Khảo sát đáp ứng kháng thể ở chuột nhiễm angiostrongylus cantonensis bằng kỹ thuật elisa

Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ bản của Số 1 * 2012<br /> <br /> KHẢO SÁT ĐÁP ỨNG KHÁNG THỂ Ở CHUỘT NHIỄM<br /> ANGIOSTRONGYLUS CANTONENSIS BẰNG KỸ THUẬT ELISA<br /> Lê Thị Xuân*, Trần Thị Huệ Vân*, Phạm Thị Lệ Hoa**, Lê Kim Ngọc Giao***, Trần Quang Bính****,<br /> Nguyễn Trần Chính**<br /> <br /> TÓM TẮT<br /> Đặt vấn đề: đáp ứng kháng thể ở chuột nhiễm Angiostrongylus cantonensis đã được khảo sát trong phòng<br /> thí nghiệm bằng nhiều kỹ thuật khác nhau, cho thấy đáp ứng kháng thể bị ảnh hưởng bởi kỹ thuật thử nghiệm<br /> và loại kháng nguyên sử dụng. Nghiên cứu này được tiến hành nhằm mô tả thời gian xuất hiện, diễn biến và<br /> đáp ứng kháng thể ở chuột nhiễm Angiostrongylus cantonensis với 2 liều khác nhau (50 ấu trùng/chuột và 100<br /> ấu trùng/chuột).<br /> Phương pháp: nghiên cứu mô tả thực nghiệm. Sau gây nhiễm cho 2 lô chuột, kháng thể được đo lường<br /> bằng thử nghiệm ELISA gián tiếp, đánh giá mỗi tuần sau nhiễm có so sánh với các giai đoạn phát triển của giun<br /> trong chuột.<br /> Kết quả: kháng thể tìm được trong máu chuột từ tuần thứ 4 sau nhiễm, tăng lên đến đỉnh vào tuần thứ 7<br /> và duy trì đến cuối kỳ thực nghiệm (20 tuần). Kháng thể tăng cao hơn ở lô chuột được gây nhiễm với liều ấu<br /> trùng cao hơn.<br /> Kết luận: có thể theo dõi diễn biến đáp ứng kháng thể trên chuột bị nhiễm Angiostrongylus cantonensis<br /> bằng kỹ thuật ELISA gián tiếp. Đáp ứng kháng thể tỷ lệ thuận với liều gây nhiễm và thời gian nhiễm.<br /> Từ khóa: đáp ứng miễn dịch, Angiostrongylus cantonensis, chuột cống, ELISA<br /> <br /> ABSTRACT<br /> ANTIBODY RESPONSES IN RATS INFECTED WITH ANGIOSTRONGYLUS CANTONENSIS BY<br /> ELISA TEST<br /> Tran Thi Hue Van, Le Thi Xuan, Pham Thi Le Hoa, Le Kim Ngoc Giao, Tran Quan Binh,<br /> Nguyen Tran Chinh * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 16 - Supplement of No 1 - 2012: 30 - 36<br /> Background: Antibody responses in Angiostrongylus cantonensis infected rats had been investigated in<br /> laboratory condition by different methods. From these studies the values of the immune responses were affected by<br /> methods and antigens used in the test. This study aimed at described the dynamic evolution of immune response<br /> to two different infected doses.<br /> Methods: Experimental study in laboratory condition. Two groups of rats were infected by two different<br /> doses (50 larvaes and 100 larvae per rat). Antibody was detected by ELISA every week and was compared with the<br /> existence of parasite in different stages in the life cycle of Angiostrongylus cantonensis in rats.<br /> Results: Antibody were detected from the 4th week, reached the peak at 7th week postinfection and was still<br /> detected with stable titer until the end of the study (20th week).<br /> Conclusion: The antibody responses to A. cantonensis could be monitored in rats model by indirect ELISA<br /> <br /> <br /> Bộ môn Ký sinh trùng, khoa Y, Đại học Y Dược Tp.Hồ Chí Minh<br /> Bộ môn Nhiễm, khoa Y, Đại học Y Dược Tp.Hồ Chí Minh<br /> <br /> Bộ môn Vi sinh , khoa Y, Đại học Y Dược Tp.Hồ Chí Minh<br /> <br /> Khoa Bệnh Nhiệt Đới, Bệnh viện Chợ Rẫy Tp.Hồ Chí Minh<br /> Tác giả liên lạc: PGS.TS Lê Thị Xuân<br /> ĐT: 0913602355<br /> <br /> <br /> 30<br /> <br /> Email: lexuan07@gmail.com<br /> <br /> Chuyên Đề Ký Sinh Trùng<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ bản của Số 1 * 2012<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> test. The antibody increased with time after infection during the first seven weeks. The higher infected dose, the<br /> higher immunologic response.<br /> Key words: immunologic response, Angiostrongylus cantonensis, rat, ELISA<br /> rãi là một công cụ chẩn đoán thích hợp nhất.<br /> MỞ ĐẦU<br /> Bệnh do A. cantonensis có tính cách cấp tính,<br /> Angiostrongylus cantonensis (A. cantonensis),<br /> không kéo dài, vì vậy, biết được thời điểm kháng<br /> giun ký sinh ở phổi chuột, là tác nhân phổ biến<br /> thể xuất hiện trong máu/dịch não tủy của bệnh<br /> nhất gây bệnh viêm màng não tăng bạch cầu<br /> nhân sau khi bị nhiễm có thể giúp chúng ta lấy<br /> toan tính (BCTT) hoặc viêm não-màng não tăng<br /> bệnh phẩm làm xét nghiệm đúng lúc và theo dõi<br /> BCTT ở người trên thế giới. Chuột cống, ký chủ<br /> diễn tiến của bệnh.<br /> vĩnh viễn của A. cantonensis, bị nhiễm khi ăn ốc<br /> Trong khi chờ đợi tiến hành khảo sát biến<br /> chứa ấu trùng giai đoạn 3 (AT3). Khi vào đến dạ<br /> động kháng thể ở người bị nhiễm A. cantonensis,<br /> dày-ruột, AT3 đi vào mạch máu, theo máu lên<br /> chúng tôi thực hiện nghiên cứu dùng mô hình<br /> não. Ở não, ấu trùng lột xác 2 lần trở thành ấu<br /> thực nghiệm để tìm hiểu biến động kháng thể ở<br /> trùng giai đoạn 5. Sau đó, giun non theo máu trở<br /> chuột bị nhiễm A. cantonensis trong phòng thí<br /> về tim và định cư trong động mạch phổi. Giun<br /> nghiệm.<br /> trưởng thành, đẻ trứng và ấu trùng 1 nở trong<br /> Đáp ứng kháng thể ở chuột đối với nhiễm<br /> phổi chuột và di chuyển lên khí quản, xuống ruột<br /> Angiostrongylus cantonensis (A. cantonensis) có thể<br /> và được thải ra ngoài theo phân và nhiễm trở lại<br /> được chứng minh ở chuột bị nhiễm tự nhiên hay<br /> ốc.<br /> ở chuột được gây nhiễm thực nghiệm(14). Từ trước<br /> Người là ký chủ tình cờ, ăn phải AT3 trong ốc<br /> đến nay đã có nhiều kỹ thuật để phát hiện kháng<br /> sống hoặc trong rau bị nhiễm. Ở người, chu trình<br /> thể ở chuột bị nhiễm A. cantonensis: khuyếch tán<br /> phát triển của giun cũng tương tự như ở chuột,<br /> trong thạch (AGD), miễn dịch đối lưu (CIEP),<br /> tuy nhiên thường ấu trùng bị giữ lại ở hệ thần<br /> ngưng kết hồng cầu gián tiếp (IHA) và miễn dịch<br /> kinh và không thể trở về tim, phổi để trưởng<br /> hấp phụ men (ELISA). Cross và Chen dùng kỹ<br /> thành. Vì vậy, bệnh do A. cantonensis ở người<br /> thuật ELISA để phát hiện kháng thể dùng và<br /> biểu hiện ở giai đoạn cấp tính bằng hội chứng<br /> nhận thấy tất cả các ca nhiễm A. cantonensis được<br /> viêm não - màng não, kèm theo tăng bạch toan<br /> xác nhận và nghi ngờ đều có giá trị OD cao hơn<br /> tính trong dịch não tủy và máu, thường nhẹ đến<br /> những ca chứng(2, 3)<br /> trung bình, hiếm khi nặng và có tính tự giới hạn,<br /> Công trình nghiên cứu này mô tả động học<br /> sau giai đoạn viêm màng não cấp, bệnh tự lui.<br /> của kháng thể trong máu của chuột bị nhiễm A.<br /> Chẩn đoán xác định là tìm được giun non<br /> cantonensis bằng kỹ thuật ELISA gián tiếp.<br /> hoặc ấu trùng trong dịch não tủy của bệnh nhân.<br /> Mặc dù có nhiều ca nhiễm, nhưng chỉ một số rất<br /> ít tìm được giun trong dịch não tủy. Vì vậy, chẩn<br /> đoán chủ yếu là dựa trên triệu chứng lâm sàng và<br /> tiền sử ăn uống cũng như các kết quả xét nghiệm.<br /> <br /> VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP<br /> <br /> Khó khăn trong việc chẩn đoán xác định là<br /> một lý do để các kỹ thuật miễn dịch có một vai<br /> trò quan trọng để xác định trường hợp nhiễm<br /> bệnh. Hiệu giá kháng thể tăng có thể là bằng<br /> chứng của một bệnh nhiễm mới và cũng là một<br /> bệnh đang có. Thử nghiệm huyết thanh phát<br /> hiện kháng thể bây giờ đã được chấp nhận rộng<br /> <br /> Dụng cụ và hoá chất<br /> <br /> Chuyên Đề Ký Sinh Trùng<br /> <br /> Thiết kế<br /> Mô tả thực nghiệm, hàng loạt ca.<br /> Pepsin bột (Merck), Acid hydrocloric<br /> (Merck), Ether, dung dịch NaCl 0,85%.<br /> Bình nến, bồn ủ, ống thông dạ dày, kim tiêm<br /> 1ml, dụng cụ Baermann (giá đỡ, rây lưới, gạc,<br /> phễu được nối với ống cao su, kẹp, bình Becher).<br /> <br /> 31<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ bản của Số 1 * 2012<br /> <br /> Vật liệu<br /> Ốc Biomphalaria glabrata được nuôi dưỡng<br /> trong phòng thí nghiệm.<br /> Ấu trùng giai đoạn 3 (AT3) A. cantonensis<br /> được thu hồi từ ốc bằng kỹ thuật tiêu mô trong<br /> 1% HCl-pepsin và kỹ thuật Baermann.<br /> - Chuột cống trắng Wistar, từ 6-8 tuần tuổi,<br /> được xét nghiệm phân tìm ký sinh trùng ruột.<br /> Những chuột có kết quả phân âm tính sẽ được<br /> đưa vào thí nghiệm. 90 chuột được chia làm 2<br /> nhóm:<br /> -Lô 1: chuột 45 con, 3 chuột làm chứng âm,<br /> 42 chuột được gây nhiễm với 50AT3/chuột<br /> -Lô 2; : chuột 45 con, 3 chuột làm chứng âm,<br /> 42 chuột được gây nhiễm với 100AT3/chuột<br /> <br /> Huyết thanh<br /> Chứng âm: máu lấy từ 3 chuột khỏe mạnh,<br /> xét nghiệm phân không phát hiện KST đường<br /> ruột. Xét nghiệm máu không phát hiện nhiễm<br /> KST trong máu.<br /> Chứng dương: máu lấy từ 3 chuột được gây<br /> nhiễm với 100AT/con vào tuần thứ 20 sau nhiễm.<br /> Mẫu nghiên cứu: máu của chuột được gây<br /> nhiễm với liều 50 AT/chuột và 100 AT/chuột, thu<br /> thập định kỳ mỗi tuần từ tuần thứ 1 cho đến tuần<br /> thứ 20 sau nhiễm.<br /> Máu lấy từ chuột khỏe mạnh và chuột bị<br /> nhiễm A.cantonensis được ly tâm, tách huyết<br /> thanh, cất ở -70ºC đến khi dùng.<br /> <br /> Phương pháp<br /> Gây nhiễm chuột<br /> Gây mê chuột bằng ether. Dùng ống tiêm 1<br /> ml gắn với ống thông dạ dày bơm ấu trùng vào<br /> dạ dày chuột. Theo dõi sức khỏe của chuột trong<br /> suốt thời gian từ lúc gây nhiễm đến cuối kỳ thực<br /> nghiệm.<br /> Chuột bị giết hàng tuần ở các thời điểm tuần<br /> thứ 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ,10, 12, 16 và 20 sau khi<br /> gây nhiễm. Dùng ống tiêm để rút máu từ tim.<br /> Não, phổi và tim được lấy ra quan sát tìm giun.<br /> Giun được định danh dựa vào hình thái học bằng<br /> kính hiển vi quang học.<br /> <br /> 32<br /> <br /> Đáp ứng miễn dịch của chuột sau khi được<br /> gây nhiễm A. cantonensis sẽ được khảo sát bằng<br /> kỹ thuật ELISA gián tiếp, phát hiện kháng thể<br /> trong máu chuột.<br /> <br /> Thử nghiệm ELISA gián tiếp<br /> Kháng nguyên pha trong đệm Carbonatebicarbonate 0,05M, pH 9,6, nhỏ 100 µl vào các<br /> giếng, ủ ở 37ºC trong 1 giờ và để qua đêm ở 4ºC.<br /> Rửa phiến nhựa với dung dịch rửa ( PBS-Tween<br /> 20) 3 lần. Khóa giếng với 150 µl BSA 1%, ủ ở 37ºC<br /> trong 1 giờ. Rửa 3 lần với dung dịch rửa. Cho 100<br /> µl huyết thanh chứng âm và dương và mẫu thử<br /> đã pha loãng vào giếng và ủ ở 37ºC trong 1 giờ.<br /> Rửa 5 lần với dung dịch rửa. Cho vào mỗi giếng<br /> 100 µl cộng hợp ( KPL), ủ ở 37ºC trong 1 giờ. Rửa<br /> 5 lần với dung dịch rửa. Cho 100 µl cơ chất TMB<br /> (Sigma) vào mỗi giếng, để ở nhiệt độ phòng từ 15<br /> -20 phút. Ngưng phản ứng bằng H2SO4 2M. Đọc<br /> kết quả bằng máy đọc Multiskan ở bước sóng 450<br /> nm.<br /> Mỗi mẫu được thực hiện 3 lần và lấy giá trị<br /> trung bình.<br /> <br /> KẾT QUẢ<br /> Thời điểm giun có mặt tại các cơ quan<br /> Kết quả được trình bày trong bảng 1.<br /> Bảng 1: Thời điểm phát hiện giun ở chuột bị nhiễm<br /> A. cantonensis<br /> Thời<br /> Cơ quan quan sát tìm giun<br /> điểm Liều nhiễm 50AT/ chuột<br /> Liều nhiễm 100AT/<br /> (tuần)<br /> chuột<br /> Số giun/chuột n (%)<br /> Số giun/chuột n (%)<br /> Não Tim Phổi Phân Não Tim Phổi Phân<br /> 0<br /> +<br /> 0<br /> 1 tuần +<br /> 2<br /> +<br /> 0<br /> +<br /> 0<br /> 3<br /> +<br /> 0<br /> +<br /> 0<br /> 4<br /> +<br /> 6 (12)<br /> +<br /> 25 (25)<br /> 5<br /> 27 (54)<br /> 34 (34)<br /> 6<br /> 42 (84)<br /> +<br /> 67 (67)<br /> +<br /> 7<br /> 35 (70)<br /> +<br /> 58 (58)<br /> +<br /> 8<br /> 40 (80)<br /> +<br /> 47 (47)<br /> +<br /> 9<br /> 42 (84)<br /> +<br /> 66 (66)<br /> +<br /> 10<br /> 39 (78)<br /> +<br /> 53 (53)<br /> +<br /> 11<br /> 32 (64)<br /> +<br /> 42 (42)<br /> +<br /> 12<br /> 41 (82)<br /> +<br /> 46 (46)<br /> +<br /> 16<br /> 38 (76)<br /> +<br /> 43 (43)<br /> +<br /> <br /> Chuyên Đề Ký Sinh Trùng<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ bản của Số 1 * 2012<br /> Thời<br /> Cơ quan quan sát tìm giun<br /> điểm Liều nhiễm 50AT/ chuột<br /> Liều nhiễm 100AT/<br /> (tuần)<br /> chuột<br /> <br /> 20<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Bảng 2: Diễn biến kháng thể kháng A. cantonensis<br /> trong huyết thanh chuột bị nhiễm<br /> <br /> Số giun/chuột n (%)<br /> Số giun/chuột n (%)<br /> Não Tim Phổi Phân Não Tim Phổi Phân<br /> 41 (82)<br /> +<br /> 49 (49)<br /> +<br /> <br /> Kết quả thử nghiệm ELISA với huyết thanh<br /> chuột<br /> Kết quả thử nghiệm ELISA được trình bày<br /> trong bảng 2. Các giá trị được thể hiện bằng đơn<br /> vị mật độ quang (OD), đánh giá theo tỷ lệ Voller<br /> và cs. (1979) được tính từ các giá trị OD đo được<br /> từ các mẫu huyết thanh chuột khỏe mạnh và<br /> chuột bị nhiễm giun.<br /> <br /> Thời điểm<br /> <br /> ELISA Huyết thanh (OD)<br /> Liều 50AT/chuột<br /> Liều 100AT/chuột<br /> OD<br /> Tỷ lệ Voller<br /> OD<br /> Tỷ lệ Voller<br /> Mẫu/Chứng<br /> Mẫu/Chứng<br /> âm<br /> âm<br /> 1,0<br /> 0,231<br /> 1,0<br /> Chứng âm 0,223<br /> 0,229<br /> 1,0<br /> 0,236<br /> 1,0<br /> 1 tuần<br /> 2<br /> 0,269<br /> 1,2<br /> 0,323<br /> 1,4<br /> 3<br /> 0,328<br /> 1,5<br /> 0,454<br /> 2,0<br /> 4<br /> 0,427<br /> 1,9<br /> 0,669<br /> 2,9<br /> 5<br /> 0,526<br /> 2,4<br /> 0,855<br /> 3,7<br /> 6<br /> 0,668<br /> 3,0<br /> 0,901<br /> 3,9<br /> 7<br /> 0,740<br /> 3,3<br /> 0,993<br /> 4,3<br /> 8<br /> 0,791<br /> 3,5<br /> 1,016<br /> 4,4<br /> 9<br /> 0,805<br /> 3,6<br /> 1,108<br /> 4,8<br /> 10<br /> 0,813<br /> 3,6<br /> 1,086<br /> 4,7<br /> 11<br /> 0,762<br /> 3,4<br /> 1,068<br /> 4,6<br /> 12<br /> 0,784<br /> 3,5<br /> 1,086<br /> 4,7<br /> 16<br /> 0,778<br /> 3,4<br /> 1,040<br /> 4,5<br /> 20<br /> 0,802<br /> 3,5<br /> 1,062<br /> 4,6<br /> <br /> So sánh biến động kháng thể theo thời gian<br /> (tuần) của 2 lô chuột từ tuần 1 đến tuần 20 sau<br /> nhiễm được trình bày trong biểu đồ 1.<br /> 1.2<br /> 1<br /> 0.8<br /> 50 ch<br /> <br /> 0.6<br /> <br /> 100 ch<br /> <br /> 0.4<br /> 0.2<br /> 0<br /> 0<br /> <br /> 1<br /> <br /> 2<br /> <br /> 3<br /> <br /> 4<br /> <br /> 5<br /> <br /> 6<br /> <br /> 7<br /> <br /> 8<br /> <br /> 9 10 11 12 16 20 22 24<br /> <br /> Biểu đồ 1: Biến động kháng thể (OD) theo thời gian nhiễm (tuần) của 2 lô chuột.<br /> tim, phổi và được thải ra môi trường ngoài theo<br /> BÀN LUẬN<br /> phân sau 6 tuần(12, 15). Tác giả Bhopale và cs còn<br /> Về thời điểm giun xuất hiện ở não và timnhận thấy số lượng giun ở não tăng cao nhất ở<br /> phổi<br /> tuẩn thứ 3 (ngày 21) ở tất cả các liều nhiễm 15AT,<br /> 100AT, 500AT, 2000AT, 5000AT, 10000AT(1).<br /> Theo chu trình phát triển của A. cantonensis<br /> được đề cập trong y văn và kết quả khảo sát của<br /> Kết quả nghiên cứu của chúng tôi phù hợp<br /> những tác giả khác thì sau nhiễm giun, ấu trùng<br /> với những đề cập nói trên. Ngoài ra, qua khảo<br /> xuất hiện rất sớm ở não nhưng di chuyển khỏi<br /> sát chúng tôi nhận định là thời điểm xuất hiện và<br /> não sau 4 tuần để sinh trưởng ở động mạch phổi,<br /> các giai đoạn phát triển của giun ở các cơ quan<br /> <br /> Chuyên Đề Ký Sinh Trùng<br /> <br /> 33<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 16 * Phụ bản của Số 1 * 2012<br /> <br /> như trên không khác nhau với liều gây nhiễm<br /> cao hay thấp. Ấu trùng giai đoạn 3 đã xuất hiện<br /> ở não chuột ngay tuần đầu sau khi xâm nhập<br /> vào chuột. Chúng tiếp tục tập trung lên não cao<br /> nhất vào tuần thứ 3 và phát triển thành giun non<br /> ở não vào tuần thứ 4. Cũng vào tuần thứ 4, một<br /> số giun bắt đầu trở về tim phổi vào khoảng ngày<br /> 28-31, đến tuần thứ 5, không còn thấy giun ở<br /> não. Từ tuần thứ 4, giun trở về ký sinh tại động<br /> mạch phổi, trưởng thành và đẻ trứng. Trứng bắt<br /> đầu xuất hiện trong phân chuột từ tuần thứ 6 sau<br /> nhiễm (bảng 1).<br /> <br /> Về thời điểm xuất hiện kháng thể<br /> Ở chuột gây nhiễm với liều 50 AT/chuột, OD<br /> đo được ở tuần thứ 1, 2 sau nhiễm chưa có khác<br /> biệt so với OD đo được trước khi chuột được gây<br /> nhiễm cho thấy chưa có đáp ứng kháng thể trong<br /> 3 tuần đầu. Từ tuần thứ 4, kháng thể bắt đầu tăng<br /> dần, cao đáng kể từ tuần thứ 5, đạt đỉnh vào tuần<br /> thứ 7 và duy trì cho đến cuối kỳ thí nghiệm, tuần<br /> thứ 20. Kết quả này cũng phù hợp với nhận định<br /> của Chen và cs khi gây nhiễm liều 100AT gây<br /> được đáp ứng kháng thể phát hiện bằng kỹ thuật<br /> ELISA từ tuần thứ 3 sau nhiễm(2). Kamiya và<br /> Tanaka cũng nhận thấy rằng sự xuất hiện của<br /> kháng thể phát hiện được trùng hợp với sự xuất<br /> hiện của AT trong phân(7).<br /> Trong nghiên cứu, ở lô chuột được gây<br /> nhiễm với liều 100AT/chuột, kết quả OD đo được<br /> cũng tương tự như ở lô chuột gây nhiễm với liều<br /> 50 AT/chuột về thời điểm xuất hiện cũng như<br /> biến động của kháng thể trong huyết thanh<br /> chuột.<br /> <br /> Yếu tố ảnh hưởng đến đáp ứng kháng thể ở<br /> chuột bị gây nhiễm A. cantonensis<br /> Liều gây nhiễm<br /> Bhopale và cs gây nhiễm cho các lô chuột với<br /> liều ấu trùng khác nhau từ 15 AT/chuột, 100<br /> AT/chuột, 500 AT/chuột, 2000 AT/chuột, 5000<br /> AT/chuột và 10000 AT/chuột(1). Khi dùng kỹ<br /> thuật miễn dịch điện di đối lưu (CIEP) để phát<br /> hiện kháng thể, tác giả nhận thấy kháng thể xuất<br /> hiện vào ngày 21 sau nhiễm ở tất cả các lô chuột,<br /> <br /> 34<br /> <br /> trừ lô chuột được gây nhiễm với liều 15<br /> AT/chuột. Yoshimura và cs. dùng kỹ thuật<br /> ngưng kết hồng cầu thụ động (IHA) đã phát hiện<br /> được kháng thể ở chuột nhiễm A. cantonensis với<br /> liều trung bình 77 AT/chuột , IHA dương tính ở<br /> mức thấp từ tuần thứ 5 và tiếp tục tăng sau đó(13).<br /> Yong WK và Dobson cũng dùng kỹ thuật IHA<br /> để phát hiện kháng thể ở 3 lô chuột bị nhiễm A.<br /> cantonensis với các liều khác nhau (thấp 10-30<br /> AT, trung bình 40-50 AT và cao 100-150 AT)<br /> cũng phát hiện được kháng thể IHA vào ngày<br /> thứ 12 sau nhiễm, sau đó tăng nhanh đến đỉnh<br /> vào tuần thứ 5 và duy trì ít nhất đến 4 tuần sau.<br /> Nhóm tác giả này cũng chứng minh có tương<br /> quan giữa hiệu giá kháng thể và liều gây nhiễm<br /> từ tuần thứ 14(11).<br /> Khi so sánh các giá trị của OD ở 2 lô chuột<br /> trong nghiên cứu này, chúng tôi nhận thấy các<br /> giá trị OD khác nhau khi đo cùng thời điểm. Ở lô<br /> gây nhiễm với liều 100AT/chuột, trị số OD cao<br /> hơn trị số của OD trong lô chuột bị nhiễm<br /> 50AT/chuột (bảng 2) rất rõ rệt. Giá trị OD gấp 2<br /> so với chứng ghi nhận được ở tuần thứ 4 ở lô gây<br /> nhiễm với liều thấp, nhưng đã đạt hiệu giá OD<br /> gấp 2 lần từ tuần thứ 3 với liều gây nhiễm<br /> 100AT/chuột. Kanbara và cs. cũng có nhận xét<br /> tương tự khi gây nhiễm cho 2 lô chuột với liều<br /> 150AT/chuột và 50AT/chuột và tác giả cũng đã<br /> kết luận kháng thể xuất hiện sớm hơn trong lô<br /> chuột được gây nhiễm với liều cao (150/chuột)<br /> (ngày 20 sau nhiễm) so với trong lô chuột nhiễm<br /> liều thấp (ngày 30 sau nhiễm)(9). Vì vậy, có thể<br /> nhận định rằng đáp ứng miễn dịch thể dịch đối<br /> với nhiễm A. cantonensis ở chuột tỷ lệ thuận với số<br /> lượng AT gây nhiễm.<br /> <br /> Thời gian nhiễm ký sinh trùng<br /> Thời điểm kháng thể được phát hiện trong<br /> máu chuột mhiễm A. cantonensis có thể sớm hay<br /> muộn tùy thuộc vào kỹ thuật thử nghiệm và<br /> kháng nguyên được làm từ ấu trùng hay giun<br /> trưởng thành. Kỹ thuật kết tủa có thể phát hiện<br /> được kháng thể 1 tuần sau nhiễm, kỹ thuật ngưng<br /> kết hồng cầu chỉ phát hiện được kháng thể 5 tuần<br /> sau nhiễm(2, 4, 6, 7, 13, 14).<br /> <br /> Chuyên Đề Ký Sinh Trùng<br /> <br />