Phân lập epigallocatechin từ chè xanh Tân Cương - Thái Nguyên và nghiên cứu khả năng chống oxy hóa của chúng

Chia sẻ: Thiên Lăng Sở | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:5

Thêm vào BST

Báo xấu

23
lượt xem 1
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Chè Tân Cương - Thái Nguyên (Camellia sinensis) từ lâu đã được sử dụng làm thức uống, gần đây còn được nghiên cứu sử dụng làm thực phẩm chức năng, có khả năng chữa bệnh, khả năng chống oxy hóa bảo vệ sức khỏe con người. Trong đó các catechin đóng vai trò quan trọng nhất. Bài báo này đề cập đến việc phân lập epigallocatechin trong chè xanh Tân Cương và khả năng chống oxy hóa của nó. Mời các bạn cùng tham khảo!

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Phân lập epigallocatechin từ chè xanh Tân Cương - Thái Nguyên và nghiên cứu khả năng chống oxy hóa của chúng

PHN LP EPIGALLOCATECHIN TØ CH XANH TN C×ÌNG THI NGUYN V NGHIN CÙU KH NNG CHÈNG OXY HÂA CÕA CHÓNG Ph¤m V«n Khang Tr÷íng HSP-H Th¡i Nguy¶n é ¼nh R¢ng Tr÷íng HSP H Nëi L¶ Xu¥n Qu¸ Vi»n Nhi»t îi, Vi»n Khoa håc v Cæng ngh» Vi»t Nam 1 Mð ¦u Ch± T¥n C÷ìng Th¡i Nguy¶n (Camellia sinensis) tø l¥u ¢ ÷ñc sû döng l m thùc uèng, g¦n ¥y cán ÷ñc nghi¶n cùu sû döng l m thüc ph©m chùc n«ng [1], câ kh£ n«ng chúa b»nh, kh£ n«ng chèng oxy hâa b£o v» sùc khäe con ng÷íi [2]. Trong â c¡c catechin âng vai trá quan trång nh§t [1]. B i b¡o n y · cªp ¸n vi»c ph¥n lªp epigallocatechin trong ch± xanh T¥n C÷ìng v kh£ n«ng chèng oxy hâa cõa nâ. 2 Thüc nghi»m 2.1 Thi¸t bà v hâa ch§t a. Thi¸t bà v döng cö nghi¶n cùu: - iºm nâng ch£y ÷ñc o b¬ng m¡y o nhi»t ë nâng ch£y Gallenkamp, (Germany). - Phê hçng ngo¤i (IR) ÷ñc o tr¶n m¡y IMPAC -410 (vi¶n n²n KBr) cõa h¢ng CARL ZEISS. - Sc kþ läng phê khèi (LC-MS): HP 1100 Agilant, cët C18, Synergi- Hydro-RP 80R, Phenomenex, US, detector: UV 254 nm. - Phê cëng h÷ðng tø h¤t nh¥n (NMR): Phê cëng h÷ðng tø h¤t nh¥n mët chi·u (1D NMR) 1 H NMR, 13 C NMR, hai chi·u (2D NMR), HMBC HSQC ÷ñc o tr¶n m¡y Bruker AVANCE 500MHz. - H» i»n hâa: AUTOLAB 30 (Eco Chemie B.V. Utrecht, The Netherlands), ph¦n m·m ghi v xû lþ sè li»u GPES 4.9, Origin 6.0, Vi»n kÿ thuªt nhi»t îi, Vi»n khoa håc v Cæng ngh» Vi»t Nam. b. Hâa ch§t nghi¶n cùu: - Dung mæi: etyl axetat, n-hexan, metanol, clorofom, axeton. 2.2 Ph¥n lªp epigallocatechin a. Chu©n bà dàch chi¸t Tø 7kg bóp ch± t÷ìi (mët bóp tæm v hai l¡ k¸ ti¸p) ÷ñc ch¸ bi¸n theo quy tr¼nh truy·n thèng (s§y vá s§y l¶n h÷ìng) thu ÷ñc 2,2kg m¨u khæ (M1 ) em b£o qu£n trong tói nilon tèi m u. Cho 1,5kg m¨u M1 v o b¼nh thõy tinh 10 l½t, ng¥m chi¸t vîi l÷ñng 1
dung mæi (CH3 OH : H2 O= 9:1 v/v) phò hñp rçi bàt k½n l¤i, °t nìi tèi, m¡t. Ng¥m tø 3 ¸n 5 ng y sau â chi¸t c§t thu hçi dung mæi d÷îi ¡p su§t th§p, ÷ñc 430 gam cao chi¸t metanol. b. Ph¥n lªp b¬ng sc kþ cët L§y 50g cao chi¸t metanol trën ·u vîi l÷ñng tèi thiºu silicagel (Merck 60) cï h¤t 0,04 ¸n 0,063mm). S§y ð nhi»t ë kho£ng 40-45 o C º bay hìi h¸t dung mæi, ÷ñc hén hñp tìi. Cho ch§t l¶n cët sao cho lîp c°n chi¸t tr£i ·u tr¶n cët, cho mët lîp mäng sikicagel v mët dóm bæng ð tr¶n. Ti¸n h nh ch¤y ên ành cët vîi dung mæi rûa gi£i clorofom v etyl axetat. C§t cæ quay c¡c dung dàch sc kþ d÷îi ¡p su§t th§p thu ÷ñc c¡c cao clorofom, etyl axetat thu ÷ñc 15g cao chi¸t etyl axetat dòng º ph¥n lªp ch§t. Ch¤y cët tinh ph¥n o¤n etyl axetat/n-hexan: 7/3 (v/v) thu ÷ñc 3 gam tinh thº khæng m u (Rf = 0,74) ph£n ùng m u vîi thuèc thû gçm K3 [F e(CN )6 ]1% v F eCl3 1%), tinh thº h¼nh kim, nhi»t ë nâng ch£y 276-277 o C, câ gâc quay cüc l - 45o trong metanol, tan tèt trong metanol, etanol, n÷îc, etyl axetat, axeton, tan ½t trong n-haxan (kþ hi»u l RR). Ch§t RR ÷ñc tinh ch¸ l¤i qua cët sephadex LH-20 vîi h» dung mæi clorofom/etanol: 7/1 (v/v) v ÷ñc kiºm tra ë tinh khi¸t sc kþ läng khèi phê (LC-MS) [3]. H¼nh 1. Tinh thº ch§t RR 2.3 Mët sè °c tr÷ng phê cõa hñp ch§t RR a. Phê hçng ngo¤i (IR-FT) cõa ch§t RR tr¶n b£n KBr: Sè sâng (cm−1 ): 3407 (rëng, tò, ch¥n p½c tø 2500 ¸n 3700 cm−1 ) l dao ëng hâa trà cõa OH câ li¶n k¸t hyro; 2967 (y¸u) l dao ëng hâa trà Csp 3 − H ; 1628 (m¤nh, nhån), 1518 (trung b¼nh, nhån), 1450 (trung b¼nh, nhån) l c¡c v¥n dao ëng cõa nh¥n thìm, 1150 (trung b¼nh, nhån) l dao ëng hâa trà cõa C-O-C. b. Phê 1 H NMR cõa ch§t RR M¨u ch§t RR ÷ñc ph¥n t½ch NMR tr¶n l m¡y Bruker Avance 500MHz (1 H-) vîi ch§t chu©n nëi l TMS trong dung mæi CD3 OD; 6,54 (2H, s, H-12 ,H-16) ; 5,96 (1H, d, 4 J = 2,3, Hz, H6); 5,93 (1H, d, 4 J = 2,3Hz, H-8); 4,190 (1H, m, H-3) v¥n bëi, 4,817 (1H, d, J = 4,7Hz, H-2); 2,86 (1H, dd, 2 J = 16,73Hz v 3 J = 4,7Hz, Hb); 2,75 (1H, dd, 3 J = 4,7Hz v 2 J = 16,73Hz, Ha). c. Phê 13 C-NMR cõa ch§t RR vîi ch§t nëi chu©n TMS trong dung mæi CD3 OD (δ = 49,0ppm), ð t¦n sè 125 MHz, δ (ppm): 79,9 (C-2, CH); 67,5 (C-3, CH); 29,1 (C-4, 2
-CH2 -) tr¶n váng C ; 157,3 (C-5, CAr -OH) ; 96,4 (C-6, CAr -H); 157,9 (C-7, CAr -OH); 95,9 (C-8, CAr -H), 157,6 (C-9, CAr -O-), 100,2 (C-10,CAr ) tr¶n váng A; 131,5 (C-11,CAr ); 107 (C-12 v C-16, CAr -H); 146,7 (C-13 v C15, CAr -OH); 133,6 (C-14, CAr -OH) tr¶n váng B. d. Phê HSQC v HMBC cõa ch§t RR v c¡c phê NMR kh¡c ÷ñc tr¼nh b y ð b£ng 1 v 2 B£ng 1: Quy k¸t c¡c t½n hi»u tr¶n phê HSQC cõa ch§t RR STT 1 H-NMR 13 C-NMR δ (ppm) H δ (ppm) C 1 4,817d H-2 79,9 C-2 2 4,190m H-3 67,5 C-3 3 2,751 H-4a 29,1 C-4 2,872 H-4b 4 5,956 H-6 96,4 C-6 5 5,933 H-8 95,9 C-8 6 6,536 H-12, H-16 107,01 C-12,C-16 B£ng 2: K¸t qu£ quy k¸t c¡c gi¡ trà phê 1H-NMR, 13C-NMR, HMBC cõa ch§t RR v so s¡nh vîi t i li»u [4] Sè T i li»u TT Hñp ch§t RR [4] cõa C 13 C 1H NMR 13 C NMR HMBC NMR CD3 OD, δH (ppm) (J,Hz) δC (ppm) 125MHz CD3 OD, 500MHz CD3 OD, 125MHz 2 4,817;d (4,7) H-2 79,9 C-2 C-3, C-11 82,3 3 4,190; m (4,7; 16,73) H-3 67,5 C-3 67,7 4 2,751 (16,73; 4,7)dd, H- 4a 29,2 C-4 C-3, C-10, C-2 28,3 2,863 (16,73; 3.0)dd, H- 4b C-3, C-10, C-2 5 157,3 C-5 C-6 157,2 6 5,933 (2.3), d H-6 95,9 C-6 C-5, C-7 95,3 7 157,9 C-7 C-6, C-8 157,8 8 5,956 (2.3), d H-8 96,4 C-8 96,8 9 157,6 C-9 C-8 157,3 10 100,2 C-10 C-8, C-2 99,4 11 131,5 C-11 C-12, C-16, C-2 130,9 12 6,536; s H-12,16 107,0 C-12, C-16 C-12,16; C-11 107,8 13 146,7 C-13,15 C-12, C-16 146,3 14 133,6 C-14 C-12, C-16 133,3 3
2.4 Kh£o s¡t kh£ n«ng chèng oxy hâa cõa ch§t RR Th¸ oxy hâa khû cõa hñp ch§t RR ÷ñc x¡c ành düa v o ph÷ìng ph¡p CV (cyclic voltammetry). Ch§t RR ÷ñc háa tan trong dung dàch n÷îc muèi NaCl 0,9% vîi c¡c nçng ë kh¡c nhau tø 0; 0,5; 1 v 2g/1. Ti¸n h nh thüc nghi»m tr¶n h» i»n hâa vîi b¼nh ph£n ùng câ ba i»n cüc (i»n cüc èi Pt l÷îi, i»n cüc l m vi»c Pt câ di»n t½ch 1 cm2 v i»n cüu so s¡nh calomen), i»n th¸ kh£o s¡t tø 0:1,1 V/SCE; chu ký qu²t 5, tèc ë qu²t 0,03 V/s. C¡c sè li»u thu ÷ñc sû lþ tr¶n c¡c ph¦n m·m GPES 4.9 v Origin 6.0. 3 K¸t qu£ v th£o luªn 3.1 X¡c ành c§u tróc cõa catechin Hñp ch§t RR k¸t tinh m u trng, h¼nh kim, nhi»t ë nâng ch£y 276-277 o C, gâc quay cüc 45o . Tr¶n phê IR nhªn th§y câ v¥n h§p thö cüc ¤i t¤i 3407 cm−1 , c÷íng ë m¤nh °c tr÷ng cho dao ëng hâa trà cõa nhâm OH do â trong ph¥n tû câ nhi·u nhâm hydroxyl, câ v¥n h§p thö t¤i cüc ¤i 1150cm−1 (trung b¼nh, nhån) l dao ëng hâa trà cõa C-O-C. Tr¶n phê 1 H NMR nhªn th§t câ 7 t½n hi»u trong â câ 1 t½n hi»u câ ÷íng ë 2H, 4 v¥n æi ùng vîi 2H câ δ = 2,86ppm (1H, dd. 2 J = 16,73 Hz v 3 J = 4,7Hz, Hb) 2,75 ppm (1H, dd, 3 J = 4,7 Hz v 2 J = 16,73Hz, Ha) cõa nhâm CH - tr¶n váng C, hai v¥n ìn ùng vîi ùng 2 vîi hai nhâm CH cõa váng C. Tr¶n phê 13 C NMR câ 13 t½n hi»u phê, trong â câ 29,2ppm (C-4, -CH2 -) tr¶n váng C, hai t½n hi»u cõa cacbon trong hai nhâm CH 79,9 (C-2, CH), 67,5 (C-3, CH), cán l¤i l c¡c t½n hi»u cõa c¡c nguy¶n tû cacbon tr¶n nh¥n thìm. K¸t hñp vîi c¡c dú li»u cõa phê HSQC v HMBC v so s¡nh vîi c¡c dú li»u cõa t i li»u [4] x¡c ành ch§t RR l (-) epigallocatechin. Phê khèi l÷ñng MS công xu§t hi»n pic ion m/z 307 [M+H]+, ho n to n phò hñp vîi t i li»u n¶n cæng thùc ph¥n tû cõa (-)epigallocatechin C15 H14 O7 vi¸t tt l EGC vîi cæng thùc v c¡c b£ng sè li»u phê 1,2 nh÷ sau: H¼nh 2. Cæng thùc EGC 3.2 Kh£ n«ng chèng oxy hâa cõa catechin K¸t qu£ o ÷íng ph¥n cüc CV ÷ñc giîi thi»u trong h¼nh 3. EGC 0: ÷íng n·n NaCl 0,9% EGC 1: dung dàch EGC 0,5 g/l EGC 2: dung dàch EGC 1 g/l EGC 3: dung dàch EGC 2 g/l (EGC ÷ñc háa tan trong NaCl 0,9%) 4
H¼nh 3. ÷íng cong CV cõa ch§t EGC ÷íng CV cho th§y r¬ng tr¶n nh¡nh catèt x£y ra ph£n ùng oxy hâa EGC m¤nh nh§t t¤i gi¡ trà E (V/SCE) l 0,407V, vîi mªt ë dáng oxy hâa J ¤t 0,2mA/cm2 . Mªt ë dáng oxy hâa t«ng nhanh ð vòng i»n th¸ th§p, tø 0,1V ¸n 0,4V, cho th§y kh£ n«ng bà oxy hâa t«ng nhanh còng vîi i»n th¸ ph¥n cüc. Nçng ë c ng cao, dáng oxy hâa c ng lîn, câ ngh¾a l kh£ n«ng chèng oxy hâa ch÷a ¤t ¸n b¢o háa m t«ng theo nçng ë. . . Theo k¸t qu£ nghi¶n cùu cõa t¡c gi£ [1] nhªn th§y n¸u h ng ng y bê sung v o cì thº 0,5mg EGC th¼ câ thº gi£m ÷ñc tèi thiºu 25% nguy cì mc b»nh ung th÷ da v ung th÷ vó. i·u n y công phò hñp vîi c¡c k¸t qu£ nghi¶n cùu cõa nhâm t¡c gi£ [2] cho th§y n¸u h m l÷ñng c¡c ch§t chèng oxy hâa v÷ñt qu¡ 5,7g/1 th¼ kh£ n«ng oxy hâa công gi£m m¤nh v d¦n ¤t ¸n b¢o háa. 4 K¸t luªn Tø bóp ch± t÷ìi trçng ð T¥n C÷ìng Th¡i Nguy¶n chóng tæi ¢ ÷ñc ph¥n lªp v nhªn d¤ng c§u tróc (b¬ng c¡c ph÷ìng ph¡p phê IR, NMR v MS) hñp ch§t epigallocatechin (EGC); ¢ nghi¶n cùu kh£ n«ng chèng oxy hâa cõa EGC theo ph÷ìng ph¡p i»n hâa v nhªn th§y ð nçng ë 2g/1 th¼ mªt ë dáng oxy hâa J ¤t cüc ¤i l 2mA/cm2 khi i»n th¸ ¤t 0,407V. TI LIU THAM KHO 1. Yukihito Hara, 2001. Green tea: Health benef½t and applications. , Marcel Dekker Incorpo- rated. 2. T.Yokozawa, etae, 1998. In vitro and in vivo studies on the radical scavenging activity of tea. J.Agric. Food. Chem, 46, pp. 2143-2150. 3. Petra Miketova. . . , 2000. J, Mass Spectrum. 35(7), pp. 860-869. 4. Tran Van Sung . . . , 2007. Separation, purification and determination of (-) epigallocatechin- 3-gallate from the leaves of Camellia sinensis L.J. Vietnamese Sciences and Technology, Vol. 45, No 18, pp. 550-455. ABSTRACT Isolation of Epigallocatechin from the leaves of camellia sinensis growing in Tan Cuong, Thai Nguyen and its antioxidant activity The process for etraction, isolation of (-)-epigallocatechin (EGC) from fresh leaves of green tea (Camellia sinensis) has been improved. The structures of isolated EGC were confirmed by analyzing IR, NMR, MS spectroscopic data. The antioxidant activity of EGC was carried out by using electrochemical method. Key words: Camellia sinensis, epigallocatechin, antioxidant, electrochemical method. 5