bày Hình 1.<br /> cho vào bình nh m c 100 ml, thêm dung môi n v ch, l c<br /> u. B o qu n tránh ánh sáng. Giá tr IC50 c a các cao Tr u không<br /> 2.2.2 Kh o sát s b thành ph n hóa th c v t 45 41,4<br /> <br /> Kh o sát s b thành ph n hóa th c v t c a d c li u theo 40<br /> <br /> ph ng pháp Ciuley c i ti n [9]. 35<br /> <br /> Nguyên t c: Chi t các ch t có trong d c li u thành 3 30 26,3<br /> phân o n có phân c c t ng d n l n l t v i các dung 25<br /> 20,25<br /> môi: ether ethylic, ethanol và n c. Xác nh các nhóm h p 20<br /> ch t trong t ng d ch chi t b ng các ph n ng c tr ng. 15<br /> 8,6<br /> 10<br /> 2.2.3 Xác nh ho t tính ch ng oxy hóa<br /> 5 1,07<br /> Dùng 0,5 ml dung d ch DPPH (n ng 0,5 mM trong 0<br /> methanol, pha dùng trong ngày, b o qu n 4 oC), 0,5 ml AG TP CF EA N<br /> <br /> dung d ch cao th có n ng khác nhau cho vào 2 ml<br /> methanol. H n h p c l c u và nhi t phòng trong Hình 1. Bi u so sánh giá tr IC50 các cao lá Tr u không<br /> bóng t i 30 phút. o h p thu b c sóng 517 nm. Th c K t qu cho th y d ch chi t toàn ph n lá Tr u không có<br /> hi n ng th i m u tr ng thay DPPH, m u th b ng ho t tính ch ng oxy hóa v i IC50 là 20,25 µg/ml. Trong các<br /> methanol. Thí nghi m c l p l i 3 l n. Acid gallic cs cao phân o n cao ethyl acetat có ho t tính ch ng oxy hóa<br /> d ng làm ch t i chi u[8]. m nh nh t v i giá tr IC50 là 8,6 µg/ml, tuy nhiên y u h n<br /> Kh n ng c ch DPPH c tính theo công th c sau: acid gallic 8 l n v i IC50 là 1,07 µg/ml.<br /> OD chung - OD thu<br /> %HTCO = .100 % 3.3 nh l ng polyphenol toàn ph n<br /> OD chung<br /> 3.3.1 Th m nh qui trình nh l ng<br /> Trong ó: ODch ng: h p thu c a m u i ch ng (không<br /> ch a cao chi t); ODth : h p thu c a m u. c hi u: Th c hi n quét ph trên 4 m u: m u th ,<br /> Xây d ng ng chu n y = ax + b v i ph n tr m c ch m u tr ng, m u chu n và m u th thêm chu n.<br /> DPPH các n ng khác nhau. T ó, tính giá tr IC50 c a K t qu cho th y m u th , m u chu n và m u th thêm<br /> acid gallic và các cao chi t. chu n có nh h p thu c c i t i b c sóng 765 nm. m u<br /> 2.2.4 nh l ng polyphenol toàn ph n tr ng không có b c sóng h p thu c c i 765 nm.<br /> Hàm l ng polyphenol c xác nh d a trên ph ng Nh n xét: có s liên quan tuy n tính gi a n ng và<br /> pháp Folin-Ciocalteu, o quang ph b c sóng 765 nm. h p thu c a m u chu n acid gallic (µg/ml) theo ph ng trình<br /> Ch t chu n c s d ng là acid gallic 50 µg/ml. Hàm l ng y = 0,0983x + 0,0606 v i R2 = 0,9996.<br /> polyphenol toàn ph n c tính d a trên ph ng trình ng<br /> úng: T l ph c h i n m trong gi i h n cho phép 90-<br /> chu n y = ax + b c a ch t chu n là acid gallic. 105% v i kho ng tin c y là 95%.<br /> Công th c tính l ng hàm l ng P % (kl/kl) polyphenol<br /> toàn ph n:<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> 100 T p chí Khoa h c L c H ng<br />  Nguy n Th T Qu nh, Nguy n Th H ng H nh, Nguy n Th Nh Qu nh, Hoàng c Thu n, Lê Th Thu H ng<br /> Dung d ch th : th c hi n theo m c 2.2.1.<br /> B ng 3. Ti n hành nh l ng polyphenol toàn ph n<br /> <br /> M u M u M u<br /> tr ng chu n th<br /> Dung d ch acid gallic 50<br /> 0 1 0<br /> µg/ml<br /> D ch chi t 0 0 1<br /> N cc t 1 0 0<br /> Thu c th FC 5 5 5<br /> L c u, yên nhi t phòng trong 5 phút<br /> Dung d ch Na2CO3 4 4 4<br /> L c u ng nh t h n h p. yên trong t i 60 phút<br /> nhi t phòng. o m t quang 765 nm.<br /> B ng 4. K t qu xác nh h p ch t polyphenol toàn ph n có<br /> Hình 1. nh h p thu c a m u chu n và th trong 1 g d c li u theo chu n gallic<br /> Tính tuy n tính Kh i l ng Hàm l ng<br /> M u m u th h p Polyphenol toàn ph n (%)<br /> (g) thu theo chu n gallic<br /> R 1 1,0744 0,2882 2,52<br /> 2 1,0745 0,2882 2,52<br /> 3 1,0744 0,2882 2,52<br /> Hàm l ng polyphenol toàn ph n<br /> Đ<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> 2,52%<br /> K t qu th c nghi m ã xác nh hàm l ng polyphenol<br /> toàn ph n trong lá Tr u không là 2,52% theo chu n acid<br /> N<br /> gallic. K t qu này cao h n g p 2 l n so v i th nghi m tr c<br /> Hình 3. Kh o sát tính tuy n tính c a acid gallic ó c a Tiara Putri t i Jakata (2013)[10].<br /> B ng 1. K t qu kh o sát úng 4. K T LU N<br /> M c chu n Thành ph n hóa h c lá Tr u không ch a nhi u h p ch t<br /> T l ph c h i (%) RSD (%) polyphenol, ngoài ra còn có acid h u c , tinh d u,<br /> cho vào (%)<br /> polyuronic. Hàm l ng polyphenol toàn ph n trong lá Tr u<br /> 80 94,08 2,23<br /> không c xác nh là 2,52% theo chu n gallic. D ch chi t<br /> 100 94,16 0,30 toàn ph n lá Tr u không cho ho t tính ch ng oxy hóa v i<br /> 120 97,07 0,48 IC50 là 20,25 µg/ml và cao ethyl acetat có ho t tính ch ng<br /> oxy hóa m nh nh t v i giá tr IC50 là 8,6 µg/ml.<br /> l pl i<br /> 5. L I C M N<br /> B ng 2. K t qu l p l i m u th<br /> Trân tr ng c m n Tr ng i h c L c H ng ã h tr<br /> kinh phí và t o i u ki n v c s v t ch t, cám n s h ng<br /> Kh i l ng h p thu Hàm l ng<br /> M u d n t n tình c a quý th y cô b môn D c li u và Hóa h u<br /> d c li u (g) 750 nm (%)<br /> c giúp chúng tôi hoàn thành nghiên c u này.<br /> 1 1,0691 0,2485 2,19<br /> 6. TÀI LI U THAM KH O<br /> 2 1,0693 0,2467 2,17<br /> 3 1,0701 0,2440 2,15 [1] Toshio Hayashi, Akihisa Iguchi. Chapter 21 – Free radicals<br /> as Atherosclerotic risk relation to Nitrit oxide. Biology and<br /> 4 1,0705 0,2441 2,15 Pathobiology, 2010, 673-703.<br /> 5 1,0694 0,2466 2,17 [2] Laura C.D. Pomatto, Kelvin J.A Davies. Adaptive<br /> homeostastic and the free radical theory of ageing. Free<br /> 6 1,0698 0,2445 2,15 radical Biology and Medicine, 2018, 124, 420-430<br /> [3] Kelvin J.A Davies. Free radicals and redox regulation in<br /> Ph ng pháp có l pl i t v i RSD = 0,56%