Xét nghiệm xác định đột biến gen EGFR và K-Ras bằng giải trình tự chuỗi DNA trên khối Paraffin - đo, chuẩn liều chùm electron (điện tử) dùng trong xạ trị

Chia sẻ: Nhậm Ngạn Đông | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:4

Thêm vào BST

Báo xấu

3
lượt xem 1
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Tài liệu "Xét nghiệm xác định đột biến gen EGFR và K-Ras bằng giải trình tự chuỗi DNA trên khối Paraffin - đo, chuẩn liều chùm electron (điện tử) dùng trong xạ trị" nhằm cung cấp cho học viên những nội dung về đại cương, chỉ định, hóa chất và trang thiết bị, các bước tiến hành, đọc kết quả. Mời các bạn cùng tham khảo!

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Xét nghiệm xác định đột biến gen EGFR và K-Ras bằng giải trình tự chuỗi DNA trên khối Paraffin - đo, chuẩn liều chùm electron (điện tử) dùng trong xạ trị

XÉT NGHIỆM XÁC ĐỊNH ĐỘT BIẾN GEN EGFR VÀ K-RAS BẰNG GIẢI TRÌNH TỰ CHUỖI DNA TRÊN KHỐI PARAFFIN I. ĐẠI CƢƠNG Xác định đột biến gen bằng giải trình tự chuỗi là phương pháp sử dụng các kỹ thuật sinh học phân tử nhằm xác định các đột biến gen. II. CHỈ ĐỊNH Theo chỉ định của Bác sĩ lâm sàng III. H A CHẤT VÀ TRANG THIẾT BỊ - Máy PCR - Máy giải trình tự gen - Các hóa chất đi kèm IV. CÁC BƢỚC TIẾN HÀNH - Bệnh phẩm được cắt làm tiêu bản dùng cho chẩn đoán giải phẫu bệnh. - Vùng mô ung thư được đánh dấu trên lam kính - Cạo mô ung thư bào tube ly tâm 1,5 ml - Cho xylen vào tube ly tâm 2 lần để khử paraffin - Rửa lại bằng ethanol và để khô trước khi ủ với proteinase K ở 480C/16 giờ - Tinh sạch sản phẩm DNA - Kết tủa DNA bằng ethanol tuyệt đối - Tách DNA bằng kit KAPA - Khuyếch đại exon bằng PCR Master Mix của KAPA - Chạy điện di trên gel Argarone 1 - Tinh sạch sản phẩm PCR bằng nitrogen kit - PCR sản phẩm đã tinh sạch với BigDye kit - Tinh sạch sản phẩm BigDye bằng Zymmo kit - Giải trình tự gen bằng máy ABI 3130 - Phân tích kết quả giải trình tự bằng phần mềm có sẵn 637
V. ĐỌC KẾT QUẢ Kết quả được phân tích bằng phần mềm tương thích. Kết quả được đối chiếu với trình tự nucleotid trên DNA bình thường trong hệ thống dữ liệu ngân hàng gen để xác định chính xác nucleotid đột biến. 638
ĐO, CHUẨN LIỀU CHÙM ELECTRON (ĐIỆN TỬ) DÙNG TRONG XẠ TRỊ I. ĐẠI CƢƠNG - Các máy gia tốc xạ trị đa năng lượng thường phát ra hai loại bức xạ: photon (tia- X) và electrron (điện tử) - Trong ững dụng lâm sàng, các chùm electrron thường được áp dụng điều trị ung thư da, cho các khối u có độ sâu dưới mặt da không quá 4 cm theo kỹ thuật một trường chiếu (SSD - Source Skin Distance), cho vết sẹo mổ, cho kỹ thuật bổ sung liều tại chỗ (sau một đợt với chùm photon), chẳng hạn các hạch thượng đòn - hố nách các hạch cổ v.v.. - Do bản chất vật lý của hai loại bức xạ (photon - bức xạ điện từ; electrron: bức xạ hạt, có khối lượng và điện tích), sự tương tác với môi trường vật chất nói chung, với mô cơ thể con người nói riêng sẽ theo những hiệu ứng khác nhau nên quy trình đo chuẩn liều trong xạ trị của chúng cũng tuân theo những quy tắc riêng. - Các KS vật lý xạ trị cần được trang bị đầy đủ máy đo (dosimeter), đầu đo (đetector) buồng ion hóa hình trụ và phẳng - song song. - Tùy theo năng lượng chùm electron mà có thể sử dụng buồng ion hóa hình trụ hay phẳng - song song. II. CHỈ ĐỊNH - Áp dụng cho tất cả các chùm electron của máy gia tốc xạ trị - Các mức năng lượng electron cụ thể áp dụng trong lâm sàng. III. CHUẨN BỊ 1. Ngƣời thực hiện - Kỹ sư vật lý - Kỹ thuật viên đo liều 2. Phƣơng tiện, thiết bị - Máy đo liều vật lý (dosimeter) - Detector (buồng ion hóa hình trụ, buồng ion hóa phẳng - song song) - Phantom nước (hoặc chất dẻo có mật độ vật chất tương đương mô) - Dụng cụ đo áp suất môi trường, nhiệt độ khí quyển.... - Thước đo khoảng cách (cm). 639
- Tài liều hướng dẫn kỹ thuật của IAEA (TECDOC 277; 398). IV. CÁC BƢỚC TIẾN HÀNH - Thiêt lập hệ đo. Đặt phantom trong tại vị trí đo chuẩn (theo năng lượng chùm tia) - Lắp ráp applicator lên collimator (chuẩn theo năng lượng chùm tia và TECDOC- 398). - Kết nối hệ máy đo, gồm máy đo (dosimeter), dây cáp tín hiệu vào buồng máy - Lắp đặt detector trong phantom - Lắp đầu đo (detector) phù hợp năng lượng chùm electron và cáp tín hiệu với máy đo (detector). - Khởi động máy đo (detector), chờ khi có tín hiệu sẵn sàng. - Nạp các thông số điện áp, áp suất khí khuyển và nhiệt độ môi trường vào detector - Chọn hệ số chuẩn phù hợp cho thiết bị (cả máy đo và đầu đo) - Tiến hành đo, chuẩn liều lượng các chùm electron theo yêu cầu điều trị - Lặp lại các phép đo sao cho đủ số liệu thống kê để tính giá trị trung bình các kết quả. V. ĐỌC KẾT QUẢ - Kết quả được tính theo giá trị trung bình của tổng các phép đo - Tùy theo loại máy đo (DOSIMETER) các kết quả có thể cho trực tiếp dưới dạng suất liều tuyệt đối (absolute dose) hoặc tương đối (relative dose). - Tùy thuộc cấp độ hiện đại của phần mềm đi kèm mà các kết quả được xử trí trên hệ đo hoặc phải qua các bước tính toán và chuyển đổi thành suất liều tuyệt đối. 640