Bài giảng Chương 2: Các phương pháp định lượng vi sinh thực phẩm

Chia sẻ: Sơn Tùng | Ngày: | Loại File: PPT | Số trang:68

Thêm vào BST

Báo xấu

214
lượt xem 36
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Bài giảng "Chương 2: Các phương pháp định lượng vi sinh thực phẩm" cung cấp cho người học các kiến thức: Phương pháp đếm trực tiếp, phương pháp đếm khuẩn lạc, quy trình xác định số lượng VSV bằng phương pháp màng lọc,... Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết.

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Bài giảng Chương 2: Các phương pháp định lượng vi sinh thực phẩm

CHƯƠNG 2 CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG VI SINH THỰC PHẨM
I. PHƯƠNG PHÁP ĐẾM TRỰC TIẾP Dùng để xác định các loại vi sinh vật đơn bào có kích thước lớn: nấm men, tảo đơn bào, bào tử mốc Quy trình cho phép xác định nhanh chóng số lượng vi sinh vật Không phân biệt được tế bào sống và chết Không phân biệt được các tế bào vi sinh vật và hạt vật thể Hạn chế đối với huyền phù có mật độ thấp
Buồng đếm vi sinh vật
Đếm trực tiếp bằng buồng đếm Goriep Pha loãng mẫu cần đếm sao cho trong mỗi ô nhỏ của buồng đếm có khoảng 5 10 tế bào
Cách đếm tế bào trong buồng đếm
Qui trình xác định số lượng tế bào vsv trực tiếp bằng buồng đềm hồng cầu Quy trình: Pha loãng mẫu (510 tế bào/ô nhỏ) Nạp mẫu vào buồng đếm Đếm số lượng tế bào hiện diện trong 5 ô lớn Tính mật độ: Mật độ tế bào: N/ml = 0,25a x 106 tế bào/ml a: trung bình cộng số lượng tế bào trong 5 ô lớn
II. PHƯƠNG PHÁP ĐẾM KHUẨN LẠC Dùng để xác định các loại vi sinh vật sống trong mẫu Độ nhạy cao, định lượng vi sinh vật ở mật độ thấp Có thể định lượng các vi sinh vật kích thước nhỏ, di động
Chuẩn bị dịch pha loãng mẫu Không sử dụng nước cất và nước muối sinh lý để pha loãng mẫu thực phẩm
Các dung dịch pha loãng mẫu Saline peptone water (SPW) NaCl 8,5g Peptone 1,0g Nước cất vừa đủ 1 lít • Buffered peptone water (BPW) NaCl 5g Peptone 10g Nước cất vừa đủ 1 lít
Chuẩn bị các chuỗi pha loãng mẫu pha loãng mẫu lỏng theo dãy thập phân Đối với các mẫu rắn hay bán lỏng: 10g mẫu + 90ml dung dịch pha loãng => độ pha loãng 101 Các bước tiếp theo tương tự như pha loãng mẫu lỏng
Quy trình: Pha loãng mẫu (25250 khuẩn lạc/đĩa) Tạo hộp đổ Nuôi ủ, đếm số lượng
Cấy mẫu vào môi trường Phương pháp cấy bề mặt Phương pháp đổ đĩa
Phương pháp đổ đĩa • Chuẩn bị đĩa petri vô trùng • Môi trường được chuẩn bị hấp khử trùng và được bảo quản mát ở 45oC trong bể điều nhiệt • Hút 1ml mẫu vào đĩa trống (chọn nồng độ thích hợp) • Đổ vào đĩa đã cấy 10 – 15ml môi trường, lắc đều • Để nguội môi trường (thạch đông đặc) • Đem ủ ở nhiệt độ thích hợp
Phương pháp đổ đĩa Ưu điểm Cấy được thể tích mẫu lớn (1ml) Xác định được các VSV cần dinh dưỡng tiếp xúc từ nhiều phía Cho phép đếm được mật độ VSV cao, khoảng 150300 khuẩn lạc Nhược điểm Không định lượng được những VSV quá nhạy nhiệt Không xác định được hình dạng khuẩn lạc nhất định Khó làm thuần một dòng VSV
Phương pháp cấy bề mặt • Môi trường phải được chuẩn bị trên đĩa trước 12 ngày để khô mặt • Phương pháp Cấy 0.1 – 0,3ml vào đĩa môi trường Trải đều trên mặt bằng que trang tam giác Để ở nhiệt độ phòng 1520 phút cho khô mặt Film
Phương pháp cấy bề mặt Ưu điểm Định lượng được các VSV nhạy nhiệt Có thể nhận dạng đựơc dạng khuẩn lạc đặc trưng Dễ dàng làm thuần chủng VSV mục tiêu Nhược điểm Chỉ cấy đựơc thể tích mẫu nhỏ Chỉ cho phép đếm được số lượng khuẩn lạc thấp