Hoạt độ enzyme

Chia sẻ: Nguyen Hoang Anh | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:12

Thêm vào BST

Báo xấu

1.642
lượt xem 137
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Khác với trong hoá học phân tích bình thường, trong enzyme học, người ta không định lượng enzyme một cách trực tiếp mà thường xác định gián tiếp thông qua xác định độ hoạt động (còn gọi là hoạt độ ) của enzyme.

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Hoạt độ enzyme

Ch th o lu n Ho t enzyme
Khái quát vê Enzim Khá Enzim Enzim là m t h p ch t xúc tác sinh h c có b n ch t là Enzim PROTEIN Có cư ng l c xúc tác m nh, tính c hi u cao, không n h tí ng không c... Enzim ư c s n xu t b i các tê bào s ng ( ng v t) bà Enzim ng ng Ví d : ng v t: da dày l n, t y t ng, tim ... da dà ng ng tim Th c v t: u u, d a, thóc m m, sung, va, ... thó sung, va ... Vi sinh v t: n m men, n m m c, ... Vi sinh men,
Khái ni m Kh Khác v i trong hóa h c phân tích bình thư ng, trong ng trong enzyme h c, ngư i ta không nh lư ng enzyme m t enzyme ng nh ng enzyme cách tr c ti p mà thư ng xác nh gián ti p thông ng nh qua xác nh ho t ng (còn g i là ho t ) qua nh ho ng c a enzyme. Trong phán ng có enzyme xúc tác, s enzyme. Trong ng enzyme ng c a enzyme ư c bi u hi n b ng cách làm ho t ho ng enzyme ng thay i các tính ch t v t lý, hóa lý cũng như tính ch t hóa h c c a h n h p ph n ng. Theo dõi nh ng ng Theo dõi ng bi n i ó có th bi t ư c chính xác m c ho t bi ho ng c a enzyme thông qua xác nh cơ ch t b m t ng enzyme thông qua nh i hay lư ng s n ph m ư c t o thành trong ph n hay ng ng. ng
Xác nh ho t ô Enzim Xá nh Enzim M c ô ho t ng (ho t ô) c a Enzim dùng ê: ho ng + ánh gia m c ô m nh hay y u (cư ng ô xúc tác) ng xú nh hay c a Enzim - Là lư ng Enzim có kha năng xúc tác chuy n hóa m t lư ng cơ ch t ng kha ng nh ktc (nhi t ô, áp su t t i ưu) nh t nh trong th i gian nh t nh nh - Xác nh ho t ô c a Enzim thông qua xác nh lư ng cơ ch t m t qua xá nh nh ng i hay lư ng s n ph m ư c t o thành trư c ph n ng hay ng ng + ánh gia m c ô tinh khi t c a Enzim tinh ê tách enzim thư ng có 3 nhóm phương pháp tá nhó ng - Nhóm phương pháp k t t a ( k t t a b ng dung môi h u cơ, mu i ng dung môi mu trung tính ...) - Nhóm phương pháp l ng-l ng ng ng - Nhóm phương pháp s c ki ( s c ki trao i ion, l c gel) trao ion,
Phương pháp xác nh ho t enzyme Ph nh enzyme xác nh ho t c a enzyme các d ch chi t ho c nh enzyme ch ch ph m ngư i ta thư ng dùng các phương pháp v t ch ph ng lý ho c hóa h c. Các phương pháp, so màu, o khí, o so nh t, chu n ... ư c dùng ph phân c c, o phân nh chu bi n trong nghiên c u nh lư ng các ph n ng bi nh ng ng enzyme.
M t s phương pháp xác nh ho t ph nh enzyme enzyme V nguyên t c có th chia ra ba nhóm phương pháp sau: nguyên chia 1. o lư ng cơ ch t b m t i hay lư ng s n ph m ư c t o ng hay ng thành trong m t th i gian nh t nh ng v i m t n ng ô nh ng ng Enzim nh t nh Enzim nh 2. o th i gian c n thi t ê thu ư c m t lư ng bi n thiên thu ng nh t nh c a cơ ch t hay s n ph m ng v i m t n ng ô nh hay ng ng Enzim nh t nh Enzim nh 3. Ch n n ng ô Enzim như thê nào ê trong m t th i gian Ch nà ng Enzim trong nh t nh thu ư c sư bi n thiên nh t nh vê cơ ch t hay nh bi nh hay s n ph m
ơn v c a ho t enzyme enzyme a, ơn v Enzim qu c t (UI) là lư ng Enzim có kha a, Enzim UI) ng kha năng xúc tác làm chuy n hóa ư c m t micromol cơ ch t sau m t phút i u ki n tiêu chu n 1 UI = 1 mol cơ ch t/giây UI t/giây b, Katal (kat) là lư ng Enzim có kha năng xúc tác làm b, Katal ng kha chuy n hóa ư c 1 mol cơ ch t sau m t giây iu mol ki n tiêu chu n. 1 Kat = 1 mol cơ ch t/giây Kat t/giây 1 UI = * 10-6 Kat = 16,67 nKat (nanoKatal) nKat
ơn v c a ho t enzyme enzyme i v i ch ph m enzyme, ngoài vi c xác nh m c ph enzyme, ngo nh ho t ngcòn c n ph i ánh giá s ch c a nó. i ho ngcòn ch lư ng c trưng cho s ch c a ch ph m enzyme là ng ch ph enzyme ho t riêng. riêng Ho t riêng c a m t ch ph m enzyme là s ơn v - riêng ph enzyme enzyme/ 1mg protein (U/mg) cũng có th 1g ch ph m ch ph ho c 1 ml dung d ch enzyme. Thông thư ng hàm ml ch enzyme. Thông ng lư ng protein ư c xác nh b ng phương pháp ng protein nh ng Lowry. Khi ã bi t kh i lư ng phân t c a enzyme thì có Lowry. Khi ng enzyme th th tính ho t phân t . phân Ho t phân t là s phân t cơ ch t ư c chuy n - phân phân hóa b i m t phân t enzyme trong m t ơn v th i gian. trong th
Chú ý: Ch Cũng c n chú ý r ng trong m t s trư ng h p nh ng tr n g nh nghĩa v ơn v ho t enzyme trên không th áp ho trên d ng ư c. N u c n thi t chúng ta s ưa ra các i u ng ki n thí nghi m tương i ho c nh nghĩa c a các nh ơn v khác. nơi có nhi u hơn m t m i liên k t c a kh phân t cơ ch t b t n công thì m t ơn v ho tho enzyme là lư ng enzyme có kh năng xúc tác làm ng enzyme chuy n hóa m t micro - ương lư ng c a nhóm liên micro ng i u ki n xác nh. nơi có hai quan sau 1 phút ph nh phân t gi ng nhau ph n ng v i nhau thì 1 ơn v gi ng ng là lư ng enzyme xúc tác cho s chuy n hóa ho t ho ng enzyme chuy c a 2 µ mol cơ ch t sau 1 phút. mol ph
Ví d : Xác nh ho t enzyme nh eperoxidase eperoxidase Enzyme eperoxidase ư c tách chi t t c c i tr ng. S d ng Enzyme eperoxidase ng ng (NH4)2so4 thích h p dung dich enzyme tách ư c t i n ng dung dich enzyme ng (NH4) xác nh ho t c a enzyme. L y 2 dãy bình tam giác nh enzyme. dãy tam gi 100ml, dãy i ch ng và dãy thí nghi m 2ml nư c c t, 2ml 100ml, dãy ng 2ml 2ml m photphat (pH = 6,0), thêm 3ml dung d ch enzyme, 1ml (pH thêm 3ml ch enzyme, thu c th Indigocamin 0,1%, l c u. Sau ó cho 2ml H2o2 thu Indigocamin 0,1%, Sau 3% và theo dõi quá trình m t màu c a Indigocamin tính theo 3% th i gian t khi b t u cho H2o2 n khi dung d ch chuy n khi dung ch sang màu vàng hơi xanh. sang
Ý nghĩa ho t enzyme ngh enzyme Ho t enzyme (còn g i là con s chuy n hóa ho c con enzyme con chuy con s vòng: turnover number) có nghĩa là ph n ng ư c vòng turnover ng xúc tác x y ra r t nhanh. Như v y, ho t phân t Nh ho phân chính là kh năng xúc tác: ho t phân t càng cao thì ch ho phân kh năng xúc tác càng l n. Ví d ngư i ta ã xác nh ng nh ư c ho t phân t cao c a m t s enzyme tinh khi t phân cao tinh như catalase (5,6 x 106) acetyl - cholinesterase (3,0 x (5,6 cholinesterase 106), β-amylase (1,2 x 106). amylase
The end C m ơn cô và các b n ã theo dõi.