CNSHDV: Nuôi cấy tế bào Động vật

Chia sẻ: Trung Hiếu | Ngày: | Loại File: PPT | Số trang:42

Thêm vào BST

Báo xấu

475
lượt xem 77
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

• Có 2 kiểu TB: - TB phụ thuộc vào chỗ neo để bám dính: Bám vào đáy bình nuôi cấy và tạo thành lớp đơn bao phủ toàn bộ bề mặt vật thể nuôi cấy (confluence) - TB không phụ thuộc vào chỗ neo (là những TB kết hợp với dịch lỏng trong cơ thể, ví dụ: TB máu)

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: CNSHDV: Nuôi cấy tế bào Động vật

Chương 4. Nuôi cấy tế bào động vật
Kỹ thuật nuôi cấy tế bào động vật • Dụng cụ nuôi cấy: - Bình flask đơn giản - Máy lên men phức tạp có màn hình điều khiển
• Điều kiện nuôi cấy: • Môi trường nuôi cấy: - Khí oxy - Glucose - Khí CO2 - Nước - Amino acid - Các muối
• Huyết thanh ĐV: Thường dùng là FBS - Cần thiết cho sự phát triển của TB ĐV - Bổ sung 5 - 10% vào môi trường nuôi cấy TB
• Chất chỉ thị dùng bổ sung vào môi trường nuôi cấy TB ĐV: phenol red - Các chất thải từ TB làm thay đổi pH môi trường - Môi trường thay đổi từ đỏ sang vàng
• Kiểm soát nhiệt độ và pH: - 37.0 OC - pH 7.5 • Phương pháp đo sự phát triển của TB ĐV: - Đếm TB bằng buồng đếm hồng cầu - Đo mật độ quang bằng máy quang phổ
• Khử trùng bằng: - Bổ sung kháng sinh vào môi trường nuôi cấy - Lọc vô trùng - Hấp khử trùng dụng cụ
• Có 2 kiểu TB: - TB phụ thuộc vào chỗ neo để bám dính: Bám vào đáy bình nuôi cấy và tạo thành lớp đơn bao phủ toàn bộ bề mặt vật thể nuôi cấy (confluence) - TB không phụ thuộc vào chỗ neo (là những TB kết hợp với dịch lỏng trong cơ thể, ví dụ: TB máu)
• Confluence tối ưu để chuyển TB sang đĩa mới là 70-80%
• Có 2 dạng TB ĐV được nuôi cấy: - TB nuôi cấy sơ cấp: tách ra từ mô mới, vòng đời nuôi cấy bị giới hạn, được xử lý bằng trypsin để tách thành những TB đơn như TB biểu bì, nguyên bào sợi - Dòng TB liên tục: được biến nạp làm mất đi tính nhạy đối với các nhân tố kiểm soát sự phát triển, tạo ra những dòng TB bất tử, được tạo hình lại; dễ nuôi cấy hơn TB sơ cấp
Các điều kiện nuôi cấy TB ĐV • Số thế hệ TB: số lần TB được tách chuyển (“split”) từ đĩa và nuôi cấy sang đĩa khác
• Đệm phosphate không có Ca2+ Mg2+ (PBS) được dùng để rửa và loại bỏ huyết thanh trong môi trường tránh ức chế chức năng của Trypsin- EDTA. - Calcium cũng ức chế chức năng của Trypsin-EDTA. - Phải làm ấm trước khi sử dụng để TB không bị sốc bởi dung dịch lạnh
• Enzym dùng để tách TB khỏi đĩa nuôi cấy là trypsin: - Trypsin cắt nối peptid (LYS hoặc ARG) trong fibronectin của chất nền ngoại bào. - EDTA nối với ion calcium trong môi trường - Trypsin sẽ tự phân hủy và mất hoạt tính nếu trong bể nước hơn 20 phút. - Trypsin hóa TB quá lâu sẽ làm giảm khả năng sống của TB
• Chất tẩy: dùng để loại bỏ TB còn lại trong đĩa hoặc ống nuôi cấy • Bể nước: dùng để làm ấm môi trường, PBS, ...