Thiết lập chất đối chiếu palmitoyl pyrazinamid, xây dựng quy trình định lượng palmitoyl pyrazinamid và xác định giới hạn tạp chất pyrazinamid trong chế phẩm bột khô phun sấy

Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 2 * 2019<br /> <br /> <br /> THIẾT LẬP CHẤT ĐỐI CHIẾU PALMITOYL PYRAZINAMID;<br /> XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG PALMITOYL PYRAZINAMID<br /> VÀ XÁC ĐỊNH GIỚI HẠN TẠP CHẤT PYRAZINAMID<br /> TRONG CHẾ PHẨM BỘT KHÔ PHUN SẤY<br /> Huỳnh Thị Thanh Hằng*, Phan Thị Hương Giang**, Lê Quang Hiển***, Nguyễn Trường Thịnh***,<br /> Võ Thị Quỳnh Như***, Phạm Đình Duy*, Phan Văn Hồ Nam*<br /> <br /> TÓMTẮT<br /> Mở đầu: Các tiểu phân xốp mang tiền chất thuốc kháng lao pyrazinamid (PZA), palmitoyl<br /> pyrazinamid (PP), có thể khắc phục được những khuyết điểm của PZA trong hệ thống trị liệu tại phổi. Để<br /> góp phần kiểm soát chất lượng của nguyên liệu và chế phẩm, chúng tôi tiến hành nghiên cứu thiết lập chất<br /> đối chiếu PP, đồng thời xây dựng và thẩm định quy trình định lượng hoạt chất PP và xác định giới hạn tạp<br /> chất PZA trong chế phẩm bột khô phun sấy.<br /> Mục tiêu: Thiết lập chất đối chiếu PP. Xây dựng và thẩm định quy trình định lượng hoạt chất PP và<br /> xác định giới hạn tạp chất PZA trong chế phẩm bột khô phun sấy.<br /> Đối tượng - Phương pháp nghiên cứu: Thiết lập chất đối chiếu PP theo hướng dẫn ISO Guide 35.<br /> Giá trị ấn định, độ lệch chuẩn, độ không đảm bảo đo chuẩn được tính toán theo hướng dẫn của ISO 13528.<br /> Xây dựng và thẩm định quy trình phân tích theo hướng dẫn của ASEAN.<br /> Kết quả: PP đã được thiết lập chất đối chiếu với độ tinh khiết là 99,35%. Đã xây dựng được quy trình<br /> định lượng PP trong chế phẩm bột khô phun sấy bằng HPLC: Cột sắc ký HiQ sil C18HS (250 x 4,6 mm;<br /> 5μm), pha động 100% ACN, bước sóng phát hiện 268 nm, tốc độ dòng 1,0 ml/phút, thể tích tiêm 20 μl,<br /> nhiệt độ cột 30 °C. Đã xây dựng được quy trình định lượng tạp chất PZA trong chế phẩm bột khô phun sấy<br /> bằng HPLC: cột sắc ký Phenomenex C18 (250 x 4,6 mm; 5μm), pha động ACN – Dung dịch acid acetic pH<br /> 3 (5:95), tốc độ dòng 1,0 ml/phút, thể tích tiêm 20 μl, nhiệt độ cột 30 °C, giới hạn phát hiện (LOD) của<br /> PZA được xác định là 0,005 ppm.<br /> Kết luận: PP đối chiếu đạt yêu cầu của một chất chuẩn sử dụng trong công tác kiểm tra và đánh giá<br /> chất lượng nguyên liệu PP và chế phẩm. Đồng thời đã xây dựng được quy trình định lượng PP và quy<br /> trình xác định giới hạn tạp chất PZA trong chế phẩm bột khô phun sấy bằng HPLC.<br /> Từ khóa: Palmitoyl pyrazinamid, pyrazinamid, thiết lập chất đối chiếu.<br /> ABSTRACT<br /> ESTABLISHMENT OF REFERENCE STANDARD SYNTHESIZED PALMITOYL PYRAZINAMIDE<br /> AS WELL AS QUANTITATIVE DETERMINATION OF PALMITATE PYRAZINAMIDE<br /> AND DETERMINATION OF PYRAZINAMIDE AS IMPURITY IN SPRAY-DRIED POWDER<br /> BY HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY<br /> Huynh Thi Thanh Hang, Phan Thị Huong Giang, Le Quang Hien, Nguyen Truong Thinh,<br /> Vo Thi Quynh Nhu, Pham Dinh Duy, Phan Van Ho Nam<br /> * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol. 23 - No 2- 2019: 489 – 498<br /> <br /> *<br /> Khoa Dược, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh<br /> **<br /> Khoa Thiết lập Chất chuẩn và Chất đối chiếu - Viện Kiểm nghiệm Thuốc Thành phố. Hồ Chí Minh<br /> ***<br /> Khoa Hóa lý, Trung tâm Kiểm nghiệm thuốc và mỹ phẩm tỉnh Đồng Nai<br /> Tác giả liên lạc: TS. Phan Văn Hồ Nam ĐT: 0909615007 Email: phanvanhonam@ump.edu.vn<br /> 490 Chuyên Đề Dược<br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 2 * 2019 Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Introduction: The small particles carrying the precursor of pyrazinamide (PZA), palmitoyl<br /> pyrazinamide (PP), could overcome some PZA’s imperfection in lung-distributing system. To monitor the<br /> quality of the new material and its products, the study on establishment of reference standard synthesized<br /> PP as well as quantitative determination of palmitate pyrazinamide and determination of PZA as impurity<br /> in spray-dried powder by high performance liquid chromatography was conducted.<br /> Objectives: The aim of this study was establishment of reference standard synthesized PP as well as<br /> quantitative determination of palmitate pyrazinamide and determination of PZA as impurity in spray-dried<br /> powder by high performance liquid chromatography.<br /> Materials and Methods: Establishment of PP reference standard was carried out basing on general<br /> guidelines of ISO 35. The standard uncertainty, assigned value, and standard deviation were calculated<br /> basing on ISO 13528. Development and validation of HPLC method for analysis of PZA and PP was<br /> carried out basing on ASEAN guidelines.<br /> Results: The assigned value of PP reached the purity of 99.35%. HPLC conditions for assay of PP in<br /> spray-dried powder were HiQ sil C18HS column (250 x 4.6 mm x 5 μm); column temperature of 30 oC;<br /> wavelength of 268 nm; mobile phase containing ACN 100%; flow rate of 1mL/min; injection volume of<br /> 20 μL; this method met requirements of system suitability, repeatability, linearity and accuracy. HPLC<br /> conditions for determination of PZA impurity, in spray-dried powder were Phenomenex C18 column (250 x<br /> 4.6 mm x 5 μm); column temperature of 30 oC; wavelength of 268 nm; mobile phase containing ACN – acid<br /> acetic pH 3 (5:95); flow rate of 1mL/min; injection volume of 20 μL. This method met requirements of<br /> system suitability, selectivity and the limit of PZA detection was 0.005 ppm.<br /> Conclusion: PP can be accepted as a reference standard for quality control of PP materials and<br /> products thereof. The HPLC method for qualification of PP was successfully developed.<br /> Key words: Palmitoyl pyrazinamide, pyrazinamide, establishment of reference standard.<br /> ĐẶTVẤNĐỀ ĐỐITƯỢNG–PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU<br /> Palmitoyl pyrazinamid (PP) được sử dụng Đối tượng nghiên cứu<br /> để bào chế các dạng trị liệu tại phổi nhằm hạn PP đã được tổng hợp và được xác định<br /> chế pyrazinamid (PZA) phóng thích phóng độ tinh khiết trên 99% tính trên chế phẩm<br /> vào hệ thống tuần hoàn, tăng nồng độ thuốc nguyên trạng theo nghiên cứu của Nguyễn<br /> tại chỗ để duy trì hiệu quả điều trị lao phổi(5-7). Duy Phương và các cộng sự(5), tại bộ môn<br /> Để kiểm soát chất lượng của nguyên liệu và Hóa hữu cơ – Khoa Dược – Đại học Y Dược<br /> các dạng bào chế từ hoạt chất này, cũng như TP. Hồ Chí Minh. Mẫu thuốc bột khô phun<br /> theo dõi nồng độ thuốc trong huyết tương sấy PP được bào chế tại Khoa Dược, Đại học<br /> người trong các nghiên cứu dược động học, Y Dược thành phố Hồ Chí Minh. Công thức:<br /> dược lực học tiếp theo, nghiên cứu này được Palmitoyl pyrazinamid 0,3 g; tá dược vừa đủ<br /> tiến hành với mục tiêu thiết lập chất đối chiếu 4,0 g.<br /> PP đồng thời xây dựng quy trình định lượng Chất đối chiếu<br /> PP và thử giới hạn tạp chất PZA trong chế Pyrazinamid có hàm lượng tính trên chế<br /> phẩm bột khô phun sấy nhằm góp phần trong phẩm khan là 99,94%, số lô 0212154 của Viện<br /> việc tiêu chuẩn hóa sản phẩm. Kiểm nghiệm thuốc trung ương.<br /> <br /> <br /> <br /> Chuyên Đề Dược 491<br /> Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 2 * 2019<br /> <br /> Hóa chất – dung môi 20 μl, nhiệt độ cột 30°C, pha động ACN 100%,<br /> Acetonitril, methanol đạt tiêu chuẩn sắc ký theo nghiên cứu của Nguyễn Duy Phương và<br /> lỏng (Merck), acid acetic băng đạt tiêu chuẩn các cộng sự(6). Đồng thời cũng dựa vào điều<br /> phân tích (Merck), ethanol đạt tiêu chuẩn kiện sắc ký này để tiến hành thẩm định quy<br /> phân tích (Prolabo). trình định lượng PP trong bột khô phun sấy<br /> Trang thiết bị theo hướng dẫn của ASEAN về thẩm định<br /> Hệ thống HPLC Alliance 2695e-2996, thiết quy trình phân tích(4). Quy trình xác định tạp<br /> bị DSC Q20 TA Instrument, hệ thống LCMS chất PZA trong bột khô phun sấy được tham<br /> Micro Quattro API ESCi Multi-mode khảo từ USP41(8): Pha tĩnh: Cột C18 (250 mm x<br /> Ionization (Micromass), máy cộng hưởng từ 4,6 mm; 5 μm), detector: PDA, bước sóng phát<br /> hạt nhân Bruker AM500 FTNMR Spectrometer hiện: 268 nm, tốc độ dòng: 1,0 ml/phút, thể<br /> (Viện hóa học và Công nghệ Việt nam). Tủ tích tiêm: 20 μl, nhiệt độ cột: 30 °C, pha động:<br /> đóng ống Labconco Protector Glove Box (Viện ACN – Dung dịch acid acetic pH 3 (5:95).<br /> KN thuốc TP. Hồ Chí Minh). Hệ thống HPLC KẾTQUẢ<br /> Shimadzu 20 AD với đầu dò PDA SPD-M20A Thiết lập chất đối chiếu PP<br /> (Nhật Bản), cân phân tích Mettler Toledo AB PP được đóng gói trong lọ thuỷ tinh nâu,<br /> 265- S, độ chính xác 0,1 mg (Thụy Sĩ), cân nút có lớp đệm Teflon, môi trường khí trơ N2<br /> phân tích Mettler Toledo AB 204, độ chính xác 99,99%, độ ẩm tương đối 10%, bảo quản ở<br /> 0,01 mg (Thụy Sĩ), máy đo pH Mettler DL25 nhiệt độ 2-8 oC. 5 g PP được đóng 100 lọ, mỗi<br /> (Thụy Sĩ), Hanna- HI 2211 (Romania), bể siêu lọ 50 mg và 6 lọ được lấy ngẫu nhiên theo<br /> phần mềm excel. Kết quả xác định tính tương<br /> âm Nahita 626 (Tây Ban Nha).<br /> thích hệ thống quy trình xác định độ tinh<br /> Phương pháp nghiên cứu khiết PP bằng HPLC tại 2 phòng thí nghiệm<br /> Quá trình thiết lập chất đối chiếu PP được đều đạt yêu cầu, các thông số sắc ký đều có<br /> thực hiện theo các bước: đóng gói, đánh giá độ RSD  2% (Bảng 1). Kết quả đánh giá độ đồng<br /> đồng nhất giữa các lọ sau khi đóng gói theo nhất quá trình đóng lọ được trình bày trong<br /> Bảng 2 cho thấy độ lặp lại tương đối của độ<br /> hướng dẫn của ISO guide 35:2006(2), đánh giá<br /> tinh khiết PP giữa các lọ trong quá trình đóng<br /> kết quả định lượng liên phòng thí nghiệm tại gói đạt yêu cầu (RSD