zunia.vn

Tuyển sinh 2024 dành cho Gen-Z

zunia.vn

» Luận Văn - Báo Cáo

» Báo cáo khoa học

Nghiên cứu sự nhân lên tối ứu của dòng Virus Rota VNHR 203 - 030 trên tế bào thận khỉ Tiên Phát Macaca

Chia sẻ: Sunshine_3 Sunshine_3 | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:4

Báo xấu

50
lượt xem 7
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Việt Nam là nước đang phát triển có dân số gần 80 triệu người, với tỷ lệ sinh hàng năm lớn (1,52 triệu trẻ em sơ sinh trong 1 năm) và tỷ lệ tử vong ở trẻ dưới 5 tuổi cao (42,5 trẻ/ 1000 trẻ /năm hay 9880 trẻ bị chết /năm) trong số đó có 15,4% là do bị tiêu chảy [5]. Theo kết quả giám sát bệnh tiêu chảy trong 5 năm 1998 đến 2003 tại các bệnh viện lớn của nước ta thì tiêu chảy do căn nguyên virut rota chiếm 45% đến 60% trẻ vào viện do tiêu chảy. Nếu tỷ lệ chết do virut rota...

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Nghiên cứu sự nhân lên tối ứu của dòng Virus Rota VNHR 203 - 030 trên tế bào thận khỉ Tiên Phát Macaca

TCNCYH 29 (3) - 2004 Nghiªn cøu sù nh©n lªn tèi −u cña dßng virut Rota VNHR 203-030 trªn tÕ bµo thËn khØ tiªn ph¸t Macaca Mulatta Lª ThÞ Lu©n Trung t©m Khoa häc S¶n xuÊt V¨cxin Sabin VNHR 203-30 lµ chñng virut rota ng−êi G4P6,8; ®−îc ph©n lËp tõ bÖnh phÈm ph©n cã nguån gèc tõ bÖnh nhi nam 9 th¸ng tuæi vµo viÖn Xanh P«n v× tiªu ch¶y cÊp n¨m 2000. Chñng nµy lµ øng cö viªn ®Ó s¶n xuÊt v¨cxin phßng bÖnh tiªu ch¶y cho trÎ em ViÖt Nam. LiÒu g©y nhiÔm trªn tÕ bµo thËn khØ tiªn ph¸t Macaca Mulatta lµ 0,1 FFU/1 tÕ bµo. i. §Æt vÊn ®Ò HiÖn nay, trªn thÕ giíi c¸c nhµ khoa häc ViÖt Nam lµ n−íc ®ang ph¸t triÓn cã d©n ®· nghiªn cøu rÊt nhiÒu vÒ virut rota, ®Æc biÖt sè gÇn 80 triÖu ng−êi, víi tû lÖ sinh hµng n¨m lµ nghiªn cøu s¶n xuÊt v¨cxin phßng bÖnh lín (1,52 triÖu trÎ em s¬ sinh trong 1 n¨m) vµ nµy. øng cö viªn s¸ng gi¸ nhÊt trong s¶n xuÊt tû lÖ tö vong ë trÎ d−íi 5 tuæi cao (42,5 trÎ/ v¨cxin lµ chñng virut rota dùa trªn c¸c týp g©y 1000 trÎ /n¨m hay 9880 trÎ bÞ chÕt /n¨m) bÖnh cho trÎ em hoÆc ®éng vËt. C¸c týp nµy trong sè ®ã cã 15,4% lµ do bÞ tiªu ch¶y [5]. ®−îc ph©n lËp tõ bÖnh phÈm ph©n cña trÎ hay Theo kÕt qu¶ gi¸m s¸t bÖnh tiªu ch¶y trong 5 ®éng vËt, sau ®ã ®−îc dïng ®Ó t¹o chñng n¨m 1998 ®Õn 2003 t¹i c¸c bÖnh viÖn lín cña v¨cxin trªn c¸c dßng tÕ bµo theo nh÷ng qui n−íc ta th× tiªu ch¶y do c¨n nguyªn virut rota tr×nh kh¸c nhau. Cho ®Õn ®Çu n¨m 2004 mét chiÕm 45% ®Õn 60% trÎ vµo viÖn do tiªu sè øng cö viªn v¨cxin sèng gi¶m ®éc lùc ch¶y. NÕu tû lÖ chÕt do virut rota còng theo tû phßng bÖnh tiªu ch¶y do virut rota ®ang tiÕn lÖ ®ã hoÆc mét nöa tû lÖ ®ã th× tû lÖ tö vong do hµnh nghiªn cøu thö nghiÖm l©m sµng giai nguyªn nh©n nµy lµ 4% ®Õn 8% trong tæng sè ®o¹n cuèi tr−íc khi ®−îc cÊp giÊy phÐp sö trÎ em d−íi 5 tuæi/n¨m. Nh− vËy trong suèt 5 dông nh− v¨cxin tõ chñng G1P8 (Rotarix) cña n¨m ®Çu tiªn cø 280-560 trÎ cã 1 trÎ chÕt do h·ng Glaxo Smith Lines; G10P12 cña Lan virut rota/n¨m [5]. §èi víi trÎ vµo viÖn, tèi Ch©u Trung Quèc; G3P6 cña thiÓu trÎ ph¶i mÊt mét tuÇn n»m viÖn, cha mÑ Australia;.G1,G2,G3,G4P8 (RotateqT) cña cña trÎ ph¶i nghØ viÖc Ýt nhÊt mét tuÇn ®Ó Merk,... ch¨m sãc chóng do vËy chi phÝ cho ®i l¹i, Cïng víi c¸c n−íc trªn thÕ giíi, n−íc ta thuèc men lµ rÊt tèn kÐm. Theo thèng kª cña thùc hiÖn gi¸m s¸t bÖnh tiªu ch¶y do virut Mü, hµng n¨m chi phÝ cho thuèc men ®iÒu trÞ rota tõ n¨m 1998 vµ ®· x¸c ®Þnh ®−îc 4 tiªu ch¶y do virut rota lªn tíi 246 triÖu ®« la. chñng chÝnh g©y bÖnh ®ã lµ: G1; G2; G4; vµ D©n sè Mü gÊp 3 lÇn d©n sè n−íc ta vµ coi G9 [5]. Chñng G1 vµ G2 ®· ®−îc cÊy chuyÓn dÞch vô y tÕ cao h¬n gÊp 10 lÇn th× sè chi phÝ vµ nh©n lªn trªn tÕ bµo [1,3] nh−ng chØ cã cho trÎ em ViÖt Nam bÞ tiªu ch¶y còng ph¶i chñng virus rota G4P6,8 lµ thÝch nghi trªn tÕ mÊt 9 triÖu ®« la Mü t−¬ng ®−¬ng víi 135 tû bµo thËn khØ tiªn ph¸t. Chñng G4P6,8 ®ång/n¨m. Do vËy viÖc nghiªn cøu s¶n xuÊt (VNHR203) ph©n lËp tõ trÎ nam 9 th¸ng tuæi v¨cxin kh«ng nh÷ng dù phßng ®−îc c¨n bÖnh vµo viÖn Xanh P«n v× tiªu ch¶y cÊp n¨m phæ biÕn ®èi víi trÎ hiÖn nay mµ cßn gãp 2000. Chñng nµy ®−îc cÊy chuyÓn thÝch nghi phÇn quan träng trong c«ng t¸c ch¨m sãc søc 30 lÇn trªn c¸c dßng tÕ bµo thÝch hîp, ®Æc khoÎ; ®ång thêi tiÕt kiÖm chi phÝ cho c¸c gia biÖt lµ tÕ bµo thËn khØ tiªn ph¸t Macaca ®×nh cã trÎ m¾c bÖnh vµ cho toµn x· héi. Mulatta ®Ó t¹o chñng cho nghiªn cøu s¶n 9
TCNCYH 29 (3) - 2004 xuÊt v¨cxin phßng bÖnh tiªu ch¶y cho trÎ em 2 lÇn m«i tr−êng muèi c¬ b¶n Hank vµ 1 lÇn n−íc ta. §Ó virut nµy nh©n lªn trªn tÕ bµo b»ng m«i tr−êng 199 cã chÊt æn ®Þnh pH thËn khØ cã hiÖu gi¸ tèi −u trong nghiªn cøu (heppes), gi÷ phiÕn tÕ bµo víi m«i tr−êng 199 s¶n xuÊt v¨cxin, ®iÒu nhÊt thiÕt ph¶i t×m liÒu t¹i 370C ®Õn khi g©y nhiÔm virut. g©y nhiÔm thÝch hîp. Do vËy môc tiªu duy B−íc 2: Ho¹t hãa virut VNHR-203-030 nhÊt cña nghiªn cøu nµy lµ x¸c ®Þnh liÒu g©y b»ng dung dÞch trysin IX (Gibco-Mü) t¹i 37oC nhiÔm ®Ó t¹o hiÖu gi¸ cao nhÊt khi nh©n tõ 30 ®Õn 60 phót. chóng trªn tÕ bµo thËn khØ tiªn ph¸t. Pha lo·ng virus bËc 10 b»ng m«i tr−êng ii. §èi t−îng vµ ph−¬ng ph¸p 199 hoÆc DMEM cã heppes vµ kh«ng cã nghiªn cøu huyÕt thanh bª. Sö dông chñng virus rota ph©n lËp vµ cÊy B−íc 3: Hót hÕt m«i tr−êng 199 t¹i c¸c truyÒn trªn tÕ bµo thËn khØ tiªn ph¸t tõ mét giÕng tÕ bµo, cho 100µl hçn dÞch virus nång mÉu ph©n cña 1 trÎ bÞ tiªu ch¶y cÊp do virus ®é tõ 10-1 ®Õn 10-8 vµo phiÕn, mçi nång ®é 3 rota ®−îc gäi lµ VNHR-203-030. Chñng virus giÕng, ñ phiÕn t¹i 370C trong 18 giê. nµy ®−îc chuÈn ®é hiÖu gi¸ b»ng ph−¬ng B−íc 4: Cè ®Þnh tÕ bµo b»ng dung dÞch ph¸p miÔn dÞch huúnh quang trªn tÕ bµo thËn formaldehyt 15µl/ giÕng ë 40C trong 30 phót, khØ bµo thai rhesus (MA104) [2,3] vµ hiÖu gi¸ sau ®ã bá hÕt m«i tr−êng vµ ®Ó kh« tù nhiªn. tÝnh b»ng ®¬n vÞ huúnh quang trong 1ml Cho 100µl huyÕt thanh kh¸ng thá ®a gi¸ (FFU/ml). (RRV) víi tû lÖ 1/5000 (pha víi PBS 1% Nu«i tÕ bµo thËn khØ tiªn ph¸t Macaca skimmilk) nh− kh¸ng thÓ thø nhÊt, ®Ó nhiÖt ®é Mulatta b»ng m«i tr−êng LHE (Trung t©m phßng thÝ nghiÖm 1 giê, röa 3 lÇn b»ng PBS- Khoa häc S¶n xuÊt v¨cxin Sabin s¶n xuÊt) Tween vµ cho 100µl kh¸ng thÓ tinh khiÕt dª 10% huyÕt thanh bª (Gibco- Mü). T¸ch tÕ bµo g¾n huúnh quang kh¸ng IgG thá (ICN-Mü) cã thËn khØ tiªn ph¸t mét líp theo tû lÖ 1:5 vµ xanh Evanblu nh− mét kh¸ng thÓ thø 2, ®Ó nu«i chóng b»ng m«i tr−êng 199 (Trung t©m phßng thÝ nghiÖm 2 giê, sau ®ã röa vµ ®Ó kh« Khoa häc S¶n xuÊt v¨cxin Sabin s¶n xuÊt) tù nhiªn. 10% huyÕt thanh bª (Gibco-Mü). Khi tÕ bµo B−íc 5: §äc kÕt qu¶ trªn kÝnh hiÓn vi kÝn mét líp, ®Õm sè l−îng tÕ bµo vµ sau ®ã huúnh quang vËt kÝnh 10. g©y nhiÔm tÕ bµo b»ng c¸c liÒu g©y nhiÔm TÕ bµo b×nh th−êng lµ tÕ bµo MA104 b¾t kh¸c nhau: (A)3,5 tÕ bµo/ 1FFU; (B)4,5 tÕ mµu da cam ®Ëm. bµo/ 1FFU; (C) 6,3 tÕ bµo/1FFU; (D) 10 tÕ TÕ bµo nhiÔm virus lµ tÕ bµo b¾t mµu xanh bµo /1FFU; (E) 30 tÕ bµo/1FFU; (G) 32 tÕ ph¸t quang. bµo/1FFU; (H) 50 tÕ bµo/1FFU; (I) 70 tÕ bµo/1FFU; (K) 90 tÕ bµo/1FFU vµ (M) 100 tÕ HiÖu gi¸ virus lµ nång ®é pha lo·ng nhÊt bµo/1FFU. mµ t¹i ®ã ®Õm ®−îc c¸c ®iÓm huúnh quang mµu xanh cña tÕ bµo nhiÔm virut trªn mét Hçn dÞch virus thu ®−îc tõ c¸c liÒu g©y giÕng. nhiÔm trªn ®−îc b¶o qu¶n ë nhiÖt ®é -200C hoÆc -800C. Chóng ®−îc ®«ng tan 3 lÇn, sau HiÖu gi¸ virut (FFU/ml)= n x1/ log 10-x x ®ã ly t©m 3000 vßng/1phót/10phót. LÊy n−íc 10. næi vµ chuÈn ®é hiÖu gi¸ virus rota tõ c¸c mÉu Trong ®ã: n lµ sè l−îng ®iÓm huúnh thu ®−îc b»ng ph−¬ng ph¸p miÔn dÞch huúnh quang. quang nh− sau: 10-x lµ nång ®é pha lo·ng nhÊt cã thÓ ®Õm B−íc 1: Nu«i tÕ bµo MA104 mét líp trªn ®−îc ®iÓm huúnh quang. phiÕn nhùa 96 giÕng, ®¸y ph¼ng (s¶n xuÊt t¹i 10 lµ hÖ sè tÝnh hiÖu gi¸ trong 1ml. §an M¹ch-lo¹t sè 047016). Röa tÕ bµo b»ng 10
TCNCYH 29 (3) - 2004 iii. KÕt qu¶ ph¸t triÓn kÝn 1 líp b»ng m«i tr−êng LHE 10% KÕt qu¶ nghiªn cøu ®−îc tr×nh bÇy trong huyÕt thanh bª trong 7 ngµy. KhØ lÊy thËn c¸c b¶ng sau: ®−îc kiÓm tra nghiªm ngÆt vÒ c¸c t¸c nh©n ngo¹i lai theo ph−¬ng ph¸p vµ tiªu chuÈn cña B¶ng 1. HiÖu gi¸ chñng VNHR-203-030 Tæ chøc Y tÕ thÕ giíi. KhØ vµ tÕ bµo thËn khØ HiÖu gi¸ Log10n FFU/ml ®−îc chÊp nhËn ®Ó nghiªn cøu vµ s¶n xuÊt Chñng v¨cxin khi ®· qua tÊt c¶ thö nghiÖm theo yªu VNHR-203-030 7,0 cÇu cña Tæ chøc Y tÕ thÕ giíi. TÕ bµo (MA104) cã nguån gèc tõ tÕ bµo thËn bµo thai khØ rherus, ®−îc chän läc t¹o B¶ng 1 cho kÕt qu¶ hiÖu gi¸ chñng thµnh dßng tÕ bµo th−êng trùc, dßng tÕ bµo VNHR203-030 lµ 107,0FFU/ml cã thÓ cÊy chuyÓn nhiÒu lÇn mµ kh«ng ¶nh B¶ng 2. HiÖu gi¸ cña virus rota trªn c¸c h−ëng ®Õn ®Æc tÝnh cña tÕ bµo, ®−îc b¶o liÒu g©y nhiÔm kh¸c nhau qu¶n ë -1960C vµ ®−îc cung cÊp bëi Trung LiÒu Sè l−îng tÕ HiÖu gi¸ t©m Phßng chèng vµ KiÓm so¸t bÖnh tËt g©y bµo g©y CDC-Atlantta-Mü, lµ nguån tÕ bµo nh¹y c¶m nhiÔm nhiÔm/1FFU Log10n FFU/ml cho sù nh©n lªn cña virus rota vµ dïng ®Ó sö FFU/ml dông cho ph©n lËp vµ kiÓm tra hiÖu gi¸ virut A 3,5 tÕ bµo 6.84 6918309 rota. B 4,5 tÕ bµo 6.65 4466835 Virut rota nhãm A lµ virut chÝnh g©y bÖnh C 6,3 tÕ bµo 6.95 8912509 cho trÎ em d−íi 5 tuæi [4,5]. Virut nµy rÊt khã nh©n lªn vµ thÝch nghi trªn tÕ bµo mét líp cho D 10 tÕ bµo 7.08 12022644 ®Õn khi sö dông enzym trypsin ho¹t hãa virut E 30 tÕ bµo 6.76 5754399 [6]. LiÒu g©y nhiÔm virut cùc kú quan träng G 32 tÕ bµo 6.70 5011872 trong sù nh©n lªn cña virut, kh«ng ph¶i nång H 50 tÕ bµo 6.72 5248074 ®é g©y nhiÔm cao lµ t¹o ra s¶n phÈm cã hiÖu gi¸ cao, cô thÓ nh− nång ®é g©y nhiÔm tõ 3,5 I 70 tÕ bµo 6.05 1122018 tÕ bµo/ FFU ®Õn 4,5 tÕ bµo/FFU cho s¶n K 90 tÕ bµo 6.48 3019951 phÈm cã hiÖu gi¸ thÊp h¬n t¹i nång ®é 6,3 tÕ M 100 tÕ bµo 5.50 316227 bµo/FFU vµ 10 tÕ bµo/FFU. Do vËy viÖc chän ra liÒu g©y nhiÔm thÝch hîp lµ v« cïng quan träng. LiÒu g©y nhiÔm thÝch hîp l−îng virus B¶ng 2 cho thÊy hiÖu gi¸ cao t¹i 2 liÒu g©y rota tÝnh theo ®¬n vÞ FFU sö dông cho 01 tÕ nhiÔm 6,3 tÕ bµo/1FFU vµ 10 tÕ bµo/1FFU tuy bµo mµ t¹i ®ã t¹o ra s¶n phÈm cã hiÖu gi¸ nhiªn hiÖu gi¸ cao h¬n ë liÒu g©y nhiÔm lµ 10 cao nhÊt. Nh− vËy liÒu g©y nhiÔm thÝch hîp tÕ bµo/FFU (cao h¬n 1,35 lÇn so víi liÒu g©y cho chñng VNHR203-030 lµ 0,1FFU virus nhiÔm 6,3 tÕ bµo/1FFU). HiÖu gi¸ thÊp dÇn rota/ 1 tÕ bµo. LiÒu g©y nhiÔm nµy cao h¬n so khi sè l−îng tÕ bµo t¨ng vµ hiÖu gi¸ thÊp nhÊt víi liÒu g©y nhiÔm cña chñng virut b¹i liÖt lµ 100 tÕ bµo/FFU. trong s¶n xuÊt v¨cxin b¹i liÖt sèng uèng iv. Bµn luËn (0,0033PFU virus b¹i liÖt/1 tÕ bµo thËn khØ TÕ bµo thËn khØ tiªn ph¸t Macaca Mulatta tiªn ph¸t) vµ còng cao h¬n liÒu g©y nhiÔm lµ tÕ bµo ®−îc t¸ch tõ tæ chøc thËn khØ chñng virut viªm gan A trong s¶n xuÊt v¨cxin Macaca Mulatta (khØ nu«i t¹i ®¶o RÒu Qu¶ng viªm gan A (0,05PFU virus viªm gan A/1 tÕ Ninh) vµ cã thÓ cÊy chuyÓn 3 lÇn liªn tiÕp. Mçi bµo thËn khØ tiªn ph¸t). ®«i thËn khØ cã thÓ t¸ch ®−îc kho¶ng 100-120 chai roux tÕ bµo. TÕ bµo nµy ®−îc nu«i vµ 11
TCNCYH 29 (3) - 2004 V. KÕt luËn 2. Lª ThÞ Lu©n. Nu«i cÊy virut rota g©y Chñng virut rota VNHR203-030 nh©n lªn bÖnh tiªu ch¶y cÊp ë trÎ em d−íi 5 tuæi trªn tÕ tèt nhÊt trªn tÕ bµo thËn khØ tiªn ph¸t khi liÒu bµo thËn khØ Rherus ch©u Phi; T¹p chÝ Y häc g©y nhiÔm lµ 0,1 ®¬n vÞ miÔn dÞch huúnh thùc hµnh, Sè 10 (463), trang 52-53; 2003 quang trªn mét tÕ bµo (0,1FFU/ 1 tÕ bµo). 3. Lª ThÞ Lu©n. Chän läc chñng virut rota Lêi c¶m ¬n G1 trªn tÕ bµo thËn khØ Macaca Mulatta. T¹p chÝ Y häc Thùc hµnh sè 9 (460); trang 54- Nghiªn cøu nµy lµ c«ng tr×nh nghiªn cøu 56;2003 lÇn ®Çu tiªn t¹i n−íc ta vÒ virut rota, nghiªn cøu ®−îc thùc hiÖn t¹i phßng thÝ nghiÖm 4. Nigel A.C., Jailosi S.G., Robin L.B., et chuÈn t¹i Trung t©m Khoa häc S¶n xuÊt al. Rotavirus G and P types in children with V¨cxin Sabin, sè 135 phè Lß §óc-Hµ Néi. acute diarrhea in Blantyre, Malawi, from 1997 Nghiªn cøu nµy lµ mét trong nh÷ng néi dung to 1998: Predominance of Novel P6G8 gi¸m s¸t bÖnh tiªu ch¶y do virut rota t¹i ViÖt strains. Journal of Medical Virology 57: 308- Nam n¨m 2003 ®Ò tµi hîp t¸c víi Trung t©m 312; 1999. Phßng chèng vµ KiÓm so¸t BÖnh tËt (CDC) 5. Nguyen Van Man and et al. The Atlantta-Mü vµ d−íi sù tµi trî cña Tæ chøc Y Epidermiology and Disease Burden of tÕ thÕ giíi vµ cña Trung t©m Khoa häc S¶n rotavirus in Vietnam: Sentinel Surveillance at xuÊt V¨cxin Sabin. T«i xin bµy tá lßng biÕt ¬n 6 hospitals. The journal of infectious Disease s©u s¾c tíi Gs. NguyÔn V¨n MÉn chñ nhiÖm in America; volume 183: 1707-1712; 2001 ®Ò tµi hîp t¸c, ®· t¹o mäi ®iÒu kiÖn cho t«i 6. Esparza J., Gorziglia M., Gil F., and chñ ®éng thùc hiÖn nghiªn cøu. T«i còng xin Romer H.. Multiplication of Human Rotavirus ch©n thµnh c¶m ¬n tíi: Ts. NguyÔn ThÞ Quú; in cultured cells: an Electron Microscopic Ts. NguyÔn §¨ng HiÒn; Cn. Lª Trung Dòng; Study. J.Gen.Virol.,47, 461-472; 1980. Cn TrÇn BÝch H¹nh vµ Cn. NguyÔn ¸nh TuyÕt Trung t©m Khoa häc S¶n xuÊt V¨cxin Sabin ®· gióp t«i thùc hiÖn nghiªn cøu nµy. Tµi liÖu tham kh¶o 1. Lª ThÞ Lu©n. Qu¸ tr×nh chän läc chñng virut rota týp G2 trªn nu«i cÊy tÕ bµo. T¹p chÝ Y häc thùc hµnh; Sè 9 (460); Trang 13-15; 2003 Sumary The study of priority multiplication rotavirus VNHR 203-030 on Macaca Multta primary monkey kidney cells VNHR 203-030 is human rotavirus strain G4P6,8. It was isolated from stool sample of male patient- 9 month of age. He addmited Saint Pont hospital cause by acute diarrhea. This strain was passaged 30 times in the cell culture. It is candidate for producing rotavaccine. It's M.O.I is 0.1 FFU virus rota/ 1 Primary monkey kidney cells. 12

CÓ THỂ BẠN MUỐN DOWNLOAD

LV.09: Bộ Luận Văn Tốt Nghiệp Chuyên Ngành Quản Trị Kinh Doanh

81 tài liệu

1643 lượt tải

THÔNG TIN

TRỢ GIÚP

HỖ TRỢ KHÁCH HÀNG

Theo dõi chúng tôi

Chịu trách nhiệm nội dung:

Nguyễn Công Hà - Giám đốc Công ty TNHH TÀI LIỆU TRỰC TUYẾN VI NA

LIÊN HỆ

Địa chỉ: P402, 54A Nơ Trang Long, Phường 14, Q.Bình Thạnh, TP.HCM

Hotline: 093 303 0098

Email: support@tailieu.vn

Giấy phép Mạng Xã Hội số: 670/GP-BTTTT cấp ngày 30/11/2015 Copyright © 2022-2032 TaiLieu.VN. All rights reserved.