Góp phần khảo sát cơ chế di truyền của bệnh teo cơ tủy sống týp 1 (werdnig hoffmann)

Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 12 * Số 2 * 2008<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> GÓP PHẦN KHẢO SÁT CƠ CHẾ DI TRUYỀN<br /> CỦA BỆNH TEO CƠ TỦY SỐNG TÝP I (WERDNIG-HOFFMANN)<br /> Trần Diệp Tuấn*<br /> <br /> TÓM TẮT<br /> Mục tiêu: Xác định tỉ lệ gen SMN1/SMN2 ở người lành mang gen bệnh Werdnig-Hoffmann.<br /> Phương pháp: Chúng tôi dùng phản ứng khuếch đại cạnh tranh tạo ra các sản phẩm PCR của<br /> SMN1 và SMN2. Sau đó, làm đứt đoạn sản phẩm PCR của gen SMN bằng men Hinfl. Sản phẩm thu<br /> được sẽ được chạy điện di trên gel, rồi scan bằng máy ảnh Polaroid dưới tia cực tím, và phân tích đậm độ<br /> (phần mềm 1.16/ppc NIH Image) đối với hai dãi band 101 bp (SMN2) và 78 bp (SMN1). Tỉ lệ gen<br /> SMN1/SMN2 được xác định dựa trên tỉ lệ đậm độ của đoạn 78 bp/101 bp.<br /> Kết quả: 11 (73,3%) người có tỉ lệ SMN1/SMN2 là 0,5 và 1; bốn người còn lại (26,7%) có tỉ lệ là<br /> 1/3.<br /> Kết luận: Kết quả này hỗ trợ cho quan điểm cho rằng mất đoạn (deletion) chứ không phải chuyển đổi<br /> đoạn (conversion) là cơ chế di truyền chính trong bệnh Werdnig-Hoffmann.<br /> <br /> ABSTRACT<br /> THE GENE COPY RATIOS OF SMN1/SMN2 IN CARRIERS<br /> WITH TYPE I SPINAL MUSCULAR ATROPHY<br /> Tran Diep Tuan * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 12 - No 2 - 2008: 75 – 80<br /> Objective: To determine the SMN1/SMN2 ratios of carriers of Werdnig-Hoffmann disease.<br /> Methods: We used competitive PCR to amplified SMN1 and SMN2 gene products. The PCR<br /> products were digested by Hinfl. The samples were run on gel, and scanned by Polaroid camera under<br /> UV-light. Densitometric analysis was performed on the two bands that correspond to the 101 bp fragment<br /> of SMN2 and the 78 bp fragment of SMN1. The SMN1/SMN2 copy ratio was determined based on the 78<br /> bp/101 bp ratio obtained from densitometric analysis.<br /> Results: We found that the SMN1/SMN2 ratio was 0.5 or 1 in 11 (73.3%) carriers; the remaining 4<br /> (26.7%) carriers had an SMN1/SMN2 ratio of 1/3.<br /> Conclusion: The finding supports the idea that deletion rather than conversion is the main genetic<br /> event in Werdnig-Hoffmann disease.<br /> đỡ, trong khi bệnh nhân SMA type III (bệnh<br /> Kugelberg-Welander) thì có thể đi được.<br /> MỞĐẦU<br /> SMA type II là thể trung gian với sự yếu cơ<br /> Bệnh teo cơ tủy sống (SMA) là bệnh di<br /> tiến triển chậm hơn SMA type I. Tần số mắc<br /> truyền gen lặn trên nhiễm sắc thể thường,<br /> của SMA là 1 trên 10.000 lần sinh, với tần số<br /> đặc trưng bởi sự yếu liệt và teo các cơ tiến<br /> người lành mang gen bệnh là 1/50(15). Gen<br /> triển do sự thoái hóa của các tế bào vận<br /> SMN là gen gây bệnh SMA và được xác<br /> động ở sừng trước tủy sống. SMA gồm 3<br /> định là nằm trên nhiễm sắc thể 5q13(1,12).<br /> thể lâm sàng, phân loại được dựa trên thời<br /> Không liên quan đến mức độ trầm trọng<br /> điểm khởi phát và mức độ trầm trọng của<br /> của bệnh, 90-98% các bệnh nhân SMA có sự<br /> biểu hiện lâm sàng(13). Bệnh nhân SMA type<br /> mất đồng hợp tử của SMN1, do mất exon 7<br /> I (còn gọi là bệnh Werdnig-Hoffmann)<br /> hoặc 8 hoặc cả hai(6,10,16,22). Phần lớn bệnh<br /> không thể ngồi được nếu không được giúp<br /> nhân người Trung Quốc, Hàn Quốc và<br /> 75<br /> * Bộ Môn Nhi, Đại Học Y Dược TPHCM<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> Nhật có sự mất đồng hợp tử của exon 7 và 8<br /> của gen SMN1(2,8,18). Gen protein ức chế sự<br /> tự chết tế bào thần kinh (neuronal apoptosis<br /> inhibitory protein: NAIP) là gen nằm gần<br /> với gen SMN. Chúng bị mất đoạn trong<br /> 50% bệnh nhân bị SMA type I(17). Tần suất bị<br /> mất gen NAIP trong bệnh SMA thể nhẹ xảy<br /> ra ít hơn so với trong bệnh SMA type I, điều<br /> này có lẽ phản ảnh mức độ rộng của sự mất<br /> đoạn trên nhiễm sắc thể SMA(21,25). Gen<br /> SMN là gen cần cho sự tồn tại và sống còn<br /> của các tế bào thần kinh vận động tủy sống.<br /> Gen SMN gồm hai gen khá giống nhau, đó<br /> là SMN1 và SMN2 trên nhiễm sắc thể 5q13.<br /> Cả hai gen đều có độ dài khoảng 20 kb<br /> nhưng chỉ khác nhau có 5 nucleotide. Ở<br /> bệnh nhân bị SMA, có ít nhất một gen<br /> SMN2 còn sót lại. Người bình thường có<br /> một gen SMN1 và một gen SMN2 trên mỗi<br /> nhiễm sắc thể, do đó, tỉ lệ SMN1/SMN2 là 1.<br /> Tỉ lệ gen SMN1/SMN2 ở cha mẹ của bệnh<br /> nhân đã được sử dụng để phân tích vai trò<br /> của số gen SMN2 trên độ nặng của bệnh<br /> SMA. McAndrew và cs, và Velasco và cs<br /> nhận thấy rằng ở người Tây Ban Nha, Mỹ<br /> và Canada thì cha mẹ của bệnh nhân bị<br /> SMA type II và III có tỉ lệ SMN1/SMN2 nhỏ<br /> hơn so với cha mẹ của bệnh nhân SMA type<br /> I(11,22). Tuy nhiên, Schwartz và cs(20) lại không<br /> ghi nhận hiện tượng này trong gia đình<br /> bệnh nhân người Scandinavi. Ngược lại,<br /> Nishio và cs lại ghi nhận tỉ lệ SMN1/SMN2<br /> bằng 2 ở hai trong số bốn người lành mang<br /> gen bệnh, họ là cha mẹ của hai bệnh nhi<br /> người Nhật bị SMA type I(14). Tác giả tiên<br /> đoán rằng tần suất tỉ lệ SMN1/SMN2 là 2 ở<br /> người lành mang gen bệnh trong dân Nhật<br /> cao hơn so với dân phương Tây(14). Chúng<br /> tôi muốn tìm hiểu liệu tiên đoán này có<br /> đúng không. Do đó, chúng tôi tiến hành xác<br /> định tỉ lệ SMN1/SMN2 trên 15 người Nhật<br /> là người lành mang gen bệnh SMA type I.<br /> Để xác định tỉ lệ SMN1/SMN2, điều quan<br /> trọng là phải phân biệt được hai loại gen<br /> này. Chúng tôi dùng phản ứng khuếch đại<br /> cạnh tranh (competitive polymerase chain<br /> reaction: competitive PCR) bằng cách dùng<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 12 * Số 2 * 2008<br /> mồi ghép cặp sai (mismatch primer) để tạo<br /> nên các vị trí hạn chế khác nhau (restriction<br /> site) (xem thêm phần Đối Tượng và Phương<br /> Pháp Nghiên Cứu) trên gen SMN1 và<br /> SMN2. Điều này cho phép chúng tôi phân<br /> biệt được SMN1 với SMN2, qua đó xác định<br /> được tỉ lệ SMN1/SMN2.<br /> <br /> ĐỐI TƢỢNG - PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN<br /> CỨU<br /> Đối tƣợng nghiên cứu<br /> Đối tượng là 14 cha mẹ và 1 người em<br /> ruột bình thường về lâm sàng của 7 gia đình<br /> với 9 bệnh nhân bị SMA type I. Bảy gia đình<br /> này không có mối liên hệ huyết thống với<br /> nhau. Tất cả 9 bệnh nhân đều được xếp loại<br /> là SMA type I theo tuổi khởi phát và mốc<br /> vận động đạt được của trẻ dựa trên tiêu<br /> chuẩn<br /> của<br /> International<br /> SMA<br /> (13)<br /> Consortium . Tất cả bệnh nhân đều có<br /> đồng hợp tử mất đoạn exon 7 và 8(18). Phân<br /> tích haplotype của tất cả các bệnh nhân và<br /> thành viên trong gia đình cho thấy tất cả 14<br /> cha mẹ và 1 người em ruột đều là người<br /> lành mang gen bệnh (xem them chi tiết<br /> trong tài liệu tham khảo 3). Ngoài ra, nhóm<br /> chứng gồm 19 người tình nguyện bình<br /> thường cũng tham gia trong nghiên cứu<br /> này.<br /> <br /> Phƣơng pháp xác định tỉ lệ gen<br /> SMN1/SMN2<br /> Chúng tôi dùng phản ứng khuếch đại<br /> cạnh tranh (competitive PCR: PCR cạnh<br /> tranh) dựa trên mồi SMN ghép cặp sai như<br /> đã được mô tả bởi Wirth và cs(25). Mồi ghép<br /> cặp sai sẽ tạo ra các vị trí hạn chế HinfI khác<br /> nhau trên SMN1 và SMN2. Mồi theo chiều<br /> xuôi (forward primer) là mồi ghép cặp sai<br /> được thiết kế dựa trên trình tự các nucleotid<br /> của SMN1 exon 7 (SMN7F: 5’CTTCCTTTTATTTTCCTTACAGGGATT3’), và mồi ngược (reverse primer) trên<br /> intron<br /> 7<br /> (SMN7R:<br /> 5’TCCACAAACCATAAAGTTTTAC-3’). Sản<br /> phẩm PCR của gen SMN sẽ có chiều dài là<br /> 76<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> 135 bp. Phản ứng PCR cạnh tranh được<br /> thực hiện trong 20 µl hỗn hợp phản ứng,<br /> bao gồm 30 ng DNA của bộ gen (genomic<br /> DNA), 1 x Perkin-Elmer dung dịch đệm<br /> PCR, 200 µM của dNTP, 0,6 U Taq<br /> polymerase (Perkin-Elmer), và 10 pmol cho<br /> mỗi mồi SMN7F và SMN7R. Các điều kiện<br /> tiến hành phản ứng theo chu kỳ được thực<br /> hiện như đã được mô tả bởi Wirth và cs(25)<br /> với một chút thay đổi, là mẫu của chúng tôi<br /> được khuếch đại với 35 chu kỳ.<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 12 * Số 2 * 2008<br /> phẩm này sẽ được chạy điện di trên gel<br /> polyacrylamide 16% ở điện thế 100 V trong<br /> 3 giờ, rồi được nhuộm bằng ethidium<br /> bromide, rồi scan gel đó bằng máy ảnh<br /> Polaroid dưới tia cực tím, và phân tích đậm<br /> độ bằng phần mềm 1.16/ppc NIH Image.<br /> Phân tích đậm độ được thực hiện đối với<br /> hai dải band trên cùng, tương ứng với đoạn<br /> 101 bp của SMN2 và đoạn 78 bp của SMN1<br /> (Hình 1). Tỉ lệ gen SMN1/SMN2 được xác<br /> định dựa trên tỉ lệ đậm độ của đoạn 78<br /> bp/101 bp.<br /> Để kiểm tra tính khả thi của việc xác<br /> định tỉ lệ gen SMN1/SMN2 bằng phân tích tỉ<br /> lệ đậm độ, chúng tôi xác lập khoảng chuẩn<br /> về tỉ lệ đậm độ bằng cách xử dụng các hỗn<br /> hợp biết trước với tỉ lệ SMN1/SMN2 khác<br /> nhau. Gen SMN1 và SMN2 được khuếch<br /> đại bằng hai phản ứng PCR riêng rẻ. Một<br /> PCR để khuếch đại SMN1 từ một bệnh<br /> nhân với một bệnh lý thần kinh khác, người<br /> này chỉ có SMN1 mà không có SMN2.<br /> Trong khi SMN2 được khuếch đại từ mẫu<br /> <br /> Hình 1. Sản phẩm PCR sau khi được ủ với men<br /> HinfI và điện di trên gel polyacrylamide 16%.<br /> Hai dải band trên cùng, tương ứng với đoạn<br /> 101 bp của SMN2 và đoạn 78 bp của SMN1. Tỉ<br /> lệ gen SMN1/SMN2 được xác định dựa trên tỉ<br /> lệ đậm độ của đoạn 78 bp/101 bp. Chúng ta thấy<br /> ở người lành mang gen bệnh vẫn còn đủ gen<br /> SMN1 và SMN2, như ở người cha (F) và mẹ<br /> (M). Trong khi bệnh nhân (P) thì không có gen<br /> SMN1 nhưng vẫn còn gen SMN2.<br /> Sau khi có sản phẩm PCR của SMN,<br /> chúng tôi ủ 10 µl sản phẩm PCR với 15 U<br /> men HinfI (Toyobo) ở nhiệt độ 37°C trong 3<br /> giờ, để làm đứt đoạn gen SMN. Do sản<br /> phẩm PCR của SMN2 chỉ có một vị trí hạn<br /> chế HinfI nên chúng sẽ bị cắt thành hai đoạn<br /> với chiều dài là 101 và 34 bp, trong khi sản<br /> phẩm PCR của SMN1 có hai vị trí hạn chế<br /> HinfI nên chúng sẽ bị cắt thành ba đoạn có<br /> chiều dài là 78, 34, và 23 bp. Sau đó các sản<br /> <br /> của một bệnh nhân SMA, người này không<br /> có gen SMN1 nhưng còn SMN2. Sản phẩm<br /> của hai PCR này được làm tinh khiết bằng<br /> gel agarose với bộ kit chiết xuất ADN<br /> SupreTM -02 và -01 (Takara-Biochemicals).<br /> Các khuôn mẫu (template) pha trộn 9000<br /> bản sao (copies) SMN1 với số lượng khác<br /> nhau<br /> <br /> của<br /> <br /> SMN2<br /> <br /> để<br /> <br /> tạo<br /> <br /> các<br /> <br /> tỉ<br /> <br /> lệ<br /> <br /> SMN1/SMN2 khác nhau là 2, 1, 0,5 và 1/3.<br /> Phản ứng PCR cạnh tranh với các tỉ lệ<br /> SMN1/SMN2 khác nhau này được tiến hành<br /> tương tự như đã nêu ở trên.<br /> <br /> KẾT QUẢ<br /> Để kiểm tra tính khả thi của việc xác<br /> định tỉ lệ gen SMN1/SMN2 bằng tỉ lệ đậm<br /> độ, chúng tôi xác lập khoảng chuẩn và<br /> đường biểu diễn về tỉ lệ đậm độ bằng cách<br /> <br /> 77<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 12 * Số 2 * 2008<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> dùng các hỗn hợp khuôn mẫu với tỉ lệ<br /> SMN1/SMN2 khác nhau đã được biết trước.<br /> Chúng tôi thấy có mối tương quan dương<br /> tính rõ rệt giữa tỉ lể phân tử (tỉ lệ khuôn<br /> mẫu SMN1/SMN2) và tỉ lệ sản phẩm PCR<br /> (tỉ lệ đậm độ SMN1/SMN2) trong khoảng<br /> 0-2 (Hình 2), với hệ số tương quan là r =<br /> 0,959. Điều này chứng tỏ rằng tỉ lệ gen<br /> SMN1/SMN2 có thể được xác định bằng<br /> cách phân tích đậm độ của các sản phẩm<br /> PCR.<br /> <br /> Tỉ lệ đậm độ<br /> <br /> Sau đó, chúng tôi đã tiến hành xác định<br /> tỉ lệ gen SMN1/SMN2 của 15 người lành<br /> mang gen bệnh và 19 người chứng bình<br /> thường. Tỉ lệ SMN1/SMN2 của mỗi người<br /> rơi vào một trong bốn nhóm là 1/3, 0,5, 1 và<br /> 2, mà không có trùng lắp. Điều đó chứng tỏ<br /> một cách tương ứng rằng số gen SMN1 là<br /> 1/3, phân nửa, bằng hoặc gấp đôi số gen của<br /> SMN2. Bốn người lành mang gen bệnh<br /> (26,7%) có tỉ lệ là 1/3, sáu người (40%, trong<br /> đó có người em) có tỉ lệ là 0,5, và năm người<br /> (33,3%) có tỉ lệ là 1 (Bảng 1 và Bảng 2).<br /> <br /> Không có người lành mang gen bệnh<br /> nào có tỉ lệ là 2 hoặc không có gen SMN2. Ở<br /> nhóm chứng, 2 người (10,5%), 12 người<br /> (63,2%) và 5 người (26,3%) có tỉ lệ tương<br /> ứng là 0,5, 1 và 2. Không có người chứng<br /> nào có tỉ lệ là 1/3.<br /> Bảng 1. Tỉ lệ SMN1/SMN2 của người lành<br /> mang gen bệnh SMA type I (NLMGB SMA I)<br /> và người chứng bình thường (NCBT)<br /> Tỉ lệ<br /> SMN1/SMN2<br /> 1/3<br /> 0,5<br /> 1<br /> 2<br /> Tổng cộng<br /> <br /> Phạm vi tỉ lệ NLMGB SMA<br /> đậm độ<br /> I<br /> 0,86 – 0.90<br /> 4 (26,7)*<br /> 0,98 – 1,04<br /> 6 (40.0)<br /> 1,06 – 1,15<br /> 5 (33,3)<br /> 1,17 – 1,25<br /> 0<br /> 15<br /> <br /> NCBT<br /> 0<br /> 2 (10,5)<br /> 12 (63,2)<br /> 5 (26,3)<br /> 19<br /> <br /> * Số trong ngoặc đơn là giá trị phần trăm.<br /> Bảng 2. Phân bố của tỉ lệ SMN1/SMN2 trên<br /> người lành mang gen bệnh SMA type I<br /> (NLMGB SMA I); F: cha; M: mẹ và S: em;<br /> Gia đình<br /> thứ<br /> 1<br /> 2<br /> 3<br /> 4<br /> 5<br /> 6<br /> 7<br /> <br /> NLMGB SMA I<br /> 1/3<br /> <br /> SMN1/SMN2<br /> 0,5<br /> 1<br /> M<br /> F<br /> M, S<br /> F<br /> F, M<br /> F<br /> M<br /> <br /> F, M<br /> F, M<br /> F, M<br /> <br /> BÀNLUẬN<br /> <br /> Tỉ lệ SMN1/SMN2<br /> <br /> Hình 2. Đường biểu diễn chuẩn PCR cạnh<br /> tranh. Trục hoành là tỉ lệ các hỗn hợp khuôn<br /> mẫu với tỉ lệ SMN1/SMN2 khác nhau đã được<br /> biết trước (1/3, 0,5, 1 và 2). Trục tung là tỉ lệ<br /> đậm độ của sản phẩm PCR cạnh tranh từ các<br /> khuôn mẫu với tỉ lệ SMN1/SMN2 khác nhau.<br /> Hệ số tương quan r là 0,959.<br /> <br /> Bệnh nhân SMA có nhiều kiểu hình lâm<br /> sàng khác nhau, từ thể nhẹ cho đến thể<br /> nặng. Tất cả các thể đều có sự mất gen<br /> SMN1 đồng hợp tử, nhưng không có đột<br /> biến chuyên biệt nào trên gen SMN1 có thể<br /> giải thích cho các thể lâm sàng khác<br /> nhau(1,6,10,12). Nghiên cứu của Wirth và cs cho<br /> thấy rằng kích thước của sự mất đoạn liên<br /> quan đến độ nặng của bệnh(24), bởi vì một số<br /> gen lân cận của SMN1 được xem là có vai<br /> trò bù trừ và điều chỉnh thể lâm sàng của<br /> SMA, ví dụ như gen SARF1 và btfp44(19). Do<br /> đó, mất đoạn càng rộng thì thể lâm sàng<br /> càng nặng. Gen SMN2 là gen nằm gần với<br /> SMN1 trên vùng SMA của nhiễm sắc thể<br /> <br /> 78<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> 5q13, và giống gần như hoàn toàn với<br /> SMN1. Có nhiều protein xuất phát từ gen<br /> SMN2, do có sự kết nối ở những vị trí khác<br /> nhau trong quá trình giải mã(4,5) Trong số<br /> đó, chủ yếu là protein không có các axit<br /> amin được mã hóa bởi exon 7, một số lượng<br /> nhỏ là protein với chiều dài đầy đủ giống<br /> hoàn toàn với protein của SMN1, và một số<br /> protein khác với các tỉ lệ khác nhau. Chính<br /> lượng nhỏ protein có chiều dài đầy đủ này<br /> có vai trò bù trừ quan trọng khi bị mất gen<br /> SMN1(4,23). Ngoài ra, Hsieh-Li và cs đã<br /> chứng minh rằng có sự tương quan mạnh<br /> mẽ giữa số lượng gen SMN2 và thể lâm<br /> sàng của SMA ở chuột(7). Nghiên cứu của<br /> chúng tôi cũng cho thấy rằng những bệnh<br /> nhân bị SMA type I có tần suất mất đoạn<br /> vùng SMA rộng trên 5q13(3,9). Tất cả những<br /> điều này chứng tỏ rằng có sự mất kèm theo<br /> của các gen bù trừ lân cận trên bệnh SMA<br /> type I. Nếu một người lành mang gen bệnh<br /> SMA type I có mất đoạn rộng, mất cả SMN1<br /> và SMN2 trên nhiễm sắc thể bệnh, thì tỉ lệ<br /> SMN1/SMN2 của họ vẫn là 1/1 do họ có một<br /> SMN1 và một SMN2 trên nhiễm sắc thể<br /> bình thường. Một người lành mang gen<br /> bệnh có tỉ lệ SMN1/SMN2 là 1:2 là do nhiễm<br /> sắc thể bệnh chỉ bị mất đoạn ngắn chứa<br /> SMN1. Vì phần lớn các bệnh nhân SMA<br /> type I trong lô nghiên cứu của chúng tôi có<br /> mất đoạn rộng(3,9), chúng tôi mong đợi tỉ lệ<br /> SMN1/SMN2 không lớn hơn 1 trong phần<br /> lớn các người lành mang gen bệnh. Kết quả<br /> nghiên cứu cho thấy tất cả người lành mang<br /> gen bệnh trong nghiên cứu này đều có tỉ lệ<br /> nhỏ hơn hoặc bằng 1. Mặc dù Nishio và cs<br /> cho rằng tỉ lệ SMN1/SMN2 là 2 ở bệnh nhân<br /> SMA type I là đặc trưng của bệnh SMA ở<br /> người Nhật(14), kết quả nghiên cứu của<br /> chúng tôi không ủng hộ nhận xét này.<br /> Ngược lại, kết quả này phù hợp với các kết<br /> quả nghiên cứu được thực hiện ở các nước<br /> phương Tây. Velasco và cs nhận thấy rằng<br /> không có người nào trong 112 cha mẹ của<br /> bệnh nhận SMA type I người Tây Ban Nha<br /> có tỉ lệ SMN1/SMN2 là 2(22). Schwartz và cs<br /> cũng không ghi nhận một trường hợp nào<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 12 * Số 2 * 2008<br /> có tỉ lệ là 2 trong 60 cha mẹ của bệnh nhân<br /> người Scandinavi(20). McAndrew và cs chỉ<br /> ghi nhận 1 trường hợp (1,3%) trong tổng số<br /> 79 cha mẹ có tỉ lệ SMN1/SMN2 là 2 ở người<br /> Mỹ và Canada(11). Nghiên cứu của chúng tôi<br /> không ghi nhận một trường hợp nào có tỉ lệ<br /> SMN1/SMN2 là 2.<br /> Để kết luận, mặc dù đã có nghiên cứu<br /> cho rằng cơ sở di truyền học của bệnh SMA<br /> ở bệnh nhân người Nhật khác với người<br /> phương Tây, kết quả nghiên cứu của chúng<br /> tôi cho thấy tỉ lệ SMN1/SMN2 ở người lành<br /> Nhật mang gen bệnh SMA type I phù hợp<br /> với kết quả nghiên cứu được thực hiện ở<br /> người phương Tây. Kết quả này cũng hổ trợ<br /> cho quan điểm cho rằng mất đoạn chứ<br /> không phải chuyển đổi đoạn là cơ chế di<br /> truyền chính trong bệnh SMA type I.<br /> <br /> TÀI LIỆU THAM KHẢO<br /> 1.<br /> <br /> 2.<br /> <br /> 3.<br /> <br /> Brzustowicz LM, Lehner T, Castilla LH, Penchaszadeh<br /> GK, Wilhelmsen KC, Daniels R, et al. (1990) Genetic<br /> mapping of chronic childhood-onset spinal muscular<br /> atrophy to chromosome 5q11.2-13.3. Nature 344:540541.<br /> Chang JG, Jong YJ, Huang JM, Wang WS, Yang TY,<br /> Chang CP, et al. (1995) Molecular basis of spinal<br /> muscular atrophy in Chinese. Am Hum Genet 57:15031505.<br /> Diep Tran T, Kroepfl T, Saito M, Nagura M, Ichiseki H,<br /> Kubota M, Toda T, Sakakihara Y. (2001) The gene<br /> copy ratios of SMN1/SMN2 in Japanese carriers with<br /> type<br /> <br /> I<br /> <br /> spinal<br /> <br /> muscular<br /> <br /> atrophy.<br /> <br /> Brain<br /> <br /> Dev.;<br /> <br /> 23(5):321-6.<br /> 4.<br /> <br /> 5.<br /> <br /> 6.<br /> <br /> 7.<br /> <br /> 8.<br /> <br /> Gavrulev DK, Shi X, Das K, Gilliam TC, Wang CH.<br /> (1998) Differential SMN2 expression associated with<br /> SMA severity. Nat Genet 20:230-231 (Letter).<br /> Gennarelli M, Lucarelli M, Capon F, Pizzuti A, Merlini<br /> L, Angelini C, et al. (1995) Survival motor neuron gene<br /> transcript analysis in muscles from spinal muscular<br /> atrophy patients. Biochem Biophys Res Commun<br /> 213:342-348.<br /> Hahnen E, Forkert R, Merke C, Rudnik-Schoneborn S,<br /> Schonling J, Zerres K, et al. (1995) Molecular analysis of<br /> candidate genes on chromosome 5q13 in autosomal<br /> recessive spinal muscular atrophy: evidence of<br /> homozygous deletions of the SMN gene in unaffected<br /> individuals. Hum Mol Genet 4:1927-1933.<br /> Hsieh-Li HM, Chang JG, Jong YJ, Wu MH, Wang NM,<br /> Tsai CH, et al. (2000) A mouse model for spinal<br /> muscular atrophy. Nat Genet 24:66-70 (Letter).<br /> Ishikawa Y, Ishikawa Y, Minami R. (1996) Survival<br /> motor neuron and neuronal apoptosis inhibitory<br /> protein gene deletion analysis of childhood spinal<br /> <br /> 79<br /> <br />