Bước đầu phân tích dịch tễ học vi khuẩn gây bệnh gram âm bằng kỹ thuật sinh học phân tử

Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011<br /> <br /> BƯỚC ĐẦU PHÂN TÍCH DỊCH TỄ HỌC<br /> VI KHUẨN GÂY BỆNH GRAM ÂM<br /> BẰNG KỸ THUẬT SINH HỌC PHÂN TỬ<br /> Nguyễn Trọng Hiệp*, Nguyễn Hoàng Thu Trang*, Bùi Tùng Hiệp**<br /> <br /> TÓM TẮT<br /> Mở đầu: Nghiên cứu gần đây tại Việt Nam cho thấy hiện tượng sinh enzym β-lactamase phổ rộng (ESBL)<br /> ngày càng phổ biến trên vi khuẩn đường ruột và đang lan ra những vi khuẩn Gram âm khác. Mặt khác, nhiễm<br /> trùng bệnh viện và tình trạng nhiễm chéo là cặp bài trùng luôn song hành với nhau. Tuy nhiên ở Việt Nam chưa<br /> có nhiều nghiên cứu tỉ lệ nhiễm chéo các vi khuẩn gây bệnh qua phân tích dịch tễ học phân tử, phương pháp<br /> nghiên cứu đã được áp dụng hữu hiệu ở các nước phát triển để kiểm sóat nguy cơ này.<br /> Mục tiêu: Bước đầu phân tích dịch tễ học phân tử vi khuẩn E. coli và Klebsiella pneumoniae ESBL trong số<br /> các vi khuẩn gây bệnh Gram âm để chứng minh tình trạng nhiễm chéo.<br /> Phương pháp: Vi khuẩn thu thập được từ bệnh phẩm nước tiểu, máu, đàm, dịch phế quản, … được phân<br /> lập trên các môi trường chuyên biệt và định danh bằng các phản ứng sinh hóa. Thử nghiệm bằng phương pháp<br /> đĩa giấy kháng sinh kết hợp hiệp lực để sàng lọc vi khuẩn ESBL. Các chủng vi khuẩn E. coli và K. pneumoniae<br /> sinh ESBL được tiến hành kỹ thuật ERIC-PCR với mồi ERIC để xác định tỉ lệ nhiễm chéo, gồm ERIC-2 (5'AAG TAA GTG ACT GGG GTG AGC G-3') và ERIC-1026 (5'-TAC ATT CGA GGA CCC CTA AGT G-3').<br /> Sản phẩm khuếch đại được điện di trên gel agarose và phân tích số lượng và kích thước các băng DNA thu được.<br /> Kết quả: 494 chủng vi khuẩn thu được năm 2009 từ 448 bệnh nhân tại bệnh viện Chợ Rẫy TP. HCM năm<br /> 2009, 351 chủng là vi khuẩn Gram âm là (71%). Tỉ lệ vi khuẩn có kiểu hình ESBL là 28,8% (101/351 chủng).<br /> Họ vi khuẩn đường ruột chiếm đến 81,1% các chủng ESBL (89/101 chủng), với đa số là E. coli và K.<br /> pneumoniae, tỉ lệ lần lượt là 36 chủng (40,4%) và 25 chủng (28,1%). Với kỹ thuật ERIC-PCR, các chủng E. coli<br /> và K. pneumoniae ESBL được xác định tỉ lệ nhiễm chéo cho thấy ở E. coli có tỉ lệ nhiễm chéo là 52,7% (19/36<br /> chủng) với 7 type phụ, trong đó có 1 type phụ gây nhiễm chéo ra 9 chủng. Ở K. pneumoniae, tỉ lệ nhiễm chéo là<br /> 48% (12/25 chủng), có 4 type phụ gây nhiễm chéo. Như vậy bước đầu khảo sát với 2 loài vi khuẩn E. coli và K.<br /> pneumoniae, tỉ lệ nhiễm chéo đã rất cao, xác định được là 50,8%.<br /> Kết luận: Trong nghiên cứu của chúng tôi, bước đầu khảo sát trên 2 lòai vi khuẩn E. coli và K. pneumoniae<br /> ESBL, đã cho thấy tỉ lệ nhiễm chéo là từ gấp rưỡi đến gần gấp đôi so với các nghiên cứu nước ngoài. Kết quả này<br /> thật sự nghiêm trọng với việc điều trị tại bệnh viện vì các vi khuẩn ESBL đều đa đề kháng với nhiều kháng sinh<br /> thông dụng.<br /> Từ khóa: Vi khuẩn gây bệnh Gram âm, Họ vi khuẩn đường ruột, enzym β-lactamase phổ rộng, PCR trình<br /> tự chung xen kẽ lặp của vi khuẩn đường ruột (ERIC-PCR), nhiễm chéo<br /> <br /> **Bệnh viện cấp cứu Trưng Vương, TP. HCM<br /> *Khoa Dược- ĐH Y Dược TP HCM, TP. HCM<br /> Tác giả liên hệ: TS. Nguyễn Trọng Hiệp<br /> ĐT: 0907429991<br /> Email: ntronghiep@yahoo.com<br /> <br /> 258<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Khoa<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> ABTRACT<br /> PRELIMINARY EPIDEMIOLOGICAL ANALYSIS<br /> OF PATHOGENIC GRAM-NEGATIVE ISOLATES BY MOLECULAR BIOLOGY TECHNIQUE<br /> Nguyen Trong Hiep, Nguyen Hoang Thu Trang, Bui Tung Hiep<br /> * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 15 - Supplement of No 1 - 2011: 258 - 264<br /> Background: In Vietnam, recent studies show the emergence of extended-spectrum ß-lactamases (ESBLs)<br /> producing organisms along with multiple resistant isolates pose a serious problem in the hospital setting, ESBLproducing bacteria are frequently in the Enterobacteriaceae family and spread other Gram-negative bacteria.<br /> Moreover, nosocomial infections and the cross-transmission are always being together. However, there was not<br /> studied about the cross-transmission rates among bacterial pathogens by using molecular epidemiological<br /> analysis in Vietnam. This method is very common in the developed countries in order to control the crosstransmission.<br /> Objectives: To analyse the molecular epidemiology of E. coli and Klebsiella pneumoniae ESBL among<br /> pathogenic Gram-negative isolates for the cross-transmission.<br /> Method: The bacterial strains were isolated from urine, blood, sputum, bronchial aspiration, abdominal<br /> liquid and cerebrospinal fluid. The double disk synergy test was performed to screen ESBL strains. E. coli<br /> and K. pneumoniae ESBL isolates were realized the ERIC-PCR with ERIC primers: ERIC-2 (5'-AAG TAA<br /> GTG ACT GGG GTG AGC G-3') and ERIC-1026 (5'-TAC ATT CGA GGA CCC CTA AGT G-3'). The<br /> amplified products were electrophoresed on agarose gel, the profiles were analyzed on the number and the size<br /> of DNA bands.<br /> Results: 494 clinical isolates obtained in 2009 from 448 patients in Cho Ray hospital of HCM city, 351<br /> strains were Gram-negative bacteria (71%). ESBL phenotypes occupied 28.8% (101/351 Gram-negative strains).<br /> ESBL isolates from the Enterobacteriaceae family were very high (89/101 strains), more predominant with 36 E.<br /> coli strains (40.4%) and 25 K. pneumoniae strains (28.1%). E. coli and K. pneumoniae ESBL isolates were<br /> performed the ERIC-PCR to determine the cross-transmission rate. The results demonstrated that the crosstransmission among E. coli was 52.7% (19 of 36 strains) with 7 sub-types in which 1 sub-type caused the crosstransmission to the other 9 strains. In K. pneumoniae, the cross-transmission was 48% (12 of 25 strains) with 4<br /> sub-types. Therefore, our preliminiary study on two species bacteria of E. coli and K. pneumoniae ESBL showed<br /> that the cross-transmissions were very high to at least 50.8%.<br /> Conclusion: In our study, the preliminary analysis identified that the cross-transmission rate between E.<br /> coli and K. pneumoniae ESBL were higher than from half to twofold of the foreign studies. It is really a serious<br /> problem in the hospital setting because all these strains producing ESBL were multi-resistant to many common<br /> antibiotics.<br /> Keywords: Gram-negative clinical isolates, Enterobacteriaceae family, extended-spectrum ß-lactamases<br /> (ESBLs), enterobacterial repetitive intergenic consensus-PCR (ERIC-PCR), cross-transmission<br /> Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas<br /> ĐẶT VẤN ĐỀ<br /> aeruginosa v…v…, có thể gây ra các bệnh nhiễm<br /> Hiện nay, Việt Nam vẫn là một trong những<br /> trùng nguy hiểm(5).<br /> nước có tỉ lệ nhiễm trùng cao trên thế giới. Đặc<br /> Mặt khác, trong môi trường bệnh viện,<br /> điểm khí hậu nhiệt đới là điều kiện thuận lợi cho<br /> nhiễm trùng bệnh viện và nhiễm trùng chéo<br /> vi khuẩn gây bệnh, trong đó các vi khuẩn Gram<br /> (cross-transmission) là cặp bài trùng luôn song<br /> âm chiếm tỉ lệ khá cao, có thể đến 84,5%. Những<br /> hành với nhau(12). Theo số liệu của Tổ chức y tế<br /> vi khuẩn tác nhân quan trọng có thể kể đến:<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Khoa<br /> <br /> 259<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011<br /> <br /> thế giới, trong các loại nhiễm trùng bệnh viện thì<br /> viêm phổi chiếm tỉ lệ cao nhất (62,3%), kế đến tại<br /> vị trí đặt catheter mạch máu (18%), nhiễm khuẩn<br /> huyết (16%), tiếp theo là các thủ thuật can thiệp<br /> chẩn đoán và điều trị như bộc lộ tĩnh mạch, đặt<br /> thông dạ dày, đặt nội khí quản thở máy, vi<br /> khuẩn tác nhân thường đồng thời là vi khuẩn<br /> tiết enzym β-lactamase phổ rộng (ESBL)(5). Đây<br /> là một trong những quan tâm lớn nhất của các<br /> bác sĩ thực hành lâm sàng, những nhà quản lí và<br /> điều dưỡng chăm sóc bệnh nhân. Nhiều nghiên<br /> cứu cho thấy nhiễm trùng chéo thường gặp nhất<br /> trong Khoa hồi sức cấp cứu, tần suất có thể đến<br /> 10,7% /1000 bệnh nhân-ngày do nhiều nguyên<br /> nhân…(212).<br /> Để phân tích tình trạng nhiễm chéo, phải áp<br /> dụng các kỹ thuật sinh học phân tử (SHPT). Đây<br /> là phương pháp duy nhất phân biệt hai cá thể<br /> cùng lòai dựa trên khác biệt các dấu ấn di truyền<br /> trong DNA, đã được áp dụng hữu hiệu ở các<br /> nước phát triển để giới hạn nguy cơ trên. Trong<br /> các kỹ thuật dùng phân tích dịch tễ học phân tử<br /> vi khuẩn gây bệnh thì kỹ thuật RAPD-PCR (PCR<br /> khuếch đại đa hình các đoạn DNA được khuếch<br /> đại<br /> ngẫu<br /> nhiênRandom<br /> Amplified<br /> Polymorphic DNA); nếu dùng mồi trình tự<br /> chung xen kẽ lặp của vi khuẩn đường ruột<br /> (ERIC) thì thường gọi là ERIC-PCR<br /> (enterobacterial repetitive intergenic consensusPCR), thường được sử dụng vì không cần nhiều<br /> trang thiết bị đắt tiền, năng lực phân tích các cá<br /> thể trong cùng loài khá tốt. Điện di phân tích<br /> trên gel agarose sẽ cho một phổ (profile) các sản<br /> phẩm khuếch đại, thường đặc trưng riêng biệt<br /> cho một chủng cụ thể(6,9,10). Ở Việt Nam chưa có<br /> nhiều nghiên cứu phân tích dịch tễ học tình<br /> trạng nhiễm chéo các vi khuẩn gây bệnh bằng<br /> kỹ thuật SHPT. Nghiên cứu nhằm phân tích<br /> dịch tễ học, bước đầu xác định tỉ lệ nhiễm chéo<br /> trên 2 vi khuẩn ESBL gây bệnh phổ biến là E. coli<br /> và Klebsiella pneumoniae tại bệnh viện bằng kỹ<br /> thuật ERIC-PCR.<br /> <br /> 260<br /> <br /> VẬTLIỆU - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU<br /> Chủng vi khuẩn<br /> Nghiên cứu được thực hiện trên 351 chủng vi<br /> khuẩn Gram âm được phân lập từ mẫu nước tiểu,<br /> máu, đàm, dịch phế quản, dịch não tuỷ, dịch<br /> báng tại bệnh viện Chợ Rẫy Tp.HCM từ tháng 3<br /> đến tháng 5 năm 2009. Tiêu chuẩn chọn bệnh<br /> nhân: bệnh nhân được yêu cầu tiến hành xét<br /> nghiệm vi sinh, chưa sử dụng kháng sinh trong<br /> vòng 1 tuần trước khi lấy mẫu bệnh phẩm.<br /> <br /> Phân lập, định danh vi khuẩn<br /> Theo quy trình trong “Sổ tay các quy trình<br /> Vi sinh lâm sàng” của bệnh viện Chợ Rẫy nhằm<br /> thu được các chủng thuần khiết. Các mẫu bệnh<br /> phẩm được hoạt hóa, phân lập trên môi trường<br /> thích hợp và định danh bằng các phản ứng sinh<br /> hóa. Thông tin dịch tễ học của bệnh nhân như<br /> tuổi tác, giới tính, chẩn đóan nhiễm trùng được<br /> ghi nhận.<br /> <br /> Kiểm tra tính đề kháng kháng sinh<br /> Thực hiện kháng sinh đồ với các chủng vi<br /> khuẩn đã được thuần khiết theo hướng dẫn của<br /> NCCLS (National Committee for Clinical<br /> Laboratory Standards), E. coli ATCC 25922 được<br /> dùng làm mẫu chứng kiểm tra chất lượng(8). Ghi<br /> nhận lại tỉ lệ đề kháng với 6 kháng sinh quan<br /> trọng nhất ở những vi khuẩn Gram âm:<br /> augmentin (amoxicillin+ clavulanic acid),<br /> ceftazidime, cetriaxone, imipenem, amikacin, và<br /> ciprofloxacin. Vi khuẩn được xác định là đa đề<br /> kháng khi đề kháng từ 3 kháng sinh trở lên(16).<br /> <br /> Xác định kiểu hình ESBL<br /> Bằng phương pháp đĩa đôi: tìm tác dụng<br /> hiệp lực trên thạch Mueller-Hinton giữa đĩa<br /> chứa 20 μg amoxicillin/10 μg clavulanic acid đặt<br /> chính giữa và các đĩa cephalosporin thế hệ 3 đặt<br /> xung quanh (đặt cách 2-3 cm tính từ trung tâm<br /> đĩa), gồm ceftazidime (30 μg), cefotaxim (30 μg).<br /> Nếu có sự tăng rộng vùng ức chế nơi giao thoa<br /> của 2 kháng sinh, một số tài liệu gọi là hình ảnh<br /> “nút chai champagne”, có thể kết luận chủng có<br /> tiết enzym ESBL(8).<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Khoa<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011<br /> Kỹ thuật sinh học phân tử<br /> Chiết DNA vi khuẩn<br /> Hoạt hóa các chủng có kiểu hình ESBL trên<br /> môi trường Trypticase soy broth, sau đó thực<br /> hiện chiết DNA bộ gen vi khuẩn bằng bộ kit<br /> (Wisard SV genomic DNA purification systemCat A 2361-Promega).<br /> Thực hiện phản ứng ERIC-PCR<br /> Sử dụng 2 cặp mồi ERIC-2 (5'-AAG TAA<br /> GTG ACT GGG GTG AGC G-3') và ERIC-1026<br /> (5'-TAC ATT CGA GGA CCC CTA AGT G-3').<br /> Phản ứng được thực hiện trên máy luân nhiệt<br /> (ATC401 model; Apollo-CLP) với 1 chu kỳ biến<br /> tính trong 3 phút ở 940C; 40 chu kỳ (1 phút ở<br /> 960C, 1 phút ở 520C, 1 phút ở 720C); 10 phút ở<br /> 720C. Sản phẩm khuếch đại được điện di trong<br /> điện trường 100V trong 45 phút trên gel agarose<br /> 1,5% có chứa ethidium bromide. Sản phẩm được<br /> phát hiện dưới bước sóng 254 nm bằng hệ thống<br /> chụp gel (Dolphin-Doc). Kỹ thuật ERIC-PCR<br /> phân tích tình trạng nhiễm chéo được thực hiện<br /> trên 36 chủng E. coli và 25 chủng K. pneumoniae<br /> ESBL trong tổng số 101 chủng ESBL phát hiện<br /> được bằng phương pháp đĩa đôi.<br /> Phân tích kết quả<br /> Tổng số các vạch DNA về số lượng và<br /> kích thước tạo nên phổ riêng biệt cho từng<br /> chủng. Giữa các chủng vi khuẩn trong cùng<br /> loài được xem là có liên quan mật thiết về<br /> mặt di truyền với nhau khi có không quá 2<br /> vạch khác biệt, nói cách khác là đều từ 1<br /> chủng vi khuẩn đã nhiễm chéo tạo ra(10). Các<br /> vi khuẩn E. coli và K. pneumoniae ESBL cũng<br /> được phân tích các type phụ (sub-type) để từ<br /> đó cho biết 1 chủng vi khuẩn có thể lây nhiễm<br /> chéo ra bao nhiêu, số trường hợp nhiễm chéo<br /> sẽ bằng n-1 (n là số chủng vi khuẩn trong<br /> cùng loài có cùng 1 type phụ).<br /> <br /> KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN<br /> Từ tháng 3 đến tháng 5 năm 2009, chúng tôi<br /> đã phân lập và định danh 494 chủng vi khuẩn từ<br /> 448 mẫu bệnh phẩm tại bệnh viện Chợ Rẫy TP.<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Khoa<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> HCM. 403 bệnh phẩm có 1 chủng, 44 bệnh phẩm<br /> có 2 chủng và 1 bệnh phẩm có 3 chủng.<br /> Nghiên cứu của chúng tôi cho thấy tỉ lệ vi<br /> khuẩn Gram âm ở bệnh viện Chợ Rẫy chiếm<br /> đến 71% (351/494 chủng) trường hợp nhiễm<br /> trùng. Một nghiên cứu gần đây ở bệnh viện Nhi<br /> Đồng II cũng cho thấy một tỷ suất mắc của các<br /> vi khuẩn Gram âm lên đến 81,8%. Nghiên cứu<br /> khác cũng ở bệnh viện Chợ Rẫy (2003), đã kết<br /> luận vi khuẩn Gram âm là nguyên nhân gây<br /> nhiễm trùng thường gặp nhất.<br /> Tỉ lệ vi khuẩn ESBL trong số vi khuẩn<br /> Gram âm được xác định thông qua thử<br /> nghiệm đĩa đôi là 28,8% (101/351 chủng), vi<br /> khuẩn họ Enterobacteriaceae chiếm đến 81,1%<br /> (89/101 chủng) mà E. coli và K. pneumoniae là<br /> đa số, tỉ lệ lần lượt là 40,4% (36/89 chủng) và<br /> 28,1% (25/89 chủng). Ngoài ra, Acinetobacter<br /> baumanii (vi khuẩn không thuộc họ<br /> Enterobacteriaceae) chiếm 10,9%. Nghiên cứu ở<br /> bệnh viện Nhiệt đới (2002-2004) thì tỉ lệ vi<br /> khuẩn ESBL là 33,14%, nhiều nghiên cứu khác<br /> cho thấy tỉ lệ vi khuẩn ESBL thay đổi tuỳ theo<br /> khu vực, bệnh viện hoặc quốc gia nhưng tại<br /> Việt nam thì thường là chiếm tỉ lệ cao(1,3,6).<br /> Kháng sinh đồ đối với 89 chủng ESBL thuộc<br /> họ Enterobacteriaceae, kết quả cho thấy mức độ đề<br /> kháng đối với các loại kháng sinh cephalosporin<br /> thế hệ thứ 3 là rất cao (ceftazidime 67,4%,<br /> ceftriaxon 89,9%). Sự đề kháng với<br /> fluoroquinolone (ciprofloxacine) cũng đáng báo<br /> động so với các kháng sinh khác (83,1%). Các<br /> chủng trên vẫn còn nhạy cảm tương đối với<br /> amikacin, tỉ lệ 54,8%. Imipenem và<br /> amoxicillin/clavulanat vẫn còn tác dụng rất tốt<br /> nhưng một vài chủng cũng đã xuất hiện kiểu<br /> hình trung gian (Bảng 1). Đa số các chủng ESBL<br /> đa đề kháng 6 kháng sinh, 7 kháng sinh và 8<br /> kháng sinh cùng một lúc với một tỷ lệ cao lần<br /> lượt là 32,6%, 29,2% và 21,3%, số chủng đề<br /> kháng 6 loại kháng sinh là nhiều nhất. Mặt khác,<br /> không có chủng ESBL nào đề kháng chỉ 1 hay 2<br /> kháng sinh. Có thể nói tình hình đề kháng<br /> <br /> 261<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011<br /> <br /> kháng sinh của vi khuẩn họ Enterobacteriaceae tiết<br /> enzym ESBL rất nghiêm trọng.<br /> Bảng 1. Tính đề kháng kháng sinh của họ vi khuẩn<br /> đường ruột Enterobacteriaceae sinh ESBL<br /> Kháng sinh<br /> Augmentin<br /> Ceftazidime<br /> Ceftriaxone<br /> Imipenem<br /> Amikacin<br /> Ciprofloxacine<br /> <br /> Đề kháng (%)<br /> 0<br /> 67,4<br /> 89,9<br /> 0<br /> 36<br /> 83,1<br /> <br /> Chúng tôi thực hiện phản ứng ERIC-PCR<br /> cho 36 chủng E. coli, 25 chủng K. pneumonia và<br /> phân tích kết quả điện di. Đối với vi khuẩn E.<br /> coli, chúng tôi nhận thấy có 7 type phụ gây ra<br /> nhiễm chéo. Trong đó có 1 type phụ A gây<br /> nhiễm chéo ở 9 chủng vi khuẩn, type phụ B<br /> nhiễm chéo ở 6 chủng vi khuẩn, type phụ C gây<br /> <br /> nhiễm chéo ở 3 chủng. Type phụ D, E, F, G đều<br /> gây nhiễm chéo ở 2 chủng vi khuẩn (Hình 1). Do<br /> vậy tỉ lệ nhiễm chéo ở vi khuẩn E. coli là 52,7%<br /> (19/36 chủng)<br /> Ở K. pneumoniae, các chủng cho những băng<br /> khuếch đại kích thước từ 300 bp đến khoảng<br /> 2kb. Chúng tôi nhận thấy có 4 type phụ gây<br /> nhiễm chéo. Type phụ I gây nhiễm chéo cho 6<br /> chủng vi khuẩn, type phụ II gây nhiễm chéo cho<br /> 5 chủng vi khuẩn, type phụ III gây nhiễm chéo<br /> cho 3 chủng vi khuẩn, type phụ IV gây nhiễm<br /> chéo cho 2 chủng vi khuẩn. Như vậy tỉ lệ nhiễm<br /> chéo của K. pneumoniae là 48% (12/25 chủng).<br /> Như vậy nghiên cứu bước đầu với 2 loài vi<br /> khuẩn E. coli và K. pneumoniae, tỉ lệ nhiễm chéo<br /> đã rất cao, xác định được là 50,8% (31/61 chủng).<br /> <br /> M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 N M 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 N<br /> DAABACBBCAAEDFBAEACBGGAFAB<br /> <br /> 1 kb<br /> <br /> 1kb<br /> <br /> 700 bp<br /> 500 bp<br /> <br /> Hình 1. Sản phẩm phản ứng ERIC-PCR của E. coli M: Marker 1Kb (Bio-Labs); N: Marker 100 bp (Novagen). Có 7<br /> type phụ gây ra nhiễm chéo từ 36 chủng E. coli khảo sát: A (giếng 2,3,6,11,12,19,22,31,35), B (giếng 5,8,9,18,25,36),C<br /> (giếng 7,10,24), D (giếng 1,15), E (giếng 13,21), F (giếng16,33), G (giếng 29,30). Các chủng còn lại không có sự nhiễm chéo<br /> (giếng 4,14,17,20,23,26,27,28,32,34)<br /> M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 N M 17 18 19 20 21 22 23 24 25 N<br /> I I I I II I I IV IV II III II II III III II<br /> <br /> 1kb<br /> 500 bp<br /> <br /> 1 kb<br /> 700 bp<br /> <br /> Hình 2. Sản phẩm phản ứng ERIC-PCR của Klebsiella. Pneumoniae M: thang 1Kb(Bio Lads); M1: thang 100 bp<br /> (Novagen); có 4 type phụ gây ra nhiễm chéo từ 25 chủng K. pneumoniae: I (lane 1,2,3,6,9,10), II (7,15,20,21,25), III<br /> (18,23,24), IV (12,14). Các chủng còn lại không có sự nhiễm chéo (lane 4,5,8,11,13,16,17,19,22)<br /> <br /> 262<br /> <br /> Chuyên Đề Dược Khoa<br /> <br />