Sinh thiết tức thì (Sinh thiết cắt lạnh), kỹ thuật nhuộm PAS (Phản ứng Acid Periodic - Schiff)

Chia sẻ: Nhậm Ngạn Đông | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:4

Thêm vào BST

Báo xấu

3
lượt xem 1
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Tài liệu "Sinh thiết tức thì (Sinh thiết cắt lạnh), Kỹ thuật nhuộm PAS (Phản ứng Acid Periodic - Schiff)" nhằm cung cấp cho học viên những nội dung về định nghĩa, chỉ định, các bước chuẩn bị, các bước tiến hành, đọc kết quả sinh thiết tức thì (Sinh thiết cắt lạnh). Mời các bạn cùng tham khảo!

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Sinh thiết tức thì (Sinh thiết cắt lạnh), kỹ thuật nhuộm PAS (Phản ứng Acid Periodic - Schiff)

SINH THIẾT TỨC THÌ (Sinh thiết cắt lạnh) I. ĐẠI CƢƠNG Sinh thiết tức thì là một phương pháp chẩn đoán mô bệnh học trong lúc mổ được chỉ định cho các trường hợp chưa r lành hay ác tính trước phẫu thuật. Phương pháp này rất quan trọng giúp các bác sĩ phẫu thuật định hướng điều trị, đem lại lợi ích cho người bệnh, giảm công sức cho phẫu thuật viêm. Sinh thiết tức thì là phương pháp chẩn đoán có độ chính xác cao, có thể áp dụng rộng rãi tại các cơ sở điều trị ngoại khoa lớn, đặc biệt là các trung tâm điều trị ung thư. II. CHỈ ĐỊNH - Phẫu thuật triệt căn nhưng trước mổ chưa r lành hau ác tính; - Phẫu thuật thăm dò nhằm quyết định hướng điều trị tiếp theo; - Kiểm tra tình trạng diện cắt xem con tế bào ung thư không; - Kiểm tra tình trạng di căn; - Làm tiêu bản cắt lạnh dùng cho nhuộm hóa mô miễn dịch. III. CHUẨN BỊ 1. Ngƣời thực hiện - 1 Bác sĩ Giải phẫu bệnh có kinh nghiệm; - 1 kỹ thuật viên Giải phẫu bệnh. 2. Phƣơng tiện - Máy cắt lạnh đặt âm 300C; - Chất keo chuyên dụng gắn bệnh phẩm; - Lam kính, lamen, thuốc nhuộm xanh toluidine, hematoxylin và eosin; cồn, toluen; - Bệnh phẩm: tổn thương được lấy ra trong lúc phẫu thuật không được cố định mà phải chuyển ngay đến phòng xét nghiệm giải phẫu bệnh. Bệnh phẩm phải có kích thước tối thiểu 0,5 cm đường kính. IV. CÁC BƢỚC TIẾN HÀNH - Bác sĩ Giải phẫu bệnh sau khi nhận bệnh phẩm phải xem kỹ đại thể: kích thước, mật độ, u nang hay u đặc, màu sắc để có chẩn đoán sơ bộ; 626
- Cắt mảnh bệnh phẩm để lấy một mảnh đại diện (nếu là bệnh phẩm to) kích thước khoảng chừng 1 x 1 x 0,2 cm. Bệnh phẩm nhỏ thì lấy hết; - Đặt bệnh phẩm lên giá đỡ, nhỏ chất keo xung quanh bệnh phẩm; - Đặt giá đựng bệnh phẩm vào vị trí làm lạnh trong máy; đợi 1-2 phú đến khi bệnh phẩm đông cứng; - Đặt bệnh phẩm vào vị trí cắt, cắt tiêu bản 3-5 micromet; - Cắt ít nhất 2 tiêu bản, 1 tiêu bản nhuộm toluidine, 1 nhuôm HE; - Nhuộm xanh toluidine 10-20 giây; - Nhuộm HE 5-7 phút; V. ĐỌC KẾT QUẢ - Đọc kết quả dưới kính hiển vi quang học. - Hạn chế tuyệt đối dương tính giả. 627
KỸ THUẬT NHUỘM PAS (Phản ứng ACID PERIODIC - SCHIFF) I. ĐẠI CƢƠNG Nhuộm PAS là phương pháp dùng để phát hiện chất nhầy trong bào tương của tế bào. II. CHỈ ĐỊNH - Các trường hợp cần phát hiện chất nhầy trong bào tương. - Các trường hợp cần nhìn r sợi nấm; III. NGUYÊN TẮC Dùng một tác nhân oxy hoá là acid periodic để phá vỡ mối liên kết của 2 nguyên tử C trong một số nhóm hoá học (các nhóm glycol 1 - 2, hydro 1. amino - 2, hydroxy - 1, alkylamino - 2 và hydrõyl - 1, ceto - 2) làm xuất hiện các nhóm aldehyt. Các nhóm aldehyt này nhìn thấy được nhờ phản ứng của thuốc thử Schiff (fuschin basic không màu bởi axit sulfureux) tạo thành chất có màu đỏ. IV. CÁC BƢỚC TIẾN HÀNH - Tiêu bản tẩy paraffin qua cồn và rửa nước như nhuộm HE - Oxi hoá trong dung dịch acid periodic 1 10 phút - Rửa nước chảy 5 phút - Cho phản ứng với thuốc thử Schiff từ 5 - 30 phút - Rửa nước chảy 5 phút - Nhuộm nhân trong hematoxylin từ 30 giây đến vài phút - Rửa nước chảy 3 phút - Nhúng nhanh qua cồn acid vài giây - Rửa nước chảy 10 phút - Chuyển qua cồn 950. Khử nước bằng cồn tuyệt đối. Làm trong bằng xylen. Gắn baume Canada. V. KẾT QUẢ Glycogen màu đỏ Nhân tế bào màu xanh - xanh đen Nấm, chất nhầy màu hồng - đỏ 628
Chú ý: Nếu muốn nhuộm Glycogen cần có một tiêu bản làm chứng. Sau tiêu bản làm chứng được xử trí 1 giờ trong Diastase 1 ở 370 rồi rửa nước và oxi hoá bằng HIO4 như tiêu bản kia. Nếu cả 2 tiêu bản đều dương tính với thuốc thử Schiff thì không phải là Glycogen. Ngược lại, tiêu bản làm chứng âm tính, tiêu bản kia dương tính thì chất cần tìm là glycogen. Nếu không có Diastase có thể dùng nước bọt thay thế, kết quả cũng tốt. Pha thuốc thử Schiff: Hoà tan Fuschin basic (hoặc Pararosanilin) 1 g trong 200 ml nước cất đun sôi. Lắc mạnh cho tan hết. Để nguội đến 500C đem lọc. Thêm vào đó 2 ml axit HCl nguyên chất. Tiếp tục để nguội đến 250C cho thêm metabisulfit sodium 1 g (hoặc potassium Na2S2O5 hoặc K2S2O5). Để dung dịch 24 giờ trong bóng tối. Dung dịch chuyển màu vàng rơm là tốt. 629