Tiểu luận: Điện Di Trên Agarose gel

Chia sẻ: Nguyễn Thuần | Ngày: | Loại File: PPTX | Số trang:18

Thêm vào BST

Báo xấu

379
lượt xem 70
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Đề tài Điện Di Trên Agarose gel gồm các nội dung chính: Agarose gel là gì, ứng dụng điện Di Trên Agarose gel, bài thuyết trình hữu ích cho các bạn đang tìm hiểu về Agarose gel.

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Tiểu luận: Điện Di Trên Agarose gel

SEMINAR Chủ đề: agaROSE GVHD: Th.s Nguyễn Thị Vân Anh
kỹ thuật rất hữu ích sử Ứng dụng dụng nhằm phân tích xác của Điện di định và tinh sạch các đoạn DNA Giúp phát hiện Giúpệnực hiệnốc trị liệu ọn ra được Đi th di thu Ch nhanh những công tác chọn giống nếp bè Ở chấ nổ bậ tính mọit cơ ithể tsinh vật, vật chất sống được cấu tạo từ lọc tao giống lúa năng ụ ất c d su cao của lúaại phân tử sinh học, trong đó quanTácng ng ấủa ion như mùi các đ thuầndrẻ tiền avà trọ nh t hơn 15% và là Tác ụng củ thơm,bệnh vàovà protein Vìsvậứng c ụnghiểu, phân tích các protein, thuốc: nucleic acid Chữa y việd tìm khác hiệộtquố n một M u điả cao •protein trên 10% amilosetửặc lấy RNA là rất cần thiết. Khi hiểu rõ cấgây tổn phân ho DNA, cơ thể dòng ệ Không u trúc, chiều: thương da cácặc điểm c ủa các• đại phân tử này, chúng ta có thể kết đ ion thuố c có Làm giãn mạch • Không gây đau, hại ra vớỏsựơ phát triển các kỹ thuật, các công ngh ệ hiện hợp kh i i c • Tác động lên không lây truyền đại để tiến hành lai tạo, chọndi ống mới, sản xuất các thể Điện gi protein hệ thần kinh các bệnh đường hợp chất thứ cấp dùng trong y học, sản xuất các ch ất máu kháng sinh…..
ĐIỆN DI LÀ GÌ?
Ngu yên Kĩ thuật điện di hoạt động nhờ vào lực kéo tắc của điện trường tác động vào các phân tử tích điện và kích thướt lỗ củaNgoài ềncòn điệ thể n ra (gel) thực Điện di trên gel Điện di trên gel polyacrylamide ndi trong trường hiệ kh agarose:n ả : khả năng phân xung (PFGE Các phân tử âm hay dương trong một điện trường sẽ di năng phân tách chuyển20kb gel với vậgel ốckhác nhau nhờ vào sự GelEl gel 50bp – trong tách n t 5bp – Pulse Field khác nhau của: 1kb ectrophonesic) •Lực điện trường tác động lên chúng(nếu các phân tử tích điện khác nhau) •Kích thước của phân tử so với kích thước của lỗ gel •Hình dạng, độ cồng kềnh của phân tử Phương pháp điện di
ĐiệN di trên gel agarose -Agarose(polysaccharide) có khối lượng phân tử xấp xỉ 120.000 Da -Polymer mạch thẳng không bị sulphate hóa chứa hai Agarose gốc xen kẽ nhau là D-galactose và 3,6-anhydro-L- galactose Agarose được tách ra ở dạng thạch từ một số loài biển đỏ tảo, hoặc rong biển, được tìm thấy tại California và miền đông châu Á. -Cấu trúc agarose không đồng nhất: vừa tích điện vừa trung hòa. trong phân tử có chứa nhóm sunfat, metoxyl, cacboxyl. hàm lượng sunfat trong agarose được coi là chỉ số độ sạch của agarose. chỉ số này càng thấp thì chất lượng càng cao. thường trong agarose có chứa 0.04% sunfat -Agarose là một polyme trung tính tạo nên tính đông tụ của agar
Cac phân tử ́ nucleic acid có Agarose gel là một khôi lượng và ́ loại gel thông dụng ̣ ́ điên tich khac ́ nhất, một phần do nhau được tach ́ thao tác đơn giản, ra khi di chuyên ̉ thường dùng để phân từ cực âm sang tách những đoạn có cực dương cua ̉ kích thước trong hệ điên di trong ̣ khoảng 0.5 – 20 kb. môt điên trường ̣ ̣ có điên thế và ̣ cường độ thich ́ hợp Agarose gel
Kích thước phân tử Cấu hình DNA Nồng độ agarose ́ Cac DNA dang ̣ ̣ Đoan DNA mang Các phân tử ̀ vong đong, ́ kich thước nhất đinh ́ ̣ DNA có kích vong đứt và ̀ sẽ dich chuyên ở cac ̣ ̉ ́ thước càng ̣ mach thăng ̉ tôc độ khac nhau qua ́ ́ lớn (khối có cung môt ̀ ̣ cac ban gel chứa cac ́ ̉ ́ lượng phân tử khối lượng nông độ agarose khac ̀ ́ lớn) thì tốc phân tử sẽ dich ̣ nhau.Nồng độ độ dịch chuyên trên ̉ agarose cao có khả chuyển càng agarose gel ở năng phân tách các chậm cac tôc độ khac ́ ́ ́ đoạn DNAnhỏ và nhau ngược lại Cac yếu tố anh hưởng đên tôc độ dich ́ ̉ ́ ́ ̣ ̉ ̣ chuyên điên di trong agarose gel
Thành phần thực Agarose hiện điện di Lược Khuôn gel Máy điện di
Quy trình điện di Dễ dang chay ra và tao thanh ̀ ̉ ̣ ̀ Chuẩn bị ̣ môt dung mâutrong suôt, kêt ̣ Đăt dịch DNA ́ ̃ ́ agarose quả là vao gihôi thâm gel̀ đan ếng ̣ ̀ ̀ Khi tăng điện thế chí ở cac nông độ thâp ́ ̀ ́ Cocủa ̀quá TuyPhươnái lpháp quan c nhuộm ́ nhiêu loai nhiênng ực của thuố ̣ trình điệ agarose khacđnhau i DNA trongsợi đơn là ị bẩn bởi sulphate ́ ối vớ di các đoạn sát nucle acid agarose DNA Dễ b thichn ợpường dịchối ậnấp ivà cóthiệu suất ́ lớ h th đêt̉ ươgel đ th lợ nhấ làpolysaccharides (SP) ng ̣ chay thu điên di, loai nhanh qang không cao. Saun khia SP con ức chế cac chuyểṇ huỳnh thuốc nhuộm hơ nữ ̣ agarose dùng ̀ ́ dung tôtso v́nhuhuỳnh quang EtBr. vào giữa như ligase, polymerase ̀ hơn ́ nhâtớtrong EtBr sẽ xen EtBr ộm, i các enzyme nghiêm là từ base của đê phát va RE thí đoạn ̣ nhỏtype-ực dùngnucleic acid ̀ và cho các đượ c ̉ II-agarosen ć ực̣hiphátDNA dễ idàngvà âm đế co nôi ện hiện sợ đôi chúng ở phép thâm thâu thâp RNA sợi đơn Các đoạn DNA dung ly từ những dương trong gel. ̉ ́ ́ Quan sát sự dịch chuyển gel như thế phải được làm sạch bằng màu và Nhuộm DNA Quan sát bromophenol cân thận trước khi chúng được ̉ đểchụpt hìnhnào cần biế lúc dùng như ằng EtBr blà các khuôn mẫu hoặc ngừng điện di. cơ chấtcho các enzyme naỳ
Sơ đồ minh họa các bước trong quá trình ̣ điên di agarose gel
Agarose gel có Cho vào trong nhiệt độ nóng đệm với tỷ lệ 1:1 chảy thấp Cắt Bổ sung muối đến nồng độ 0,5M Đoạn DNA quan tâm Dung dịch gel có DNA 1. Dùng agarose có nhiệt độ nóng chảy thấp Chiết bằng phenol/chloroform Một số phương pháp thu và kết tủa hồi DNA agarose gel
Agarose gel chứa Cho vào tube ly bằng DNA tâm Ly tâm ở 10.000- Đoạn DNA quan 15.000 rpm tâm trong10-15 phút. Cho vào đệm DNA liên kết chiết làm nóng với hòa tan màng Thủy tinh đặt trong một cột Rửa cột vài lần lọc 2. Ly tâm Dung ly DNA ra khỏi màng
Cắt một rãnh nhỏ phía Cách 2 Cắt một rãnh nhỏ trước trước băng DNA quan tâm băng DNA quan tâm Đặt trong khe một mẫu Làm đầy bằng glycerol giấy loại NA-45 Điện di nhanh trở lại để Điện di nhanh trở lại để chuyển DNA từ gel vào chuyển DNA từ gel vào mẫu giấy trong dung dịch glycerol Rửa mẫu giấy và dung ly DNA trong đệm Chiết dung dị ch glycerol- DNA bằng pipette Tách chiết DNA bằng Cách 1 phenol và kết tủa 3. Điện di vào bẫy
Hòa tan gel trong Rửa và kết tủa dung dịch tiểu thể muối NaI (4 M) Dung ly DNA ra Bổ sung hạt thủy khỏi hạt thủy tinh vào dung dịch tinh trong đệm muối thấp Tách chiết DNA DNA liên kết với bằng phenol hạt thủy tinh và kết tủa 4. Dùng hạt thủy tinh
Ứng d ụn g c ủa điện di agar ose gel
Ưu điểm và nhượ c điểm
Kết luận Phương pháp điện di giúp nhận biết, phân tích và tinh sạch DNA. Nhờ phương pháp này mà người ta ứng dụng để phân tích giải trình tự DNA, ứng dụng trong các nghiên cứu về DNA rất hiệu quả. Có nhiều loại khuôn đỡ được áp dụng cho kỹ thuật này. Nhưng mỗi loại phân tử khác nhau sẽ phù hợp đối với loại khuôn đỡ khác nhau. Điện di agarose gel là phương pháp tối ưu nhất đối với DNA
Cảm ơn cô và các bạn đã lắng nghe !