Luận văn: Nghiên cứu chiết tách, khảo sát tính chất của lectin từ hạt đậu đỏ tây (phaseolus vulgais) và đề xuất hướng ứng dụng

Chia sẻ: Nguyen Vang | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:26

Thêm vào BST

Báo xấu

112
lượt xem 21
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Đậu đỏ, là loại đậu mà người Trung Quốc ví là đậu tương tư, tin rằng nhiều bạn Việt Nam đều biết đến. Còn khoảng hai tháng nữa là đến mùa đậu đỏ, tức là đậu tương tư sẽ chín, đến lúc đó, mặt đất dưới gốc cây đậu đỏ sẽ rụng đầy những hạt đậu đỏ tươi bóng.

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Luận văn: Nghiên cứu chiết tách, khảo sát tính chất của lectin từ hạt đậu đỏ tây (phaseolus vulgais) và đề xuất hướng ứng dụng

1 B GIÁO D C VÀ ĐÀO T O Đ I H C ĐÀ N NG PHAN TH VI T HÀ NGHIÊN C U CHI T TÁCH, KH O SÁT TÍNH CH T C A LECTIN T H T Đ U Đ TÂY (PHASEOLUS VULGAIS) VÀ Đ XU T HƯ NG NG D NG Chuyên ngành: Công ngh Th c ph m và Đ u ng Mã s : 60.54.02 TÓM T T LU N VĂN TH C SĨ K THU T Đà N ng – Năm 2011
2 Công trình ñư c hoàn thành t i Đ I H C ĐÀ N NG Ngư i hư ng d n khoa h c:PG S. T S.Tr n Th Xô Ph n bi n 1: GS.TS. Đào Hùng Cư ng. Ph n bi n 2: GS.TSKH. Lê Văn Hoàng. Lu n văn s ñư c b o v t i H i ñ ng ch m Lu n văn t t nghi p th c sĩ k t h u t h p t i Đ i h c Đà N ng vào ngày 26 tháng 7 năm 2011. Có th tìm hi u lu n văn t i: - Trung tâm Thông tin -H c li u, Đ i h c Đà N ng - Trung tâm H c li u, Đ i h c Đà N ng
3 M Đ U 1. TÍNH C P THI T C A Đ TÀI Lectin là m t glycoprotein có ho t tính sinh h c, có kh năng g n k t v i t bào h ng c u, tương tác có ch n l c v i saccharide. Lectin ng d ng trong nhi u lĩnh v c khác nhau như nông nghi p, sinh hóa, vi sinh v t h c, t bào h c, mi n d ch h c, y dư c h c… Lectin có kh năng gây ngưng k t v i các t bào vi khu n, n m men ho c n m m c. Do v y, lectin t ñ u tương (SBA) và c sên (HPA) dùng ñ nh n d ng vi khu n gây b nh than Bacillus anthracis (ch ng r t khó phân bi t v i các ch ng Bacillus khác) [13]. Lectin ñư c phân b r ng rãi trong th c v t, ñ ng v t và c vi sinh v t. Lectin thu nh n t các ngu n khác nhau thì có c u trúc, tr ng lư ng phân t và thành ph n hóa h c cũng như ñ c tính sinh h c khác nhau. Xu t phát t nh ng lí do trên, ñ ñi sâu vào nghiên c u lectin h ñ u chúng tôi ch n ñ tài nghiên c u: “Nghiên c u chi t tách, kh o sát tính ch t c a lectin t h t ñ u ñ tây (phaseolus vulgaris) và ñ xu t hư ng ng d ng”, nh m góp ph n khai thác ngu n tài nguyên lectin phong phú t ngu n th c v t c a Vi t Nam. 2. M C ĐÍCH NGHIÊN C U - Chi t tách lectin t h t ñ u ñ tây, tinh s ch lectin này. - Kh o sát m t s tính ch t lý hóa c a lectin. - Đ xu t hư ng ng d ng c a nó. 3. Đ I TƯ NG VÀ PH M VI NGHIÊN C U - Nguyên li u h t ñ u ñ tây. - T bào h ng c u ngư i.
4 - N m men bia. - Nghiên c u ñư c th c hi n quy mô phòng thí nghi m. 4. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U - Phương pháp xác ñ nh ñ m, phương pháp xác ñ nh hàm lư ng protein, phương pháp xác ñ nh hàm lư ng gluxit t ng b ng phương pháp Bertran, phương pháp xác ñ nh ho t ñ lectin, phương pháp ñi n di trên gel polyacrylamide. 5. Ý NGHĨA KHOA H C C A Đ TÀI - Kh o sát m t s thành ph n hóa h c c a h t ñ u ñ tây mua t i ñ a bàn Đà N ng. Kh o sát ñư c hàm lư ng lectin có trong ñ u ñ tây. - Tăng thêm nh ng hi u bi t v c u t o và tính ch t c a lectin h ñ u. 6. Ý NGHĨA TH C TI N C A Đ TÀI - Xây d ng qui trình chi t tách và xác ñ nh nh ng tính ch t lý hóa ñ c trưng c a lectin, t ñó có th thu nh n lectin quy mô l n hơn ñ ñưa vào ng d ng th c t . - T ngu n lectin ñã ñư c nghiên c u các ñ c tính có th ñ xu t các hư ng ng d ng khác nhau. 7. C U TRÚC C A LU N VĂN Ngoài ph n m ñ u, k t lu n, tài li u tham kh o và ph l c trong lu n văn ñư c thành các chương như sau : Chương 1: T ng quan Chương 2: Nguyên li u và phương pháp nghiên c u Chương 3: K t qu và th o lu n.
5 Chương 1 T NG QUAN 1.1. LƯ C S VÀ TÌNH HÌNH NGHIÊN C U LECTIN TRÊN TH GI I VÀ VI T NAM 1.1.1. Sơ lư c l ch s lectin 1.1.2. Tình hình nghiên c u lectin trên th gi i và Vi t Nam 1.1.2.1. Tình hình nghiên c u lectin trên th gi i 1.1.2.2. Tình hình nghiên c u lectin Vi t Nam . 1.2. S PHÂN B LECTIN TRONG SINH GI I 1.2.1. S phân b lectin trong th c v t Vi t Nam tính ph bi n c a lectin l n ñ u tiên ñư c nghiên c u vào năm 1983 b i Nguy n Th Th nh và c ng s . K t qu nghiên c u 90% loài ñ u Vi t Nam có ch a lectin [11]. 1.2.2. S phân b lectin trong ñ ng v t 1.2.3. S phân b lectin trong vi sinh v t. 1.3. TÍNH CH T C A LECTIN 1.3.1. Thành ph n hóa h c, c u trúc và kh i lư ng phân t c a lectin 1.3.1.1. Thành ph n hóa h c V y lectin có b n ch t là protein, ch y u là glycoprotein. 1.3.1.2. C u trúc c a lectin Lectin là m t lo i protein nên lectin có c u trúc b c 1, 2, 3 và b c 4 như nh ng protein thông thư ng khác. Ngoài nh ng lectin có c u trúc không gian ñơn gi n, các lectin có c u trúc không gian ph c
6 t p ñ u ch a trung tâm ho t ñ ng, ñây là nơi liên k t v i carbohydrate và quy t ñ nh ho t ñ c a lectin. Theo tác gi Bourillon (1973) ngoài g c acid amin t o nên trung tâm ho t ñ ng, m t s ion kim lo i cùng tham gia ho t ñ ng c a lectin như là các ion Mg2+, Mn2+. 1.3.1.3. Kh i lư ng phân t c a lectin Lectin là m t polyme sinh h c, có kh i lư ng phân t l n, kh i lư ng phân t dao ñ ng trong ph m vi khá r ng t hàng ngàn cho ñ n hàng trăm ngàn Dalton [30]. Lectin t ngu n g c th c v t có kh i lư ng phân t bé nh t là lectin t r cây Urtica dioica (h gai Urticaceae), kho ng 8,5 kDa. Lectin t m t s th c v t cũng ñã ñư c xác ñ nh kh i lư ng phân t như lectin c a m t s loài mít chi Artocarpus có kh i lư ng phân t kho ng 50 kDa, lectin t loài t o ñ (Plumosa plumosa) có kh i lư ng phân t 150 kDa [20]. 1.3.2. Các tính ch t ñ c trưng c a lectin 1.3.2.1. Tính tan c a lectin 1.3.2.2. S tương tác c a lectin v i ñư ng Kh năng tương tác v i ñư ng là m t trong nh ng tính ch t ñi n hình c a lectin. Lectin có th liên k t v i c phân t ñư ng ñơn l n c g c ñư ng n m trên b m t t bào. Các lo i ñư ng như glucose, galactose, manose … có kh năng tương tác v i nhi u lo i lectin [20]. Kh năng tương tác ñ c hi u c a lectin - ñư ng ñã ñư c ng d ng nhi u trong các nghiên c u t bào h c, huy t h c và mi n d ch h c. 1.3.3. Đ c tính sinh h c và mi n d ch h c c a lectin 1.3.3.1. Kh năng gây ngưng k t t bào
7 1.3.3.2. Kh năng kích thích và kìm hãm phân bào 1.3.3.3. Các quy t ñ nh kháng nguyên nh n bi t 1.4. NG D NG C A LECTIN S d ng lectin ñ phân lo i nhóm máu là ng d ng s m nh t, cho ñ n nay v n còn ñư c áp d ng r ng rãi. Phương pháp xác ñ nh nhóm máu b ng lectin cho k t qu nhanh, chính xác mà không c n dùng huy t thanh m u. Lectin ñư c s d ng như m t công c ch n ñoán có hi u qu (d a vào kh năng tác d ng ñ c hi u lên m t s lo i vi sinh v t), k t h p v i các xét nghi m thông thư ng khác ñ nâng cao giá tr ch n ñoán b nh. Do b m t c a vi khu n mang các g c ñư ng, lectin có th k t h p v i các v trí liên k t ti m năng này, thêm vào ñó là tính ñ c hi u khi n chúng tr thành công c h u ích trong vi c nh n d ng vi khu n [22]. Do có kh năng liên k t v i ñư ng và các h p ch t ch a ñư ng (thành ph n c u t o quan tr ng trên b m t t bào), lectin có ti m năng ng d ng r t l n trong sinh - y h c. Vi c nghiên c u l a ch n lectin tương tác ñ c hi u v i các lo i vi khu n có th giúp ích trong vi c ñ nh danh các vi sinh v t này. 1.5. T NG QUAN V Đ U Đ TÂY Đ c tính th c v t: ñ u tây (Phaseolus vulgaris) thu c h th c v t Fabiaceae. Cây thu c lo i thân th o th p hay dây leo. Hàm lư ng protein trong ñ u tây chi m kho ng 17-23% tr ng lư ng ch t khô [24].
8 Chương 2 NGUYÊN LI U VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U 2.1. NGUYÊN LI U, HÓA CH T VÀ THI T B 2.1.1. Nguyên li u nghiên c u Nguyên li u nghiên c u là h t ñ u ñ tây (Phaseolus vulgaris). Thu mua Trung tâm Thương nghi p, thành ph Đà N ng. 2.1.2. Hóa ch t Nh ng hoá ch t s d ng trong nghiên c u này là nh ng hoá ch t có ñ tinh khi t cao, s d ng trong phân tích, ñư c mua c a các hãng Sigma, Merk và Trung Qu c. Các d ng c và hóa ch t thu c trung tâm công ngh sinh h c môi trư ng thu c ñ i h c Bách Khoa Đà N ng và trung tâm y t d phòng thành ph Đà N ng. - H ng c u các nhóm máu ngư i do khoa Huy t h c, b nh vi n Đa Khoa Đà N ng cung c p. 2.1.3. D ng c và thi t b S d ng các d ng c và thi t b thu c trung tâm công ngh sinh h c môi trư ng thu c ñ i h c Bách Khoa Đà N ng và trung tâm y t d phòng thành ph Đà N ng. 2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U 2.2.1. Phương pháp xác ñ nh ñ m [14] 2.2.2. Phương pháp xác ñ nh hàm lư ng protein 2.2.2.1. Xác ñ nh hàm lư ng protein thô [14] 2.2.2.2. Phương pháp xác ñ nh hàm lư ng protein t ng s b ng phương pháp ño quang [6]
9 Xác ñ nh hàm lư ng protein t ng s b ng ño h p th quang λ=280 và λ=260 (nm) trên máy quang ph k hi u UV TM (SmartSpec Plus Spectrophotometer - Bio Rad). Hàm lư ng protein ñư c tính theo công th c PC (pr) = (1,55*A280 - 0,77*A260)* D (mg/ml) Trong ñó: PC (pr): N ng ñ protein (mg/ml). A260, A280 : Đ h p th quang c a m u λ = 260 (nm) và λ = 280 (nm). D: Đ pha loãng c a dung d ch m u (l n). 2.2.3. Phương pháp xác ñ nh hàm lư ng gluxit t ng b ng phương pháp Bertran 2.2.4. Phương pháp xác ñ nh ho t ñ lectin [13] Ho t ñ lectin ñư c xác ñ nh theo phương pháp ngưng k t h ng c u c a Gebauer trên b n nh a ñáy nh n microtitter. Cách ti n hành: Dùng micropipetter cho vào m i gi ng c a b n nh a microtitter 50 µl ñ m PBS pH 7,2. L y 50 µl m u thí nghi m cho vào gi ng th nh t tr n ñ u, l y ra 50 µl ñưa vào gi ng th hai tr n ñ u, r i l i l y 50 µl t gi ng th hai cho vào gi ng th 3… cho ñ n gi ng th 10 (l y ra 50 µl r i b ñi). Như v y ta có n ng ñ m u pha loãng 2n l n (n là s gi ng ñã pha loãng, ñây là gi ng th 10). Gi ng th 11 và 12 không có m u ñư c s d ng làm m u ñ i ch ng. Cho vào m i gi ng c a b n nh a 50 µl h ng c u c a các nhóm máu. H ng c u c a các nhóm máu trư c khi s d ng ñư c r a s ch b ng nư c mu i sinh lý (NaCl 0,9%) t 2-3 l n (ly tâm 3000 rpm/5’) và pha loãng các n ng ñ 2-5% b ng nư c mu i sinh lý. V y t ng th tích m u và h ng c u trong m i gi ng là 100 µl.
10 Đ yên b n nh a ch a m u lectin và h ng c u nhi t ñ phòng t 30 phút ñ n 1 gi , ti n hành ñ c k t qu . K t qu ñư c ñ c d a trên s ñ i chi u v i các gi ng ñ i ch ng. Gi ng ñ i ch ng có hi n tư ng h ng c u t g n xu ng ñáy gi ng. Gi ng nào mà h ng c u t o l p màng m ng không t g n xu ng ñáy gi ng thì ch ng t có hi n tư ng ngưng k t, nghĩa là có ho t tính lectin. K t qu ñ c gi ng cu i cùng có s ngưng k t. Ho t tính gây ngưng k t ñư c tính như sau : - Ho t ñ chung (HĐC) c a lectin (vi t t t là HAA) ñư c xác ñ nh là ngh ch ñ o c a ñ pha loãng l n nh t c a d ch lectin mà ñó nó còn có kh năng gây ngưng k t toàn b lư ng h ng c u [28]. 2n HĐC (Đv/ml) = V Trong ñó n là s gi ng còn ho t tính lectin. V : th tích m u thí nghi m. (µl) - Ho t ñ riêng (HĐR): là giá tr ho t ñ c a lectin trong 1 mg protein. HĐC HĐR (Đv/mgpr) = mgpr 2.2.5. Phương pháp chi t tách và tinh s ch lectin 2.2.6. Phương pháp ñi n di trên gel polyacrylamide [27] 2.3. PHƯƠNG PHÁP XÁC Đ NH S TƯƠNG TÁC C A ION KIM LO I - LECTIN VÀ CÁC LO I ĐƯ NG - LECTIN 2.3.1. Tương tác c a ion kim lo i - lectin 2.3.2. Tương tác các lo i ñư ng - lectin
11 Chương 3 K T QU VÀ TH O LU N 3.1. K T QU KH O SÁT NGU N NGUYÊN LI U Ti n hành xác ñ nh m t s ch tiêu như ñ m, hàm lư ng protein thô, hàm lư ng gluxit ñư c th c hi n theo qui trình c a TCVN (ph l c 2) và quá trình xác ñ nh ñư c th c hi n t i Trung tâm K thu t Tiêu chu n Đo lư ng ch t lư ng 2. K t qu thu nh n ñư c trình bày t i b ng 3.1. B ng 3.1: M t s thành ph n hoá h c c a h t ñ u ñ tây. STT Ch tiêu ĐVT Phương pháp th K t qu 1 Đ m % TCVN 4295:2009 12,42 Hàm lư ng TCVN 4295:2009 2 % 18,20 protein thô PK2-F49 Hàm lư ng 3 % TCVN 4594-88 54,40 gluxit K t qu kh o sát các thành ph n c a h t ñ u ñ tây cho th y ñ m c a h t là 12,42% th p hơn so v i ñ m c a h t ñ u tr ng tây (14%). Hàm lư ng gluxit t ng s ñư c xác ñ nh là 54,4 cao hơn so v i hàm lư ng gluxit h t ñ u tr ng tây (47,7%) và ñ u Hà lan (48,0%). Hàm lư ng protein thô c a h t ñ u ñ tây là 18,2% thì l i tương ñ i th p hơn c a h t ñ u tr ng tây (20,6%) và ñ u Hà lan (19,7%).
12 3.2. NGHIÊN C U CHI T TÁCH LECTIN 3.2.1. Nghiên c u phương pháp chi t tách Quá trình chi t tách ñư c th c hi n theo sơ ñ sau: B tñ uñ Hòa ñ m PBS (pH =7,2) T l b t ñ u: ñ m là 1:5 Ly tâm l nh (40C) 6000 vòng/ 15phút C n D ch chi t protein thô V i m c tiêu là kh o sát ñi u ki n chi t d ch lectin thô ñ t hi u qu cao, chúng tôi ti n hành theo 3 phương pháp khác nhau: L y m t lư ng b t ñ u ñ như nhau (50g) hòa tan vào m t lư ng ñ m như nhau (250ml) và ti n hành chi t theo 3 phương pháp khác nhau: - Phương pháp 1: B t ñ u sau khi hòa ñ m ti n hành khu y (30 phút). - Phương pháp 2: B t ñ u sau khi hòa ñ m ti n hành siêu âm b ng máy siêu âm (30 phút). - Phương pháp 3: B t ñ u sau khi hòa ñ m ti n hành làm l nh ñông - tan giá - l nh ñông - tan giá. Sau khi chi t tách d ch protein thô b ng 3 phương pháp như trên, ti n hành xác ñ nh hàm lư ng protein thô theo phương pháp ño quang m c (2.2.2.2). K t qu thu ñư c b ng 3.2.
13 B ng 3.2: Hàm lư ng protein c a d ch chi t thô Phương pháp 1 2 3 Hàm lư ng protein (mg/ml) 49,19 51,83 49,90 Hàm lư ng protein thô thu nh n theo phương pháp 2 là cao nh t do s d ng tác nhân v t lý là sóng siêu âm có tác d ng phá v t bào nên protein ñư c gi i phóng ra nhi u hơn. Nh m xác ñ nh ho t ñ c a lectin thu ñư c theo 3 phương pháp trên tôi ti n hành th kh năng ngưng k t v i h ng c u theo phương pháp ñư c trình bày m c 2.2.4. K t qu ñư c th hi n b ng 3.3. B ng 3.3: Ho t ñ lectin c a m u thu nh n theo 3 phương pháp Nhóm HĐC (ñv/ml) HĐR (ñv/mgpr) máu 1 2 3 1 2 3 A 1280 2560 2560 26,02 49,39 51,3 B 1280 2560 2560 26,02 49,39 51,3 O 640 640 640 13,01 12,35 12,8 AB 2560 2560 2560 52,04 49,39 51,3 1- M u thu ñư c theo phương pháp 1 2- M u thu ñư c theo phương pháp 2 3- M u thu ñư c theo phương pháp 3 Đ so sánh ho t ñ chung c a lectin thu ñư c 3 m u trên tôi xây d ng ñ th như hình 3.2 và 3.3.
14 HĐC (ñv/ml) 3000 2560 2560 2560 2560 2560 2560 2560 2500 2000 M u1 M u2 1500 M u3 1280 1280 1000 640 640 640 500 0 A B O AB Nhóm máu Hình 3.2: Đ th bi u di n ho t ñ chung c a 3 m u d ch lectin thô HĐR (ñv/mg) 60 51.3 49.39 51.3 52.0449.39 51.3 49.39 50 40 M u1 M u2 30 26.02 26.02 M u3 20 13.01 12.3512.8 10 0 A B O AB Nhóm máu Hình 3.3: Đ th bi u di n ho t ñ riêng c a 3 m u d ch lectin thô
15 K t qu cho th y ho t ñ chung c a lectin m u 1 là th p hơn so v i 2 m u còn l i. Trong ñó m u 2 và m u 3 có ho t ñ chung là như nhau ñ i v i ngưng k t các nhóm máu. M u 1 có HĐR th p nh t so v i m u 2 và 3. M u 3 có HĐR cao hơn so v i 2 m u còn l i. Qua chi t tách d ch lectin theo 3 phương pháp trên cho th y r ng phương pháp 3 ñ t hi u su t chi t tách cao, tuy nhiên phương pháp này l i tiêu t n nhi u th i gian và nhiên li u hơn so v i phương pháp 2. D a vào k t qu thu ñư c trên, chúng tôi ch n m u chi t tách theo phương pháp 2 ñ th c hi n các nghiên c u ti p theo. 3.2.2. Kh o sát t l ñ m dùng ñ chi t Nh m kh o sát t l ñ m PBS dùng ñ chi t tách lectin ñ t hi u qu cao chúng tôi ti n hành chi t tách lectin theo phương pháp ñã ch n ph n trên và s d ng ñ m PBS (pH = 7,2) v i các m u 1,2,3 tương ng theo t l nguyên li u và ñ m khác nhau là 1:4; 1:5; 1:6 ñư c chi t trên cùng 1 lư ng b t ñ u là 50g. Sau khi chi t tách chúng tôi ti n hành xác ñ nh hàm lư ng protein t ng và ho t ñ lectin. K t qu thu ñư c ñư c bi u di n trên ñ th hình 3.4.
16 Hình 3.4: Đ th bi u di n hàm lư ng protein và ho t ñ lectin c a 3 m u v i t l ñ m chi t khác nhau. K t qu trên hình 3.4 có th th y r ng lư ng ñ m tăng thì lư ng protein thu nh n ñư c cũng tăng theo. Hàm lư ng protein thu nh n ñư c nhi u nh t m u 3 nhưng không l n hơn nhi u so v i m u 2. Đ th cũng cho th y r ng ho t ñ riêng c a lectin m u 2 là l n nh t (49,911ñv/mgpr) so v i 2 m u còn l i.
17 Trên cơ s so sánh hàm lư ng protein t ng s và ho t ñ c a lectin thu ñư c theo 3 t l ñ m kh o sát khác nhau có th nh n th y r ng s d ng t l b t ñ u ñ : ñ m PBS là 1:5 cho hi u qu chi t tách cao nh t. Vì v y tôi ch n t l ñ m dùng ñ chi t tách d ch protein lectin là 1:5 ñ chi t tách. 3.3. NGHIÊN C U KH O SÁT M T S TÍNH CH T LÝ HÓA C A LECTIN 3.3.1. Kh o sát nh hư ng c a nhi t ñ ñ n ho t ñ c a lectin Hình 3.5: Đ th bi u di n nh hư ng c a nhi t ñ ñ n ho t ñ c a lectin. Nhi t ñ t i thích cho lectin ho t ñ ng là trong kho ng 300C ÷ 400C. K t qu này cũng phù h p v i k t qu công b c a m t s tác gi nghiên c u v lectin c a h ñ u [1].
18 3.3.2. Kh o sát nh hư ng c a pH ñ n ho t ñ c a lectin K t qu trên hình 3.6 cho th y lectin ñ u ñ tây bi u hi n ho t ñ cao trong vùng pH trung tính và hơi ki m, pH = 7 ÷ 8. Trong kho ng pH này ho t ñ cao nh t là 2560ñv/ml. Theo k t qu nghiên c u c a tác gi Trương Văn Châu thì lectin chi t tách t h t ñ u cove cũng có kho ng pH t i thích là 6 ÷ 8, tương t v i k t qu thu nh n trong nghiên c u này. Hình 3.6: Đ th bi u di n nh hư ng c a pH ñ n ho t ñ lectin. 3.3.3. Kh o sát nh hư ng c a ion kim lo i ñ n ho t ñ lectin B ng 3.4: nh hư ng c a các ion kim lo i ñ n ho t ñ c a lectin Mu i N ng ñ kìm hãm N ng ñ kích thích BaCl2 - 0,25M CuSO4 - 0,0625M Mg(NO3)2 - 0,25M CaCO3 - 0,25M KCl - -
19 Ghi chú: d u “-“ trong b ng bi u th ph n ng không b kìm hãm T k t qu th c nghi m cho th y mu i KCl không nh hư ng ñ n ho t ñ c a lectin. Các lo i mu i còn l i, trong thành ph n c a chúng có các cation Ba2+, Cu2+, Mg2+, Ca2+ ñ u có nh hư ng ñ n ho t ñ c a lectin. S có m t c a các ion này làm tăng ho t ñ c a lectin. Tuy nhiên kh năng kích thích c a cation Cu2+ là m nh nh t vì n ng ñ th p nh t là 0,0625M nó ñã có tác d ng làm tăng ho t ñ c a lectin. 3.3.4. Kh o sát s tương tác ñ c hi u v i các lo i ñư ng K t qu thu ñư c trong b ng 3.5 B ng 3.5: Tương tác ñ c hi u gi a ñư ng v i các lo i lectin Tên các lo i ñư ng N ng ñ kìm hãm D - Glucose - D - Manose - D - Arabinose - Lactose - Saccharose - Ghi chú: - không kìm hãm Qua k t qu thu ñư c có th th y r ng trong 5 lo i ñư ng s d ng là D-glucose, D-manose, D-arabinose, lactose, saccharose thì không có lo i ñư ng nào có kh năng c ch rõ r t ñ n ho t ñ c a lectin ñ u ñ tây. K t qu này tương ñ ng v i các nghiên c u trư c ñó v lectin c a ñ u ñ tây là không tương tác v i các lo i ñư ng ñơn mà ch tương tác v i oligosaccharide và polysaccharide [20].
20 3.4. TINH S CH LECTIN Đ U Đ TÂY Ti n hành tinh s ch lectin thông qua sơ ñ tinh s ch lectin như sau B t ñ u ñ tây Chi t rút b ng ñ m PBS, pH 7,2 t l b t ñ u: ñ m PBS là 1:5. Khu y, siêu âm 30 phút; li tâm l nh (4oC), 6000 vòng/phút Ly tâm l nh (40C), 6000 vòng/ 15phút C n (b ) D ch chi t protein thô ch a lectin K t t a protein trong etanol 96% (t l d ch chi t: etanol là 1:3, t = 30 phút, 40C) D ch t a protein Ly tâm l nh (40C), 6000 vòng/ 15phút D ch (b ) Thu t a protein Hòa tan l i trong ñ m PBS (pH = 7,2) Ch ph m lectin thô Ch y qua c t s c ký Silicagel Ch ph m lectin 3.4.1. X lý sơ b m u thô M u d ch lectin sau khi ti n hành sơ b các bư c như trên thì k t qu thu ñư c có hàm lư ng protein thô b ng 22,03mg/ml và ho t ñ lectin là 2560ñv/ml.