Tác dụng kháng candida albicans in vitro và ex vivo của 2-methoxy-1,4-naphthoquinon

Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011<br /> <br /> TÁC DỤNG KHÁNG CANDIDA ALBICANS IN VITRO VÀ EX VIVO<br /> CỦA 2-METHOXY-1,4-NAPHTHOQUINON<br /> Nguyễn Đinh Nga*, Mai Phước Tân*, Quách Lâm Tư Ái**<br /> <br /> TÓM TẮT<br /> Đặt vấn đề: Để sử dụng 2-methoxy-1,4 naphthoquinon như nguồn nguyên liệu cho tác động kháng nấm<br /> cần được chứng minh tác động kháng Candida albicans in vitro, in vivo của hợp chất này.<br /> Mục tiêu nghiên cứu: khảo sát tác động kháng Candida spp. in vitro và ex vivo của 2-methoxy-1,4<br /> naphthoquinon so sánh với một số chất đối chiếu như cao BMT, ketoconazol, nystatin và terbinafin.<br /> Vật liệu và phương pháp: sử dụng phương pháp pha loãng theo NCCLS-M27-A2; khảo sát tác động của<br /> các chất kháng nấm trên dạng biofilm của C. albicans theo hướng dẫn của Gordon Ramage và cs.; xác định MIC<br /> ex vivo trên mô hình móng nhiễm C. albicans, biến đổi của mô hình gây nhiễm nấm móng thực nghiệm với T.<br /> rubrum và T. mentagrophytes.<br /> Kết quả: Kết quả nghiên cứu cho thấy 2-methoxy-1,4 naphthoquinon cho tác động kháng C. albicans in<br /> vitro và ex vivo tương đương cao BMT.<br /> Kết luận: Có thể sử dụng kết quả từ khảo sát tác động kháng C. albicans dạng biofilm và ex vivo trên mô<br /> móng để ước lượng liểu thử nghiệm in vivo của hợp chất này.<br /> Từ khóa: Cao Bông móng tay (BMT); 2-methoxy-1,4 naphthoquinon; Candida spp.; nồng độ tối thiểu ức<br /> chế in vitro (MIC in vitro); MIC ex vivo.<br /> <br /> ABSTRACT<br /> THE ANTIFUNGAL ACTIVITY AGAINST CANDIDA ALBICANS IN VITRO AND EX VIVO<br /> OF 2-METHOXY-1,4-NAPHTHOQUINONE.<br /> Nguyen Dinh Nga, Mai Phuoc Tan, Quach Lam Tu Ai<br /> * Y Hoc TP. Ho Chi Minh* Vol. 15 - Supplement of No 1 - 2011: 324 - 328<br /> Background: To use a new substance (2-methoxy-1,4-naphtoquinone) as an antifungal agent, this<br /> substance has been determined the antifungal activity in vitro and in vivo.<br /> Objective: To determine the antifungal activity in vitro and ex vivo of 2-methoxy-1,4 naphthoquinone, a<br /> principle compound of balsam extract, extracted from Impatiens balsamina L. Balsaminaceae which was<br /> synthesized against Candida spp compare with balsam extract and some other antifungal agents.<br /> Material and methods: The antifungal activity against Candida spp. in vitro of these compounds were<br /> determined by the dilution method according to the guidline of NCCLS M27-A2. The MICs of these compounds<br /> against Candida albicans biofilms were carried out as the detail techniques of Gordon Ramage and cs. and MICs<br /> ex vivo were determined by modified model using the experimental tinea unguium to evaluate the antifungal<br /> activity against Trichophyton rubrum and T. mentagrophytes.<br /> Outcome: Data received from these experiments show the antifungal activities of 2-methoxy-1,4<br /> naphthoquinone against Candida spp. were equivalent to balsam extract.<br /> Conclusion: 2-methoxy-1,4 naphthoquinone could be studied further more in vivo to use as an antifungal<br /> agent.<br /> *Khoa Dược-Đại học Y Dược TP. HCM *Đại học Mở TP.HCM<br /> Tác giả liên lạc: PGS. TS. Nguyễn Đinh Nga<br /> ĐT: 0908 83 69 69 Email: nganguyendinh@yahoo.com<br /> <br /> 324<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Khoa<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Keywords: balsam extract; 2-methoxy-1,4 naphthoquinon; Candida spp.; MIC in vitro; MIC ex vivo.<br /> Balsaminaceae) có độ ẩm < 10% (xác định bằng<br /> ĐẶT VẤN ĐỀ<br /> máy đo độ ẩm - Moisture Analyzer offers<br /> Khi khảo sát một chất kháng nấm mới để<br /> halogen heating của Bộ môn Dược Liệu – Khoa<br /> đưa vào sử dụng, các vấn đề khó khăn mà các<br /> Dược – Đại Học Y Dược TP. HCM). Chứa<br /> nhà nghiên cứu thường gặp là không tìm thấy<br /> khoảng 70% 2-methoxy-1,4-naphthoquinon,<br /> sự tương đồng giữa tác động in vitro và hiệu<br /> định lượng bằng phương pháp đo quang.<br /> quả điều trị lâm sàng, hoặc khó khăn trong<br /> Ketoconazole chất chuẩn đối chiếu, lô<br /> việc tiên lượng nồng độ thử nghiệm in vivo từ<br /> 50030107, hàm lượng 99,63%.<br /> kết quả in vitro.<br /> Terbinafin HCl (SHRUTI BULK Drug<br /> Cao Bông móng tay (cao BMT) chiết xuất từ<br /> PVT LTD).<br /> cây Bông móng tay (Impatiens balsamina L.<br /> Nystatin, lô 4011316, do công ty cổ phần<br /> Balsaminaceae) với thành phần chính cho tác<br /> dược<br /> phẩm 3/2 cung cấp.<br /> động<br /> kháng<br /> nấm<br /> là<br /> 2-methoxy-1,4<br /> naphthoquinon, đã được chứng minh tác động<br /> Phương pháp nghiên cứu<br /> (5)<br /> kháng Candida albicans in vitro khá tốt . Tuy<br /> Tác động kháng Candida albicans và Candida<br /> nhiên để có thể sử dụng cao BMT làm thuốc<br /> non albicans dạng nấm men (MIC in vitro) của các<br /> kháng nấm, hai vấn đề quan trọng cần phải giải<br /> chất kháng nấm được thực hiện bằng phương<br /> quyết là nguồn nguyên liệu ổn định và hiệu quả<br /> pháp pha loãng, theo hướng dẫn của NCCLS<br /> kháng nấm in vivo. Trong phạm vi đề tài, chúng<br /> M27-A2, sử dụng môi trường canh thang<br /> tôi khảo sát tác động kháng Candida albicans in<br /> Mueller Hinton bổ sung glucose và xanh<br /> vitro; C. albicans dạng biofilm và MIC ex vivo trên<br /> methylen.<br /> mô hình gây nhiễm bệnh Candida trên mô móng<br /> Tác động kháng Candida albicans ex vivo<br /> tay của người khỏe mạnh cắt rời của 2-methoxyđược thực hiện trên dạng biofilm của Candida<br /> 1,4 naphthoquinon (hoạt chất chính cho tác<br /> albicans và trên Candida albicans nhiễm nấm<br /> động kháng nấm của Bông móng tay) nguồn<br /> móng thực nghiệm.<br /> tổng hợp, nhằm xác định hướng sử dụng 2Phương pháp xác định tác động kháng<br /> methoxy-1,4 naphthoquinon như nguồn nguyên<br /> Candida<br /> albicans dạng biofilm trên bảng nhựa<br /> liệu kháng nấm.<br /> polystyren: Một trong những đặc điểm liên quan<br /> ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU<br /> đến độc tính và khả năng kháng thuốc của C.<br /> albicans<br /> là sự tạo màng sinh học (biofilm) trên<br /> Đối tượng nghiên cứu<br /> các vật liệu trơ. Sự tạo thành biofilm của C.<br /> Vi nấm<br /> albicans trên bảng nhựa polystyren sẽ tương tự<br /> 22 chủng Candida albicans và 12 chủng<br /> như biofilm do vi nấm tạo thành ở dụng cụ y<br /> Candida non albicans phân lập từ bệnh nhân<br /> khoa như ống thông, răng giả,… các chất cho<br /> nhiễm bệnh Candida niêm mạc.<br /> hiệu quả kháng dạng biofilm của Candida sẽ có<br /> Candida albicans ATCC 10231.<br /> tiềm năng cho hiệu quả in vivo(1,3).<br /> Chất kháng nấm<br /> Tác động kháng C. albicans dạng biofilm được<br /> 2-methoxy-1,4-naphthoquinon do Bộ môn<br /> Hóa Dược, Khoa Dược, Đại học Y Dược TP.<br /> HCM tổng hợp và cung cấp.<br /> <br /> Chất đối chiếu<br /> Cao Bông móng tay (BMT) chiết từ vỏ quả<br /> cây bông móng tay (Impatiens balsamina L.<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Khoa<br /> <br /> thực hiện qua các giai đoạn sau:<br /> Sự tạo biofilms của C. albicans trên bảng nhựa<br /> polystyren, sử dụng môi trường glycin-glucose(2).<br /> Sau khi Candida albicans tạo biofilm và gắn dính<br /> vào bảng nhựa, rửa giếng 3 lần bằng dung dịch<br /> sinh lý-đệm phosphat vô trùng, thấm khô để<br /> <br /> 325<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011<br /> <br /> loại bỏ những tế bào nấm men lơ lửng trong môi<br /> trường. Dùng kính hiển vi nghịch đảo để khảo<br /> sát sự tạo thành biofilm của C. albicans trên bảng<br /> nhựa. (vi nấm ở dạng sợi bám dính vào đáy<br /> bảng nhựa, không bị mất đi ở giai đoạn rửa).<br /> <br /> Khảo sát hoạt tính của chất kháng nấm lên<br /> dạng biofilm của C. albicans<br /> Tác nhân kháng nấm là được pha loãng với<br /> môi trường YPG (yeast extract 5 g, pepton 10<br /> g, glucose 20 g; nước cất 1000 ml) thành dãy<br /> nồng độ từ cao đến thấp vào các giếng đã có<br /> biofilm, cụ thể: 2-methoxy-1,4-naphthoquinon<br /> từ 256 µg/ml đến 0,125 µg/ml; cao BMT: 256<br /> µg/ml - 0,125 µg/ml; nystatin: 32 µg/ml – 0,015<br /> µg/ml; ketoconazol: 10 µg/ml – 0,00094 µg/ml.<br /> Ủ ở 37 oC, sau 24-48 h đọc kết quả bằng cách<br /> quan sát sự phát triển trở lại của vi nấm gây<br /> đục môi trường.<br /> Mô hình gây nhiễm Candida albicans lên mô<br /> móng tay cô lập(4,6).<br /> Móng tay được cắt từ người tình nguyện<br /> không sử dụng sơn móng tay hay các chất<br /> đánh bóng khác, không bị các bệnh về móng.<br /> Móng tay được trữ trong lọ bijou 8 ml, dán<br /> nhãn và để trong tủ lạnh đến khi sử dụng. Cắt<br /> móng tay thành các mảnh 3 x 3 mm. Khi sử<br /> dụng, rửa bằng ethanol 70 %, lắc rung 3 lần,<br /> mỗi lần 1 phút và dịch sinh lý vô trùng, lắc<br /> rung 2 lần, mỗi lần 1 phút. Sau khi được rửa<br /> sạch, móng được để khô tự nhiên trong<br /> laminar ở nhiệt độ phòng.<br /> Gây nhiễm móng<br /> Nấm men C. albicans được hoạt hóa trên<br /> thạch YPG, ủ 37 oC. Sau 48 h lấy một vòng cấy<br /> nấm phân tán đều trong nước muối sinh lý có bổ<br /> sung 0,05 % Tween 80 để đạt 107 CFU/ ml. Số<br /> lượng tế bào nấm men được xác định bằng<br /> buồng đếm Neubauer.<br /> Pha loãng dịch treo nấm trong môi trường<br /> thạch nước (thành phần của môi trường thạch<br /> nước gồm K2HPO4 0,2%; MgSO4 0,005%; CaCl2<br /> 0,005%; agar 1,5%, nước cất 1 lit) sao cho mật độ<br /> nấm men là 106 CFU/ ml và cho thạch nước chứa<br /> <br /> 326<br /> <br /> nấm vào đĩa petri vô trùng. Đặt phần nền móng<br /> đã được xử lý vào đĩa Petri sao cho phần nền<br /> móng tiếp xúc với mặt thạch chứa nấm. Như<br /> vậy, Candida albicans chỉ sử dụng móng là nguồn<br /> dinh dưỡng duy nhất. ủ đĩa Petri ở 37 oC / 7<br /> ngày. Kiểm tra sự phát triển của Candida albicans<br /> trên móng bằng kính hiển vi quang học, ở vật<br /> kính x10 và x40.<br /> Chuẩn bị chất kháng nấm<br /> Các chất kháng nấm được hòa tan trong<br /> dung dịch Polyethylen glycol – cồn ethyl<br /> (75:25) với nồng độ gấp 10 lần nồng độ thử<br /> nghiệm, rồi được pha loãng 10 lần trong môi<br /> trường thạch YPG có bổ sung 0,05 % Tween 80<br /> thành dãy nồng độ thử nghiệm: Terbinafin từ<br /> 2 – 0,06 %; Ketoconazole: 2 – 0,06 %; Cao bông<br /> móng tay: 0,5 – 0,015 %; 2-methoxy-1,4naphthoquinon: 0,5 – 0,015 %.<br /> Móng sau khi được gây nhiễm nấm được<br /> chuyển sang đĩa petri môi trường chứa chất<br /> kháng nấm, đặt lưng móng tiếp xúc với môi<br /> trường, nền móng hướng lên trên, ủ 37 oC. Sau<br /> từ 5 – 7 ngày quan sát sự phát triển của Candida<br /> albicans quanh móng bằng mắt thường để xác<br /> định nồng độ tối thiểu ức chế vi nấm.<br /> Sau khi đọc kết quả, các móng không thấy<br /> có vi nấm phát triển quanh móng sẽ được<br /> chuyển đĩa petri có chứa môi trường thạch<br /> Sabouraud mới, ủ 37 oC trong 2 ngày để xác<br /> định nồng độ tối thiểu diệt nấm (MFC) trên<br /> mô móng.<br /> <br /> KẾT QUẢ<br /> Nồng độ tối thiểu ức chế sự phát triển của<br /> Candida albicans và Candida non albicans in vitro<br /> của 2-methoxy-1,4-naphthoquinon so với cao<br /> BMT và ketoconazol.<br /> Kết quả ở bảng 1 cho thấy 2-methoxy-1,4naphthoquinon cho tác động kháng Candida spp.<br /> in vitro tương đương cao BMT, và tác động trên<br /> những chủng C. albicans nhạy trung gian với<br /> ketoconazol.<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Khoa<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011<br /> Chất thử<br /> <br /> Bảng 1. Tác động kháng Candida spp. của 2methoxy-1,4-naphthoquinon in vitro<br /> Chủng nấm<br /> <br /> Candida<br /> albicans (n=21)<br /> <br /> Candida non<br /> albicans (n=12)<br /> <br /> Phân bố các chủng<br /> theo khoảng MIC<br /> Chất kháng nấm<br /> (μg/ml)<br /> 16<br /> Ketoconazole<br /> 16<br /> 5<br /> 0<br /> Cao BMT<br /> 0<br /> 20<br /> 1<br /> 2-methoxy-1,4naphthoquinon<br /> <br /> 0<br /> <br /> 20<br /> <br /> 0<br /> <br /> Ketoconazole<br /> Cao BMT<br /> <br /> 12<br /> 0<br /> <br /> 0<br /> 12<br /> <br /> 0<br /> 0<br /> <br /> 2-methoxy-1,4naphthoquinon<br /> <br /> 0<br /> <br /> 11<br /> <br /> 1<br /> <br /> Tác động kháng Candida albicans dạng<br /> biofilm của 2-methoxy-1,4-naphthoquinon so<br /> với cao BMT và ketoconazol.<br /> Bảng 2. So sánh MIC của các chất kháng nấm trên<br /> dạng biofilm và dạng nấm men của C. albicans.<br /> MIC biofilm MIC in vitro<br /> (µg/ml)<br /> (µg/ml)<br /> 2-methoxy-1,4-naphthoquinon<br /> 32<br /> 8<br /> Cao BMT<br /> 32<br /> 16<br /> Nystatin<br /> 3<br /> 2<br /> Ketoconazol<br /> 0,9<br /> 0,06 - 0,125<br /> Chất kháng nấm<br /> <br /> Ghi chú: Số liệu nhận được là trung bình của 9 lần lập lại<br /> thử nghiệm.<br /> <br /> Kết quả bảng 2 cho thấy, nồng độ tối thiểu<br /> ức chế C. albicans dạng biofilm của ketoconazol<br /> là 0,9 µg/ ml, cao hơn nồng độ MIC in vitro<br /> khoảng 10 lần. 2-methoxy-1,4-naphthoquinon và<br /> cao Bông móng tay có nồng độ ức chế tối thiểu<br /> C. albicans dạng biofilm là 32 x 10-3 mg/ml, gấp 24 lần MIC in vitro. Riêng Nystatin là chất cho tác<br /> dụng diệt nấm Candida albicans nên cho MIC<br /> biofilm tương đương MIC in vitro.<br /> Tác động kháng Candida albicans trên mô<br /> móng của 2-methoxy-1,4-naphthoquinon so với<br /> cao BMT, ketoconazol và terbinafin.<br /> Bảng 3. Tác động kháng C. albicans ở mô hình móng<br /> của các chất kháng nấm<br /> Chất thử<br /> <br /> Terbinafin<br /> Ketoconazol<br /> Cao Bông móng tay<br /> <br /> Nồng độ chất thử (mg/ml)<br /> MIC<br /> MIC<br /> MFC<br /> (in vitro) (ex vivo) (ex vivo)<br /> 5<br /> 20<br /> 0,03 x 10-3<br /> 10<br /> 20<br /> 0,016<br /> 1,25<br /> 2,5<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Khoa<br /> <br /> 2-methoxy-1,4naphtoquinon<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> Nồng độ chất thử (mg/ml)<br /> MIC<br /> MIC<br /> MFC<br /> (in vitro) (ex vivo) (ex vivo)<br /> 0,008<br /> 1,25<br /> 5<br /> <br /> Ghi chú: (-) không thử<br /> <br /> Các nồng độ MIC và MFC ex vivo được thực<br /> hiện với ít nhất 6 mẫu móng tay khác nhau cho<br /> mỗi chất kháng nấm.<br /> Thí nghiệm được thực hiện song song với lô<br /> chứng gồm 6 mẫu móng tay được gây nhiễm<br /> nhưng không tiếp xúc với các chất kháng nấm<br /> <br /> BÀN LUẬN<br /> Tác động kháng Candida spp. của 2methoxy-1,4-naphthoquinon, cao BMT và<br /> ketoconazol in vitro:<br /> Kết quả ở bảng 1 cho thấy: Tỉ lệ các chủng<br /> Candida phân lập từ bệnh nhân nhiễm Candida<br /> niêm mạc nhạy với ketoconazol, với khoảng<br /> MIC < 8 μg/ml là 16/21, chiếm 76,19%; 5/21<br /> chủng có độ nhạy trung gian với MIC từ 8-16<br /> μg/ml chiếm 23,81%; không có chủng kháng<br /> ketoconazol.<br /> 2-methoxy-1,4-naphthoquinon cho tác động<br /> kháng Candida spp. in vitro tương đương cao<br /> BMT và tác động trên những chủng C. albicans<br /> nhạy trung gian với ketoconazol.<br /> <br /> Tác động kháng Candida albicans dạng<br /> biofilm của 2-methoxy-1,4-naphthoquinon<br /> so với cao BMT và ketoconazol.<br /> Kết quả khảo sát tác động của các chất<br /> kháng nấm trên C. albicans dạng biofilm được<br /> tạo trên bảng nhựa polystyren cho thấy:<br /> Nystatin là chất cho tác dụng diệt nấm Candida<br /> albicans nên cho MIC biofilm tương đương MIC<br /> in vitro. Các chất thử nghiệm còn lại đều có nồng<br /> độ tối thiểu tác động trên C. albicans dạng<br /> biofilm cao hơn MIC in vitro. Ketoconazol là chất<br /> kìm nấm cho nồng độ tối thiểu ức chế C. albicans<br /> dạng biofilm cao hơn nồng độ MIC in vitro<br /> khoảng 10 lần. 2-methoxy-1,4-naphthoquinon và<br /> cao Bông móng tay ức chế được dạng biofilm<br /> của C. albicans với nồng độ ức chế tối thiểu cao<br /> <br /> 327<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011<br /> <br /> gấp 2-4 lần MIC in vitro, nên là một ứng viên có<br /> thể nghiên cứu tiếp theo để sử dụng như nguồn<br /> nguyên liệu làm thuốc kháng nấm.<br /> <br /> Khảo sát tác động kháng C. albicans trên<br /> mô móng tay của các chất kháng nấm.<br /> So sánh tác động kháng C. albicans in vitro và<br /> tác động kháng Candida albicans trên mô móng<br /> tay (ex vivo) của ketoconazol, có thể thấy sự khác<br /> biệt về nồng độ ức chế nấm giữa hai phương<br /> pháp thử rất lớn, MIC ex vivo của ketoconazol<br /> cao hơn MIC in vitro khoảng 33 ngàn lần. Nồng<br /> độ MIC và MFC ex vivo của ketoconazol phù<br /> hợp với nồng độ trong chế phẩm dung ngoài<br /> đang lưu hành trên thị trường (kem Nizoral*<br /> chứa hoạt chất ketoconazol 2 %).<br /> Nồng độ MIC và MFC ex vivo của terbinafin<br /> cũng nằm trong khoảng nồng độ của chế phẩm<br /> Lamisil* đang lưu hành trên thị trường (kem<br /> lamisil* chứa hoạt chất Terbinafin 1 %).<br /> Nồng độ MIC và MFC ex vivo của cao Bông<br /> móng tay và 2-methoxy-1,4-naphthoquinon cao<br /> hơn MIC in vitro từ 156 – 625 lần. 2-methoxy-1,4naphthoquinon tuy có MIC in vitro và ex vivo<br /> thấp hơn cao Bông móng tay, nhưng MFC ex<br /> vivo lại cao hơn gấp đôi, điều này có thể do khả<br /> năng thấm vào móng của cao Bông móng tay tốt<br /> hơn 2-methoxy-1,4-naphthoquinon, hoạt chất<br /> riêng rẽ.<br /> Do có sự khác biệt lớn giữa nồng độ tác<br /> động kháng C. albicans của chất thử in vitro và<br /> <br /> 328<br /> <br /> ex vivo, đồng thời có sự phù hợp giữa nồng độ<br /> tác động kháng C. albicans ở móng và nồng độ<br /> của chất thử trong các chế phẩm đang lưu<br /> hành trên thị trường nên có thể áp dụng mô<br /> hình này để phỏng đoán liều thử nghiệm in<br /> vivo của một số chất kháng nấm mới nhằm<br /> giảm được thời gian dò liều, giảm số thú thử<br /> nghiệm và giảm chi phí.<br /> Cảm ơn: Nhóm nghiên cứu chân thành cảm ơn Khoa<br /> Dược, Đại học Y Dược TP. HCM đã cung cấp kinh phí và<br /> tạo điều kiện nghiên cứu.<br /> <br /> TÀI LIỆU THAM KHẢO<br /> 1.<br /> <br /> 2.<br /> <br /> 3.<br /> <br /> 4.<br /> <br /> 5.<br /> <br /> 6.<br /> <br /> Ernst J.E. và Rogers P.D. (2007), Methods in Molecular<br /> medicine, Antifungal agent - methods and protocols, Vol.188,<br /> Humana Press Inc, Totowa, NJ, 71-75.<br /> Gülhan Vardcer-Ünlü, (1998). A comparison of germ tube<br /> production by Candida albicans in three media, Tr. J. of<br /> Biology, 22, 2005-2010.<br /> Jain N., Kohli R., Cook E., Gialanella P., Chang T., and Fries<br /> B.C. (2007), Biofilm formation by and antifungal susceptibility<br /> of Candida isolate from urine, Applied and enviromental<br /> microbiology, ASM. 1697-1703.<br /> Nguyen Đinh Nga, Nguyen Vu Giang Bac, Nguyen Thu<br /> Guong (2009). Using the experimental tinea unguium model<br /> to evaluate the antifungal activity against Trichophyton of<br /> some plant extracts. Pharma Indochina VI-(The development<br /> of Indochina Pharmacy in context of Global economic<br /> Recession) Proceeding of the sixth Indochina Conference on<br /> Pharmaceutical Sciences. 771-775.<br /> Trần Thành Đạo, Nguyễn Đinh Nga (2009). Tổng hợp và tác<br /> dụng kháng nấm của methyl lawson, thành phần chính của<br /> cây bông móng tay. Tạp chí dược học, 49(395), 29-32<br /> Yazdanparast S.A. and Bartin C.R. (2006), Athroconidia<br /> production in Trichophyton rubrum and new ex vivo model of<br /> onychomycosis, Journal of Medical Microbiology, 55, 15771581.<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Khoa<br /> <br />