ĐỀ TÀI "XÁC ĐỊNH OCHRATOXIN A TRONG NGŨ CỐC BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO"

Chia sẻ: NGUYEN THI QUYEN | Ngày: | Loại File: PPT | Số trang:24

Thêm vào BST

Báo xấu

358
lượt xem 89
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Ochratoxin là độc tố vi nấm, được tạo ra từ một số loài nấm thuộc giống Aspergillus ochraceus và Penicillium viridicatum. Độc tố nấm mốc thuộc nhóm này gọi là Ochratoxin

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: ĐỀ TÀI "XÁC ĐỊNH OCHRATOXIN A TRONG NGŨ CỐC BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO"

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP TP.HCM TR KHOA CÔNG NGHỆ HOÁ HỌC TIÊU LUÂN MÔN PHÂN TÍCH THỰC PHẨM ̉ ̣ Đề tài: XAC ĐINH OCHRATOXIN A TRONG NGŨ ́ ̣ CÔC BẰNG PHƯƠNG PHAP SĂC KÝ LONG ́ ́ ́ ̉ ̣ HIÊU NĂNG CAO GVHD: Ths Nguyên Đức Vượng ̃ GVHD: SVTH : Võ Thanh Danh Huynh Thị Thu Hà ̀ Huynh Nguyên Ngoc Tường Vy ̃ ̣ Nguyên Thanh Phố Hồ Chí Minh thang 5 - 2011 ̀ ́
NÔI DUNG BAO CAO ̣ ́ ́ NÔI TỔNG QUAN VỀ OCHRATOXIN. ́ ̣ XAC ĐINH OCHRATOXIN A.
TỔNG QUAN VỀ OCHRATOXIN • Ochratoxin là độc tố vi nấm, được tạo ra từ một số loài nấm thuộc giống Aspergillus ochraceus và Penicillium viridicatum. Độc tố nấm mốc thuộc nhóm này gọi là Ochratoxin • Trong số các loại ochratoxin, ochratoxin A (OTA) có tính độc cao nhất. Ochratoxin A có mặt trong khắp các loại nông sản thực phẩm: ngũ cốc, thảo dược, bia, cà phê...
TỔNG QUAN VỀ OCHRATOXIN A • Ochratoxin A gây độc đến gan, thận và có khả năng gây ung thư cho con người. Ochratoxin A đã thể hiện được yếu tố gây đột biến. Nấm thuộc giống Aspergillus ochraceus
TỔNG QUAN VỀ OCHRATOXIN A Tính chất hóa lý của Ochratoxin A - Trọng lượng phân tử: 403.8 - Điểm nóng chảy: 169oC - Phổ hấp thụ UV: 2 đỉnh; 216 – 333 nm - Công thức phân tử: C20H18ClNO6 - Là tinh thể không màu, bền với nhiệt, tan trong dung môi hữu cơ phân cực như: chloroform, methanol, ethanol ít tan trong nước và tan trong pha đệm carbonat loãng. Dễ bị phân hủy bởi ánh sáng, trong môi trường kiềm hoạt chất tẩy rửa.
TỔNG QUAN VỀ OCHRATOXIN A Công thức phân tử Ochratoxin A
XAC ̣ ́ XAC ĐINH OCHRATOXIN A PHƯƠNG PHAP SĂC KÝ LONG HIÊU ́ ́ ̉ ̣ 1 ̀ ̣ ̀ NĂNG CAO (HPLC) LAM SACH BĂNG SILICAGEL TCVN 7595-1:2007 PHƯƠNG PHAP SĂC KÝ LONG HIÊU ́ ́ ̉ ̣ 2 ̀ ̣ ̀ NĂNG CAO (HPLC) LAM SACH BĂNG BICABONAT TCVN 7595-2:2007
PHƯƠNG PHAP HPLC LAM SACH ́ ̀ ̣ PH ̀ BĂNG SILICAGEL ̣ ́ ̣ Pham vi ap dung. ́ Nguyên tăc. Điều kiện xác định phân tich. ́ ̀ ́ Quy trinh phân tich. ́ ́ Tinh toan.
̣ ́ ̣ Pham vi ap dung Pham • Tiêu chuân nay qui đinh phương phap xac đinh ̉ ̀ ̣ ́ ́ ̣ Tiêu ochratoxin A với cac ham lượng lớn hơn 0.4µg/kg trong ́ ̀ µg/kg cac mâu ngũ côc, quả khô, cac hat có dâu, đâu đô, cà phê cac ̃ ́ ́ ́ ̣ ̀ ̣ ̃ ̣ nguyên liêu… • Phương pháp này thử nghiệm trên bột mì có chứa hàm Ph lượng ochratoxin A từ 0.4µg/kg đến 1.2µg/kg
Nguyên ́ Nguyên tăc Sau khi đã axit hoa băng axit HCl và bổ sung ́ ̀ MgCl2 dung toluene để chiêt ochratoxin A (OTA). ̀ ́ dung ̀ ̣ ̣ ́ ̣ ́ ̣ Lam sach dich chiêt trên côt silicagel và xac đinh ̀ ́ ̉ ̣ ̣ OTA băng săc ký long hiêu năng cao trên côt pha đao, nhân dang và sửa đôi bằng detectơ huynh ̉ ̣ ̣ ̉ ̀ quang.
Điều kiện vận hành HPLC Đi • Pha động: acetonitril (HPLC) : Nước : acid acetic băng = 49:49:2 (thay đổi tỉ lệ nếu cần). • Tốc độ dòng: 1ml/phút • Cột pha tích pha đảo: 250mm x 4.6mm x C18 (5µm). • Detector : huỳnh quang 420nm • V bơm: 20µl
Điều kiện đường chuẩn Đi • Dung dịch chuẩn gốc A: cân 20mg vào BĐM 200ml thêm 25 ml dd hỗn hợp (toluen : acid acetic acetic băng = 99 :1 (V+V)), hòa tan mẫu, sau đó thêm hỗn hợp trên tới vạch, pha loãng thích hợp để thu được dung dịch 20µg/ml đến 30 µg/ml (dd1) • Dung dịch làm việc: pha loãng dd1 với dung môi trên để được nồng độ 4µg/ml. Sau đó lấy 5,10,25,50,100µl cho vào lọ nhỏ, cô khô dưới dòng nitơ sau đó thêm pha động để có nồng độ achratoxin cuối cùng 0.5;1;2.5;5;10 ng/25µl.
Quy ̀ ́ Quy trinh phân tich ống ly tâm 50ml dd ̃ 20g Mâu Ly tâm 250ml (V2) (m0) + 30 ml HCl 2 mol/L + 50 MgCl2 0.4 mol/L ̣ ́ Côt chiêt ́ ̀ Khuây đêu ́ pha răn + 100 ml toluen (V1) ́ Hut 1 ml (V3) HPLC Kết quả Bộ loc mang ̣ ̀ V bơm = 20µl (V4)
Tinh ́ ́ Tinh toan ́ ̀ WOTA : tinh băng µg/ Kg : khôi lương mâu thử, tinh băng gam ́ ̃ ́ ̀ m0 mt : khôi lương OTA tương ứng với diện tích pic đọc ́ được từ đường chuẩn, tinh băng nanogam ́ ̀ : hệ số pha loãng F
PHƯƠNG PHAP HPLC LAM SACH ́ ̀ ̣ PH ̀ BĂNG BICACBONAT ̣ ́ ̣ Pham vi ap dung. ́ Nguyên Tăc. ̀ ́ Quy trinh phân tich. ́ ́ Tinh toan.
̣ ́ ̣ Pham vi ap dung Pham Tiêu chuân nay qui đinh phương phap xac đinh ̉ ̀ ̣ ́ ́ ̣ Tiêu • ochratoxin A với cac ham lượng lớn hơn 3µg/kg ́ ̀ µg/kg trong cac mâu ngũ côc như ngô hat, cam, lua mi… trong ́ ̃ ́ ̣ ́ ́ ̀ • Phương pháp này thử nghiệm trên mẫu ngũ cốc Ph chứa hàm lượng ochratoxin A từ 3.0µg/kg đến 16.3µg/kg
Nguyên ́ Nguyên tăc Ochratoxin A (OTA) được chiêt ra khoi ngũ côc ́ ̉ ́ ̀ ̃ băng axit phosphoric pha loang trong clorofoc và được tach phân đoan băng dung dich bicacbonat ́ ̣ ̀ ̣ loang. Rửa giai băng axit etyl axetat-metanol-axetat. ̃ ̉̀ OTA được tach băng HPLC pha đao, rôi nhân biêt ́ ̀ ̉ ̀ ̣ ́ và đinh lượng băng detectơ huynh quang. ̣ ̀ ̀
Điều kiện vận hành HPLC Đi • Pha động: axetonitril : Nước : acid acetic tỉ lệ 49:49:2 (thay đổi tỉ lệ nếu cần). • Tốc độ dòng: 1ml/phút • Cột pha tích pha đảo: 250mm x 4.6mm x C18 (5µm). • Detector : huỳnh quang 420nm • V bơm: 20µl
Điều kiện đường chuẩn Đi • Dung dịch chuẩn gốc A: cân 20mg vào BĐM 200ml thêm 25 ml dd hỗn hợp (toluen : acid acetic acetic băng = 99 :1 (V+V)), hòa tan mẫu, sau đó thêm hỗn hợp trên tới vạch, pha loãng thích hợp để thu được dung dịch 20µg/ml đến 30 µg/ml (dd1) • Dung dịch làm việc: pha loãng dd1 với dung môi trên để được nồng độ 4µg/ml. Sau đó lấy 5,10,25,50,100µl cho vào lọ nhỏ, cô khô dưới dòng nitơ sau đó thêm pha động để có nồng độ ochratoxin cuối cùng 0.5; 1; 2.5; 5; 10 ng/25µl.
Quy ̀ ́ Quy trinh phân tich Máy trộn tốc ̃ 50g Mâu Bộ loc sợi thuy tinh ̣ ̉ độ cao (m0) đã phủ 10g diatomit Nghiên ̀ + 250 ml clorofom ̣ ̣ 50 ml dich loc + 25 ml H3PO4 0.1mol/l + 10 ml Mẫu thô NaHCO3 30g/l Trộn 3 phut ́ +10 g diatomit ̃ ́ Phêu chiêt Kết ̣ ́ Côt chiêt 5 ml HPLC quả