Cấy tủy xương để đánh giá số lượng tế bào gốc trung mô thông qua các đơn vị tạo khúm nguyên bào sợi (CFU-FS)

Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 13 * Phụ bản của Số 1 * 2009<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> CẤY TỦY XƯƠNG ĐỂ ĐÁNH GIÁ SỐ LƯỢNG TẾ BÀO GỐC TRUNG MÔ<br /> THÔNG QUA CÁC ĐƠN VỊ TẠO KHÚM NGUYÊN BÀO SỢI (CFU-FS)<br /> Trần Công Toại*, Cao Thỉ**<br /> <br /> TÓM TẮT<br /> Đặt vấn đề: Ở Việt Nam chưa thấy có một nghiên cứu nào xác định đặc điểm của tủy xương liên quan<br /> đến khả năng tạo xương của tủy xương. Khả năng tạo xương của tủy xương là nhờ các tế bào gốc trung mô,<br /> được đánh giá thông qua số lượng CFU-Fs.Vì vậy chúng tôi thực hiện nghiên cứu nuôi cấy tế bào tủy và<br /> đếm số lượng CFU-Fs của tủy xương người Việt Nam.<br /> Phương pháp Khoảng 2.0 ml tủy xương được lấy vô trùng pha với 0.1 ml heparin (5000IU/ml). Tủy<br /> được cấy vào môi trường IMDM, 15% FBS, kháng sinh. Mẫu được nhuộm Giemsa để quan sát và đếm<br /> khúm tế bào CFU-Fs sau 7 ngày nuôi cấy. Có 20 mẩu tủy được cấy và đếm CFU-Fs.<br /> Kết quả: Nồng độ tế bào đơn nhân sau khi phân lập: 43,9x106/ml, Số CFU-Fs trung bình đếm được sau<br /> 7 ngày nuôi: 79,95.<br /> <br /> ABSTRACT<br /> CULTURE BONE MARROW TO EVALUATE MESENCHYMAL STEM CELLS BY MEANS<br /> OF COUNT OF CFU-FS.<br /> Tran Cong Toai, Cao Thi * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 12 - Supplement of No 4 - 2008: 488 – 490<br /> Introduction: There aren’t studies about osteogenic potential of bone marrow in Viet Nam. Mesenchymal<br /> stem cells (MSCs) are responsible for osteogenic capacity of bone marrow. So, to assess quantity of Vietnamese<br /> MSCs, we culture bone marrow and count fibroblast colony forming units (CFU-Fs).<br /> Material and results: Average 2ml of non-infected bone marrow is mixed with 500IU heparin and<br /> cultured in medium IMDM, 15% FBS and antibiotic. Giemsa stain is used and CFU-Fs is counted after 7<br /> days. Twenty individuals are enrolled in this study. After isolated, average concentration of nucleated cells is<br /> 43.9x106/ml. After 7 days of culture, average of CFU-Fs reaches 79.95.<br /> số lượng của tế bào gốc trung mô trong tủy,<br /> ĐẶT VẤNĐỀ<br /> cần phải cấy tủy và đếm số lượng các đơn vị<br /> Khả năng tạo xương của tủy xương đã<br /> tạo khúm nguyên bào sợi (CFU-Fs) sau khi<br /> được Goujon nêu lên từ năm 1869[2]. Các thực<br /> nuôi cấy. Và do đó số lượng CFU-Fs đặc trưng<br /> nghiệm tế bào – sinh hóa, thực nghiệm ứng<br /> cho khả năng tạo xương của tủy. Ở Việt Nam,<br /> dụng của tủy xương trên động vật thí nghiệm,<br /> chưa thấy một báo cáo nào nghiên cứu đặc<br /> cũng như một số các nghiên cứu trên tủy<br /> điểm của tủy xương liên quan đến tính chất<br /> người cho thấy tủy xương có tính chất tạo<br /> tạo xương của tủy, cụ thể là đếm số lượng<br /> xương. Tủy xương bao gồm nhiều loại tế bào,<br /> CFU-Fs. Nhằm rút ra đặc điểm tủy xương liên<br /> trong đó có tế bào gốc dòng tạo máu và tế bào<br /> quan đến tính chất tạo xương ứng dụng trong<br /> gốc trung mô. Các tế bào gốc trung mô là các<br /> ngành chấn thương chỉnh hình, so sánh với<br /> tế bào trong thành phần mô đệm của tủy<br /> một số y văn thế giới, chúng tôi tiến hành<br /> xương. Các tế bào này biệt hóa thành nhiều<br /> nghiên cứu nuôi cấy tủy xương và đếm số<br /> kiểu hình tế bào khác nhau, trong đó có các<br /> lượng CFU-Fs.<br /> tiền tế bào tạo xương. Nhờ các tế bào này mà<br /> tủy xương có tính chất tạo xương. Để đánh giá<br /> * Đại học Y khoa Phạm Ngọc Thạch ** Đại Học Y Dược TP. HCM<br /> <br /> Chuyên Đề Nội Khoa<br /> <br /> 487<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 13 * Phụ bản của Số 1 * 2009<br /> PHƯƠNGPHÁP NGHIÊNCỨU<br /> Có 20 bệnh nhân tham gia vào nghiên cứu.<br /> Các bệnh nhân này là các bệnh nhân chấn<br /> thương cơ quan vận động có phẫu thuật và<br /> được chọn ngẫu nhiên trong số các bệnh nhân<br /> của Khoa Chấn Thương Chỉnh Hình bệnh viện<br /> Chợ Rẫy. Trong lúc bệnh nhân đang được mổ,<br /> 2ml tủy xương được lấy từ mào chậu trước.<br /> Dùng kim chọc tủy chọc vào mào chậu hút ra 1<br /> ml tủy, thay đổi vị trí đầu kim đến nơi khác<br /> trong mào chậu và hút thêm 1ml tủy. Cả 2ml<br /> tủy được cho vào ống nghiệm vô trùng có pha<br /> sẵn 500IU heparin để chống đông. Sau đó tủy<br /> được đưa về phòng thí nghiệm và xử lý trong<br /> vòng 4 giờ sau khi lấy. Tại đây, tủy được ly<br /> tâm tách và đếm tế bào có nhân. Thành phần<br /> tế bào được cấy vào môi trường IMDM, 15%<br /> FBS, có pha kháng sinh để chống nhiễm<br /> khuẩn. Sau 7 ngày, khi các khúm tế bào mọc<br /> thấy rõ, mẩu cấy sẽ được nhuộm giemsa để<br /> quan sát và đếm khúm tế bào. Mỗi khúm tế<br /> bào được xem là một CFU-F khi khúm phát<br /> triển được nhiều hơn 50 tế bào.<br /> <br /> KẾT QUẢ VÀ BÀNLUẬN<br /> Kết quả phân lập tế bào và đếm CFU-Fs<br /> được cho trong bảng 1<br /> <br /> Kết quả phân lập tế bào<br /> Nồng độ tế bào có nhân biến thiên rất lớn<br /> từ 10x106 đến 160x106 tế bào trên mỗi ml tủy.<br /> Nồng độ tế bào trung bình trong mỗi ml tủy<br /> bằng 43,9X106 với độ lệch chuẩn là 41,2X106.<br /> Theo nghiên cứu của Major và cộng sự thì<br /> trung bình mỗi ml tủy hút ra từ mào chậu<br /> người khỏe mạnh có chứa 46 ± 32,5x106 tế bào<br /> có nhân[3]. So sánh hai giá trị trung bình cho<br /> thấy kết quả của chúng tôi không khác biệt với<br /> kết quả của Major (p