zunia.vn

Tuyển sinh 2024 dành cho Gen-Z

zunia.vn

» Luận Văn - Báo Cáo

» Báo cáo khoa học

Nghiên cứu ứng dụng sản xuất kháng nguyên Streptolysin O, sử dụng trong chẩn đoán thấp tim và viêm cầu thận cấp ở trẻ em

Chia sẻ: Sunshine_6 Sunshine_6 | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:6

Báo xấu

36
lượt xem 2
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

TCNCYH phô b.n 32 (6) - 2004 Nghiªn cøu øng dông s.n xuÊt kh¸ng nguyªn streptolysin O, sö dông trong chÈn ®o¸n thÊp tim vµ viªm cÇu thËn cÊp ë trÎ em 1 NguyÔn ThÞ TuyÕn1, NguyÔn V¨n DÞp2 Bé m«n Vi sinh Y häc, tr−êng §¹i häc Y Hµ Néi 2 Vô Khoa häc vµ §µo t¹o, Bé Y tÕ Nghiªn cøu ®· ®−a ra ®−îc c¸c b−íc cô thÓ ho¸ vÒ mÆt kü thuËt vµ t×m ra c¸c ®iÒu kiÖn tèi −u trong quy tr×nh s.n xuÊt kh¸ng nguyªn streptolysin O theo khuyÕn c¸o cña Tæ chøc Y tÕ thÕ giíi. §ång...

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Nghiên cứu ứng dụng sản xuất kháng nguyên Streptolysin O, sử dụng trong chẩn đoán thấp tim và viêm cầu thận cấp ở trẻ em

TCNCYH phô b¶n 32 (6) - 2004 Nghiªn cøu øng dông s¶n xuÊt kh¸ng nguyªn streptolysin O, sö dông trong chÈn ®o¸n thÊp tim vµ viªm cÇu thËn cÊp ë trÎ em NguyÔn ThÞ TuyÕn1, NguyÔn V¨n DÞp2 1 Bé m«n Vi sinh Y häc, tr−êng §¹i häc Y Hµ Néi 2 Vô Khoa häc vµ §µo t¹o, Bé Y tÕ Nghiªn cøu ®· ®−a ra ®−îc c¸c b−íc cô thÓ ho¸ vÒ mÆt kü thuËt vµ t×m ra c¸c ®iÒu kiÖn tèi −u trong quy tr×nh s¶n xuÊt kh¸ng nguyªn streptolysin O theo khuyÕn c¸o cña Tæ chøc Y tÕ thÕ giíi. §ång thêi ¸p dông s¶n xuÊt thµnh c«ng kh¸ng nguyªn streptolysin O d−íi d¹ng láng víi hiÖu gi¸ æn ®Þnh lµ 1: 16. Ngoµi ra nghiªn cøu còng ®· ®−a ra ®−îc ®iÒu kiÖn gi÷ chñng liªn cÇu nhãm A kinh tÕ nhÊt lµ m«i tr−êng BHI huyÕt thanh ngùa 50% vµ nhiÖt ®é b¶o qu¶n lµ - 70°C. I. §Æt vÊn ®Ò 2. VËt liÖu HiÖn nay ë ViÖt Nam còng nh− trªn thÕ giíi, • M«i tr−êng nu«i cÊy vi khuÈn: ph¶n øng ASLO ®−îc sö dông trong chÈn ®o¸n ë - M«i tr−êng th¹ch m¸u, BHI (Brain Heart hÇu hÕt c¸c phßng xÐt nghiÖm ë c¸c bÖnh viÖn infusion) cña h·ng Sanofi diagnostics Pasteur. tuyÕn trung −¬ng vµ mét sè bÖnh viÖn tuyÕn tØnh. - M«i tr−êng Kalbak broth tù s¶n xuÊt theo Ngoµi ra cßn sö dông trong ch−¬ng tr×nh phßng c«ng thøc vµ quy tr×nh cña TCYTTG 1983, 1996. chèng bÖnh thÊp tim. V× vËy, nhu cÇu sö dông kh¸ng nguyªn streptolysin O lµ rÊt lín. Song cho • C¸c sinh phÈm vµ ho¸ chÊt chÝnh tíi nay ë ViÖt Nam vÉn ch−a cã c¬ quan nµo - Kh¸ng thÓ kh¸ng streptolysin O cña Mü. nghiªn cøu thµnh c«ng s¶n xuÊt kh¸ng nguyªn - Ho¸ chÊt pha ®Öm PBS. streptolysin O. Do ®ã c¸c phßng xÐt nghiÖm vÉn - Methiolate, hång cÇu thá, huyÕt thanh ngùa ph¶i mua kh¸ng nguyªn cña n−íc ngoµi víi gi¸ • Chñng chuÈn quèc tÕ ®Ó s¶n xuÊt kh¸ng thµnh cao. XuÊt ph¸t tõ t×nh h×nh thùc tÕ trªn, nguyªn streptolysin O C203S do Trung t©m KiÓm nghiªn cøu cña chóng t«i tiÕn hµnh nh»m môc tiªu ®Þnh liªn cÇu Quèc gia Th¸i Lan cung cÊp. sau: 3. Ph−¬ng ph¸p nghiªn cøu: + Nghiªn cøu c¸c ®iÒu kiÖn gi÷ chñng chuÈn liªn cÇu nhãm A: C203S. 3.1. Ph−¬ng ph¸p gi÷ chñng mÉu liªn cÇu nhãm A C203S: + Nghiªn cøu cô thÓ ho¸ vÒ mÆt kü thuËt cña tõng b−íc trong quy tr×nh s¶n xuÊt kh¸ng nguyªn - Ph−¬ng ph¸p chóng t«i thö nghiÖm trªn m«i streptolysin O theo khuyÕn c¸o cña Tæ chøc Y tÕ tr−êng BHI huyÕt thanh ngùa so s¸nh víi c¸c ThÕ giíi (TCYTTG) n¨m 1983 vµ 1996. ph−¬ng ph¸p hiÖn ®ang l−u gi÷ nh−: II. §èi t−îng, VËt liÖu vµ ph−¬ng + Gi÷ trªn m«i tr−êng th¹ch m¸u, gi÷ trªn m«i tr−êng BHI glycerol 20%, gi÷ d−íi d¹ng ®«ng kh«. ph¸p nghiªn cøu: 3.2. Ph−¬ng ph¸p t¸ch chiÕt kh¸ng nguyªn 1. §èi t−îng nghiªn cøu: streptolysin O: - Quy tr×nh gi÷ chñng liªn cÇu nhãm A. - Quy tr×nh s¶n xuÊt kh¸ng nguyªn streptolysin O 94
TCNCYH phô b¶n 32 (6) - 2004 Theo th−êng quy cña TCYTTG 1983, 1996, Theo th−êng quy cña TCYTTG 1996. nh−ng ®· ®−îc ®Ò tµi nghiªn cøu cô thÓ ho¸ tõng iii. KÕt qu¶ b−íc trong quy tr×nh vµ ¸p dông s¶n xuÊt. 1. KÕt qu¶ nghiªn cøu c¸c ®iÒu kiÖn gi÷ 3.3. Ph−¬ng ph¸p chuÈn ®é kh¸ng nguyªn chñng liªn cÇu nhãm A C203S. streptolysin O: B¶ng 1. KÕt qu¶ nghiªn cøu gi÷ chñng liªn cÇu nhãm A C203S ë c¸c m«i tr−êng vµ c¸c ®iÒu kiÖn b¶o qu¶n kh¸c nhau M«i tr−êng b¶o qu¶n NhiÖt ®é b¶o qu¶n Thêi gian vi khuÈn sèng Th¹ch m¸u 4°C 48 giê BHI vµ glycerol - 20°C 1 - 2 tuÇn BHI vµ glycerol - 70°C 2 tuÇn - 1 th¸ng BHI vµ huyÕt thanh ngùa - 20°C 1 - 2 n¨m BHI vµ huyÕt thanh ngùa - 70°C > 4 n¨m vÉn ®ang sèng §«ng kh« 4°C > 4 n¨m vÉn ®ang sèng * NhËn xÐt: - Vi khuÈn gi÷ theo ph−¬ng ph¸p ®«ng kh« trªn - Trong sè c¸c m«i tr−êng gi÷ chñng liªn cÇu 4 n¨m vi khuÈn vÉn sèng vµ kh«ng cã sù thay ®æi nhãm A C203S, m«i tr−êng BHI vµ huyÕt thanh vÒ ®Æc ®iÓm sinh vËt häc. ngùa lµ m«i tr−êng tèt nhÊt. 2. KÕt qu¶ s¶n xuÊt kh¸ng nguyªn - §iÒu kiÖn b¶o qu¶n c¸c m«i tr−êng nµy tèt streptolysin O. nhÊt lµ ë - 70°C. * B−íc 1: Theo quy tr×nh khuyÕn c¸o cña - §· gi÷ ®−îc chñng liªn cÇu nhãm A C203S TCYTTG: cÊy chuyÓn chñng mÉu sang m«i tr−êng trong m«i tr−êng BHI vµ huyÕt thanh ngùa ë - th¹ch m¸u: 70°C tõ th¸ng 4 n¨m 2000 ®Õn th¸ng 6 n¨m 2004 vi khuÈn vÉn cßn sèng vµ kh«ng cã sù thay ®æi vÒ ®Æc ®iÓm sinh vËt häc. B¶ng 2. Mèi liªn quan gi÷a sè lÇn cÊy chuyÓn chñng trªn m«i tr−êng th¹ch m¸u víi hiÖu gi¸ kh¸ng nguyªn SO LÇn cÊy chuyÓn M«i tr−êng NhiÖt ®é Thêi gian CO2 HiÖu gi¸ KN (chuÈn ®é s¬ bé) LÇn 1 TM 37°C 18 - 24 giê kh«ng 1: 4 LÇn 2 TM 37°C 18 - 24 giê kh«ng 1: 16 L©n1 TM 37°C 18 - 24 giê 5% 1: 4 - 1: 8 LÇn 2 TM 37°C 18 - 24 giê 5% 1: 16 - 1: 32 * B−íc 2: Theo khuyÕn c¸o cña TCYTTG: cÊy chuyÓn chñng tõ m«i tr−êng th¹ch m¸u sang m«i tr−êng t¸ch chiÕt kh¸ng nguyªn streptolysin O. Qua kÕt qu¶ nghiªn cøu chóng t«i thu ®−îc mèi liªn quan gi÷a hiÖu gi¸ kh¸ng nguyªn streptolysin O víi c¸c h×nh thøc cÊy chuyÓn nh− sau: 95
TCNCYH phô b¶n 32 (6) - 2004 B¶ng 3. Mèi liªn quan gi÷a hiÖu gi¸ kh¸ng nguyªn SO víi c¸c h×nh thøc cÊy chuyÓn kh¸c nhau: H×nh thøc cÊy chuyÓn HiÖu gi¸ kh¸ng nguyªn SO TM MT trung gian MT cÇn t¸ch chiÕt KN SO 1: 16 - 1: 32 TM MT cÇn t¸ch chiÕt KN SO 1: 8 * NhËn xÐt: * B−íc 4: Theo ®óng nh− quy tr×nh khuyÕn c¸o - §Ó t¸ch chiÕt ®−îc mét l−îng lín kh¸ng cña TCYTTG: nguyªn SO, chóng ta cÇn cÊy chuyÓn vi khuÈn tõ - PhÇn n−íc næi ch¾t ®−îc (kh¸ng nguyªn m«i tr−êng th¹ch m¸u qua mét l−îng nhá m«i streptolysin O) sau ly t©m ®−îc bæ sung thªm tr−êng (1/10 tæng m«i tr−êng t¸ch chiÕt kh¸ng methiolate víi tû lÖ 1% (methiolate1/10000) hoÆc nguyªn) ®Ó t¨ng sinh vi khuÈn, sau 6 - 8 giê míi sodium azid víi nång ®é 0,02%. cÊy chuyÓn vµo m«i tr−êng cÇn t¸ch chiÕt kh¸ng * B−íc 5: Theo quy tr×nh khuyÕn c¸o cña nguyªn, sÏ thu ®−îc l−îng kh¸ng nguyªn SO cao. TCYTTG lµ läc v« trïng b»ng läc seitz. * B−íc 3: Ly t©m l¹nh ®Ó t¸ch kh¸ng nguyªn + Tr−íc tiªn läc qua giÊy läc cã kÝch th−íc streptolysin O: 0,45µm, läc ®−îc mét l−îng dÞch kho¶ng 100ml - B−íc nµy ly t©m nh»m môc ®Ých ®Ó vi khuÈn th× ph¶i thay giÊy läc 1 lÇn (®Ó dÞch läc ch¶y nhanh l¾ng xuèng ®¸y èng, cßn kh¸ng nguyªn kh«ng kÐo dµi qu¸ tr×nh läc). streptolysin O n»m trong phÇn n−íc næi phÝa trªn. + DÞch läc ®−îc läc l¹i lÇn 2 qua giÊy läc cã V× vËy vÊn ®Ò ®Æt ra lµ: ly t©m víi sè vßng lµ bao kÝch th−íc 0,22 µm. nhiªu? vµ trong thêi gian bao nhiªu? ®Ó kh¸ng * B−íc 6: §ãng gãi vµ b¶o qu¶n lo¹i bá kh¸ng nguyªn streptolysin O kh«ng bÞ l¾ng xuèng ®¸y nguyªn streptolysin S (theo quy tr×nh cña TCYTTG èng cïng vi khuÈn? trong quy tr×nh khuyÕn c¸o cña TCYTTG kh«ng nªu cô thÓ, v× vËy chóng t«i b¶o qu¶n dÞch läc ë 4°C trong vßng 1 th¸ng ®Ó lo¹i ®· ph¶i thö nghiÖm ®Ó t×m ra c¸c ®iÒu kiÖn tèi −u bá kh¸ng nguyªn streptolysin S). sau: Theo khuyÕn c¸o cña Tæ chøc Y tÕ thÕ giíi: - NÕu ly t©m cì lín (mçi èng ly t©m cã thÓ kh¸ng nguyªn sau khi s¶n xuÊt cã thÓ b¶o qu¶n ë chøa ®−îc sè l−îng 100 - 200ml m«i tr−êng), nh− 4°C sö dông ®−îc trong vßng nhiÒu n¨m. Qua vËy mét lÇn ly t©m chóng ta cã thÓ ly t©m ®−îc nghiªn cøu thö nghiÖm ë mét sè ®iÒu kiÖn nhiÖt ®é kho¶ng 1 1Ýt m«i tr−êng, th× sè vßng lµ 2000 b¶o qu¶n kh¸c nh−: 4°C, - 20°C, ng¨n ®¸ tñ l¹nh, vßng/1 phót, trong thêi gian lµ 30 phót. kÕt qu¶ theo dâi trong vßng 2 n¨m nh− sau: - Nh−ng nÕu ly t©m lo¹i nhá (mçi èng ly t©m chØ chøa ®−îc 15 - 20 ml m«i tr−êng, th× sè vßng 2000 vßng/ 1 phót, trong vßng 10 - 15 phót. B¶ng 5. Mèi liªn quan gi÷a hiÖu gi¸ kh¸ng nguyªn SO víi nhiÖt ®é b¶o qu¶n kh¸c nhau NhiÖt ®é HiÖu gi¸ HiÖu gi¸ HiÖu gi¸ HiÖu gi¸ HiÖu gi¸ b¶o qu¶n KNSO KNSO sau KNSO sau KNSO sau KNSO sau sau s¶n xuÊt 6 th¸ng 12 th¸ng 18 th¸ng 24 th¸ng 4°C 1: 32 1: 32 1: 32 1: 16 1: 16 Ng¨n ®¸ 1: 32 1: 32 1: 32 1: 16 1: 16 - 20°C 1: 32 1: 32 1: 32 1: 32 1: 32 96
TCNCYH phô b¶n 32 (6) - 2004 * NhËn xÐt: Nh− vËy qua kÕt qu¶ nghiªn cøu, chóng t«i ®· cô thÓ ho¸ vµ t×m ra ®−îc c¸c ®iÒu kiÖn tèi −u - MÆc dï theo khuyÕn c¸o cña Tæ chøc Y tÕ thÕ trong tõng b−íc cña quy tr×nh s¶n xuÊt kh¸ng giíi: kh¸ng nguyªn SO sau khi s¶n xuÊt cã thÓ b¶o nguyªn mµ TCYTTG ®· khuyÕn c¸o n¨m 1983 vµ qu¶n ë 4°C trong nhiÒu n¨m, nh−ng theo kÕt qu¶ n¨m1996. chóng t«i thö nghiÖm, th× nhiÖt ®é tèi −u nhÊt ®Ó 3. Nghiªn cøu hiÖu qu¶ s¶n xuÊt kh¸ng b¶o qu¶n kh¸ng nguyªn SO lµ - 20°C (trong vßng 2 n¨m hiÖu gi¸ kh«ng thay ®æi). nguyªn streptolysin O trªn c¸c m«i tr−êng kh¸c nhau. - KÕt qu¶ b¶o qu¶n ë ng¨n ®¸ tñ l¹nh vµ ë 4°C (ng¨n l¹nh cña tñ l¹nh), trong vßng 1 n¨m hiÖu gi¸ kh¸ng nguyªn æn ®Þnh kh«ng thay ®æi, nh−ng sau 1 n¨m bÞ gi¶m hiÖu gi¸. B¶ng 6. HiÖu qu¶ s¶n xuÊt kh¸ng nguyªn streptolysin O trªn c¸c m«i tr−êng kh¸c nhau: M«i tr−êng HiÖu gi¸ KNSO Gi¸ 1 1Ýt m«i tr−êng (®ång) Todd - Hewith 1: 16 - 1: 32 315.000 BHI 1: 16 - 1: 32 45.000 Kalbak (tù ®iÒu chÕ) 1: 16 - 1: 32 25.000 * NhËn xÐt: * Ph−¬ng ph¸p gi÷ chñng liªn cÇu nhãm A - KÕt qu¶ t¸ch chiÕt kh¸ng nguyªn streptolysin C203S trong m«i tr−êng BHI huyÕt thanh ngùa O trªn 3 lo¹i m«i tr−êng t−¬ng tù nhau. 50%: - Gi¸ thµnh cña m«i tr−êng kalbak lµ rÎ nhÊt v× Trong ph−¬ng ph¸p nµy chóng t«i ®· thay thÕ ®iÒu chÕ tõ nguyªn liÖu th« s½n cã trong n−íc (tim glyxerol b»ng huyÕt thanh ngùa lµ chÊt chèng tinh bß), nh−ng mÊt thêi gian ®iÒu chÕ h¬n. thÓ ho¸ vµ kÕt qu¶ thu ®−îc ®· lo¹i trõ ®−îc nh÷ng nh−îc ®iÓm cña c¸c ph−¬ng ph¸p trªn vµ kinh tÕ iv. Bµn luËn h¬n (KÕt qu¶ b¶ng 3.1). 1. Bµn luËn vÒ c¸c ®iÒu kiÖn gi÷ chñng liªn * Ph−¬ng ph¸p gi÷ chñng b»ng ®«ng kh«: cÇu nhãm A Lµ ph−¬ng ph¸p b¶o qu¶n dµi h¹n vµ còng lµ Môc ®Ých ®Çu tiªn cña gi÷ c¸c chñng vi khuÈn mét trong nh÷ng ph−¬ng ph¸p b¶o qu¶n vi khuÈn lµ lµm sao cho chóng sèng ®−îc l©u dµi, kh«ng bÞ hiÖu qu¶ hiÖn nay. Tuy nhiªn kü thuËt ®«ng kh« nhiÔm bÈn vµ kh«ng thay ®æi c¸c ®Æc tÝnh di kh¸ phøc t¹p. Ngoµi ra kh«ng ph¶i c¬ së nµo còng truyÒn. cã m¸y ®«ng kh« ®Ó phôc vô qu¸ tr×nh gi÷ chñng * CÊy chuyÓn vµ ph−¬ng ph¸p gi÷ chñng liªn phôc vô s¶n xuÊt kh¸ng nguyªn. cÇu nhãm A C203S trong m«i tr−êng BHI glyxerol * Bµn luËn vÒ nhiÖt ®é b¶o qu¶n chñng: 20%: NhiÖt ®é b¶o qu¶n chñng tõ - 12 ®Õn - 20°C - C¶ 2 ph−¬ng ph¸p nµy kh«ng phï hîp trong trong c¸c ng¨n ®¸ tñ l¹nh hiÖu qu¶ th−êng thay ®æi viÖc l−u gi÷ chñng liªn cÇu nhãm A C203S ®Ó v× qu¸ tr×nh x¶ ®¸ tù ®éng lµm nhiÖt ®é cña c¸c phôc vô qu¸ tr×nh s¶n xuÊt kh¸ng nguyªn khoang nµy kh«ng æn ®Þnh vµ ®iÒu ®ã lµm tæn h¹i streptolysin O v×: tíi tÕ bµo vi khuÈn. V× vËy gi÷ vi khuÈn ë l¹nh s©u - Ph−¬ng ph¸p cÊy chuyÓn cã kh¶ n¨ng béi - 70 °C trong quÇy l¹nh chuyªn dông sÏ tèt h¬n nhiÔm cao. ng¨n ®¸ tñ l¹nh rÊt nhiÒu. Qu¸ tr×nh l¹nh s©u liªn - DÔ xuÊt hiÖn chän läc c¸c biÕn thÓ. quan ®Õn viÖc ®«ng b¨ng hçn dÞch vi khuÈn cã chøa c¸c chÊt chèng tinh thÓ ho¸ nh−: glyxerol, 97
TCNCYH phô b¶n 32 (6) - 2004 huyÕt thanh ngùa ®Ó ng¨n ngõa tæn h¹i tÕ b¶o trong - Ph−¬ng ph¸p ly t©m: môc ®Ých cña ly t©m lµ qu¸ tr×nh ®«ng l¹nh. ®Ó vi khuÈn l¾ng xuèng ®¸y èng cßn ph©n tö kh¸ng 2. Bµn luËn vÒ kü thuËt t¸ch chiÕt kh¸ng nguyªn streptolysin O n»m trong phÇn n−íc næi nguyªn streptolysin O: phÝa trªn. V× vËy sè vßng ly t©m chØ cÇn ®ñ ®Ó vi khuÈn l¾ng xuèng ®¸y èng lµ ®¹t yªu cÇu (th«ng Qu¸ tr×nh t¸ch chiÕt kh¸ng nguyªn streptolysin th−êng chØ cÇn 2000 vßng/1 phót), thêi gian ly t©m O phô thuéc vµo nhiÒu yÕu tè, nh−ng cã hai yÕu tè tuú thuéc vµo èng ly t©m lín hay bÐ. quyÕt ®Þnh ®ã lµ: sù ph¸t triÓn tèt cña chñng vi khuÈn liªn cÇu nhãm A mÉu vµ chèng ®−îc qu¸ - Ph−¬ng ph¸p sö dông methiolate: Môc ®Ých ®Ó tr×nh oxy ho¸ kh¸ng nguyªn streptolysin O trong diÖt c¸c vi khuÈn cßn sãt l¹i sau khi ly t©m: phÇn qu¸ tr×nh t¸ch chiÕt. n−íc næi ®−îc ch¾t sau khi ly t©m ®−îc bæ sung thªm 1% methiolate cña (1/10000) vµ läc v« trïng. 2.1. CÊy chuyÓn chñng mÉu liªn cÇu nhãm A C203S ®Ó t¸ch chiÕt kh¸ng nguyªn streptolysin O. - Ph−¬ng ph¸p läc v« trïng: lµ ph−¬ng ph¸p cuèi cïng sö dông ®Ó lo¹i vi khuÈn ra khái hçn Khi chñng liªn cÇu nhãm A C203S ®−îc l−u gi÷ dÞch kh¸ng nguyªn streptolysin O. Trong nghiªn ë l¹nh s©u, vi chÊt láng trong vµ ngoµi tÕ bµo vi cøu chóng t«i sö dông 2 lo¹i giÊy läc: kÝch th−íc khuÈn b¾t ®Çu ®«ng vµ h×nh thµnh dÇn c¸c tinh thÓ, 0,45µm vµ 0,22 µm lµ phï hîp cho viÖc t¸ch chiÕt c¸c enzym trong tÕ bµo ngõng ho¹t ®éng vµ tÕ bµo kh¸ng nguyªn streptolysin O. V× nÕu chóng ta sö chuyÓn sang d¹ng tiÒm sinh. Qu¸ tr×nh b¶o qu¶n chñng d−íi d¹ng ®«ng kh« còng t−¬ng tù nh− vËy dông giÊy läc cã kÝch th−íc lín h¬n 0,22µm th× sÏ nh−ng sau qu¸ tr×nh ®«ng b¨ng lµ lµm mÊt n−íc kh«ng lo¹i bá hÕt ®−îc vi khuÈn liªn cÇu nhãm A trong huyÒn dÞch vi khuÈn b»ng c¸ch cho chóng C203S, nh−ng nÕu sö dông giÊy läc cã kÝch th−íc bay h¬i d−íi ¸p lùc ©m. V× vËy, khi chñng ®−îc nhá h¬n 0,22µm th× ph©n tö kh¸ng nguyªn chuyÓn tõ ®iÒu kiÖn b¶o qu¶n sang m«i tr−êng streptolysin O còng bÞ gi÷ l¹i trªn lç läc vµ nh− dinh d−ìng, chóng ta nªn cÊy chuyÓn 2 lÇn ®Ó vi vËy qu¸ tr×nh t¸ch chiÕt kh¸ng nguyªn kh«ng thùc khuÈn thÝch nghi trë l¹i tr¹ng th¸i ph¸t triÓn b×nh hiÖn ®−îc. th−êng råi míi chuyÓn vµo m«i tr−êng tèi −u ®Ó 3. Bµn luËn vÒ hiÖu gi¸ kh¸ng nguyªn t¸ch chiÕt kh¸ng nguyªn streptolysin O tù s¶n xuÊt: §Ó t¸ch chiÕt ®−îc l−îng kh¸ng nguyªn Theo quy tr×nh vµ khuyÕn c¸o cña Tæ chøc Y tÕ streptolysin O cao, cÇn ph¶i cã mét l−îng lín vi thÕ giíi: hiÖu gi¸ kh¸ng nguyªn chuÈn ®é s¬ bé ngay khuÈn ë cïng mét thêi gian vµ ®ang ë giai ®o¹n sau khi s¶n xuÊt (ch−a bÊt ho¹t treptolysin S) Ýt nhÊt ph¸t triÓn m¹nh, nÕu kh«ng l−îng kh¸ng nguyªn ®¹t 1: 8 lµ ®¹t yªu cÇu [4]. Trong s¶n xuÊt thö nghiÖm streptolysin O ®−îc s¶n xuÊt ra tõ mét l−îng nhá cña chóng t«i c¸c l« s¶n xuÊt ®Òu ®¹t hiÖu gi¸ cao vi khuÈn sÏ bÞ oxy ho¸ ngay mµ kh«ng cßn ®Ó h¬n trong kho¶ng: 1: 16 - 1: 32. Sau khi ®· bÊt ho¹t chóng ta t¸ch chiÕt n÷a. streptolysin S, hiÖu gi¸ kh¸ng nguyªn streptolysin O 2.2. T¸ch chiÕt kh¸ng nguyªn streptolysin O: hÇu hÕt ë c¸c l« s¶n xuÊt ®Òu ®¹t hiÖu gi¸ tõ 1: 16 trë §Æc ®iÓm cña kh¸ng nguyªn streptolysin O lµ lªn. KÕt qu¶ nµy ®· ®−îc Trung t©m KiÓm ®Þnh rÊt dÔ bÞ c¸c thµnh phÇn lipid, cholesterol, pH acid Vacxin vµ ChÕ phÈm sinh häc Quèc gia kiÓm tra 3 l« vv... lµm biÕn ®æi tÝnh kh¸ng nguyªn. V× vËy qu¸ liªn tiÕp vµ ghi nhËn kÕt qu¶. tr×nh t¸ch chiÕt kh¸ng nguyªn streptolysin O b¾t V. KÕt luËn buéc ph¶i lo¹i vi khuÈn liªn cÇu nhãm A C203S ra 1. §iÒu kiÖn gi÷ chñng liªn cÇu nhãm A tèt khái dung dÞch t¸ch chiÕt. §Ó thùc hiÖn ®−îc môc nhÊt vµ kinh tÕ lµ trong m«i tr−êng BHI huyÕt ®Ých nµy trong qu¸ tr×nh t¸ch chiÕt kh¸ng nguyªn thanh ngùa 50% vµ nhiÖt ®é b¶o qu¶n lµ - 70°C. streptolysin O chóng t«i ®· sö dông cïng mét lóc 3 2. §· nghiªn cøu cô thÓ ho¸ tõng b−íc chi tiÕt ph−¬ng ph¸p ®Ó lo¹i vi khuÈn ra khái dung dÞch vµ t×m ra c¸c ®iÒu kiÖn tèi −u trong quy tr×nh s¶n t¸ch chiÕt: xuÊt kh¸ng nguyªn streptolysin O theo khuyÕn c¸o 98
TCNCYH phô b¶n 32 (6) - 2004 cña Tæ chøc Y tÕ ThÕ giíi nh−: sè lÇn cÊy chuyÓn for the clinical laboratory. Printed by SANOFI chñng chuÈn trªn m«i tr−êng th¹ch m¸u, h×nh thøc Diagnostics Pasteur, Inc chaska, Minesota. Vas, cÊy chuyÓn chñng vµo m«i tr−êng t¸ch chiÐt, sè Janury. 1992, p1 - 4. vßng ly t©m, kÝch th−íc giÊy läc phï hîp nhÊt lµ 2. Vandepite J, Engback, et al (1991). Upper trªn m«i tr−êng Kalbak, nhiÖt ®é b¶o qu¶n kh¸ng respiratory track infection. Basis laboratory nguyªn tèi −u lµ - 20°C, ®Ó gióp c¸c c¬ së s¶n procedures in clinical bacteriology. WHO Geneva xuÊt cã thÓ ¸p dông quy tr×nh ®Ó s¶n xuÊt hµng 1991, p44 - 51. lo¹t. 3. WHO (1983). Menual of microbiological 3. ¸p dông quy tr×nh sau khi ®· ®−îc cô thÓ diagnostic methods for streptococcal infection and ho¸ víi c¸c ®iÒu kiÖn tèi −u s¶n xuÊt thµnh c«ng their sequelae. 1983, p1 - 69. kh¸ng nguyªn streptolysin O d−íi d¹ng láng víi 4. WHO (1996). Laboratory diagnosis of group hiÖu gi¸ æn ®Þnh lµ 1: 16. A streptococcal infection. 1996, p1 - 106. Tµi liÖu tham kh¶o 5. WHO, UNESO, ISFC (1992). Streptococcal 1. Kaplan EL. (1992). The anti streptolysin O sore throat rheumatic fever. Rheumatic heart test in clinical medicin. Background and guidelines diseases. 1992, p1 - 16. Summary Apply procedure for producting antigen streptolyssin O using in diagnosis of rheumatic fever and acute glomerulonephritic in children The authours specified steps of procedures of producsion antigen streptolysin O and optimized technical conditions during the prossesss of applying methods proposed by WHO. The antigen streptolysin O was produced in sold fomation stably with the titer 1: 16. The results also pointed out the conditions for storing group A streptococci with low - cost by using media BHI composed 50% hose serum at - 70°C. 99

CÓ THỂ BẠN MUỐN DOWNLOAD

TL.01: Bộ Tiểu Luận Triết Học

207 tài liệu

1468 lượt tải

THÔNG TIN

TRỢ GIÚP

HỖ TRỢ KHÁCH HÀNG

Theo dõi chúng tôi

Chịu trách nhiệm nội dung:

Nguyễn Công Hà - Giám đốc Công ty TNHH TÀI LIỆU TRỰC TUYẾN VI NA

LIÊN HỆ

Địa chỉ: P402, 54A Nơ Trang Long, Phường 14, Q.Bình Thạnh, TP.HCM

Hotline: 093 303 0098

Email: support@tailieu.vn

Giấy phép Mạng Xã Hội số: 670/GP-BTTTT cấp ngày 30/11/2015 Copyright © 2022-2032 TaiLieu.VN. All rights reserved.