Phân lập gen mã hóa protein vận chuyển lipit (LTP2) từ mRNA phục vụ chuyển gen ở cây đậu xanh

Nguyễn Vũ Thanh Thanh và Đtg<br /> <br /> Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ<br /> <br /> 85(09)/1: 127 - 131<br /> <br /> PHÂN LẬP GEN MÃ HÓA PROTEIN VẬN CHUYỂN LIPIT (LTP2)<br /> TỪ mRNA PHỤC VỤ CHUYỂN GEN Ở CÂY ĐẬU XANH<br /> Nguyễn Vũ Thanh Thanh1*, Võ Minh Hòa1,<br /> Hoàng Hà2, Lê Văn Sơn2, Chu Hoàng Mậu3<br /> 1<br /> <br /> Trường ĐH Khoa học - ĐH Thái Nguyên<br /> Viện Công nghệ sinh học,3 Đại học Thái Nguyên<br /> <br /> 2<br /> <br /> TÓM TẮT<br /> Lipid Transfer Protein (LTP) là protein có khả năng vận chuyển lipid qua màng tế bào và liên quan<br /> đến tính chịu hạn ở thực vật. Khi gặp hạn, LTP kích thích tăng tổng hợp ngoại bì giúp thực vật có<br /> thể giảm mất nƣớc nhờ tăng độ dày của lớp vỏ ngoài. Những nghiên cứu trên cây đậu xanh đã cho<br /> thấy hàm lƣợng mRNA của LTP sẽ tăng lên trong các điều kiện bất lợi nhƣ hạn, mặn hay khi hàm<br /> lƣợng ABA ngoại bào cao. Trong nghiên cứu này, chúng tôi sử dụng giống đỗ xanh Mỹ Đức-Hà<br /> Nội (HN2) để phân lập gen LTP2 từ mRNA. Kết quả phân tích trình tự gen LTP2 cho thấy, gen<br /> phân lập đƣợc có độ dài 351 bp, mã hóa cho 116 amino acid. Kết quả này là cơ sở để tạo cây trồng<br /> chuyển gen mang gen LTP, tăng cƣờng tính chống chịu với điều kiện mất nƣớc và khô hạn.<br /> Từ khóa: Đậu xanh, gen LTP, chịu hạn, phân lập gen.<br /> <br /> MỞ ĐẦU*<br /> Đậu xanh (Vigna radiata L. Wilczek) là cây<br /> trồng cạn có vai trò quan trọng bởi nó cung<br /> cấp protein và có tác dụng cải tạo đất. Tuy<br /> nhiên, đậu xanh là cây trồng chịu hạn kém.<br /> Để nâng cao khả năng chịu hạn của cây trồng<br /> nói chung và cây đậu xanh nói riêng, hiện nay<br /> các nhà khoa học thƣờng tạo cây chuyển gen<br /> mang một hoặc một số gen liên quan đến khả<br /> năng chịu hạn. LTP thuộc họ gen<br /> pathogenesis relate, là một trong các gen chức<br /> năng có liên quan đến khả năng chịu hạn. Vai<br /> trò của LTP là tham gia vào quá trình sinh<br /> tổng hợp biểu bì ở thực vật giúp hạn chế sự<br /> mất nƣớc trong điều kiện khô hạn [1], [2], [4].<br /> Các nghiên cứu đã cho thấy LTP có khả năng<br /> tạo phức với một số acid béo và xúc tác cho<br /> quá trình vận chuyển lipid qua màng tế bào.<br /> LTP đƣợc gắn tại một vị trí cố định trên màng<br /> sinh chất của tế bào, nó có đặc điểm nhƣ một<br /> receptor vận chuyển acid béo qua màng tế<br /> bào. Phức hợp LTP-linoleic acid đã đƣợc<br /> chiết ra từ màng sinh chất của cây thuốc lá<br /> trong điều kiện gây hạn nhân tạo [5]. LTP đã<br /> đƣợc chiết ra từ protein ở các loài thực vật<br /> khác nhau và hàm lƣợng cao nhất LTP đã<br /> đƣợc tìm thấy ở lớp biểu bì bên ngoài cũng<br /> nhƣ xung quanh các gân lá. Gen LTP điều<br /> khiển và tổng hợp nên các sản phẩm protein<br /> tƣơng ứng tham gia xúc tác sự vận chuyển<br /> phospholipid giữa các lớp màng tế bào, hỗ trợ<br /> việc tạo ra các lớp sáp hoặc lớp biểu bì giúp<br /> cây hạn chế mất nƣớc [3].<br /> *<br /> <br /> Tel: 0912664126; Mail: thanhthanhdhkhtn@gmail.com<br /> <br /> Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên<br /> <br /> Hiện nay , cùng với sự phát triển của công<br /> nghệ sinh học , các nghiên cứu sinh học phân<br /> tử, di truyền và hóa sinh liên quan đến tính<br /> chịu hạn mới ở thực vật đã đƣợc làm sáng tỏ.<br /> Nhiều gen mới đã đƣợc phát hiện và đƣợc<br /> nghiên cứu chức năng trên các đối tƣợng cây<br /> mô hình khác nhau . Trong đó có gen mã hóa<br /> Lipid Transfer Protein (LTP) liên quan đến<br /> sinh tổng hợp lớp biểu bì của cây trồng . Đây<br /> là cơ sở quan trọng cho việc cải tạo giống cây<br /> trồng, nhằm tăng khả năng chống chị u.<br /> Dựa vào trình tự của gen mã hoá protein LTP<br /> đã công bố trên Ngân hàng gen Quốc tế với<br /> mã số AY300807, chúng tôi đã thiết kế cặp<br /> mồi đặc hiệu để khuếch đại gen mã hoá protein<br /> LTP2 của đậu xanh bằng kỹ thuật RT-PCR,<br /> nhằm phục vụ cho việc thiết kế vector chuyển<br /> gen. Gen LTP đƣợc nhân lên bằng phƣơng<br /> pháp RT-PCR sau đó gắn vào vector để dòng<br /> hoá và xác định trình tự nucleotide của gen.<br /> VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU<br /> Vật liệu<br /> Giống đậu xanh địa phƣơng của Mỹ Đức-Hà<br /> Nội (kí hiệu HN2) có đặc điểm: năng suất<br /> cao, vỏ hạt màu xanh mỡ, khối lƣợng 1000<br /> hạt khoảng 57,32 g.<br /> Phương pháp<br /> RNA tổng số đƣợc tách từ lá cây đậu xanh sử<br /> dụng kit Trilzol Regents (Invitrogen).Từ<br /> RNA tổng số chúng ta tiến hành tổng hợp<br /> cDNA đƣợc tạo ra trong 20 l dung dịch có<br /> chứa 5 g RNA tổng số; 200 ng mồi ngẫu<br /> nhiên; 2 l dNTPs 10 mM; bổ sung nƣớc khử<br /> 127<br /> <br /> http://www.lrc-tnu.edu.vn<br /> <br /> Nguyễn Vũ Thanh Thanh và Đtg<br /> <br /> Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ<br /> <br /> 81(05): 127 - 131<br /> <br /> ion tới thể tích 13 l. Dung dich phản ứng<br /> này đƣợc ủ ở nhiệt độ 65oC trong 5 phút, sau<br /> đó giữ ở nhiệt độ 4oC. Tiếp theo bổ sung 4 l<br /> đệm 5X RT tổng hợp cDNA; 1l DTT 0,1 M;<br /> 1 l chất ức chế ribonuclease tái tổ hợp<br /> RNase OUTTM (40 đơn vị/l); 1 l cloned<br /> AMV RT (15 đơn vị/l) vào dung dịch trên<br /> trƣớc khi thực hiện chu kì nhiệt nhƣ sau: 01<br /> chu kì 25oC trong 10 phút, 01 chu kì 45oC<br /> trong 50 phút, 01 chu kì 85oC trong 5 phút và<br /> giữ ở 4oC.<br /> <br /> Plasmid Extraction của hãng Bioneer. Trình<br /> tự nucleotide của gen LTP2 đƣợc xác định<br /> trên máy đọc trình tự nucleotide tự động ABI<br /> PRISM@ 3100 Advant Genetic Analyzer của<br /> hãng Ampplied Biosystem. Kết quả đọc trình<br /> tự gen đƣợc xử lý bằng phần mềm DNAstar<br /> và BioEdit.<br /> KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN<br /> Kết quả thiết kế mồi, tách mRNA và RTPCR nhân gen LTP2<br /> Thiết kế mồi nhân gen<br /> <br /> Phản ứng PCR nhân gen đặc hiệu đƣợc thực<br /> hiện trong dung dịch bao gồm 28,6 l nƣớc; 5<br /> l đệm PCR 10X; 5 l MgCl2 25 mM; 4 l<br /> dNTPs 2,5 mM; 2 l mỗi loại mồi NcoILTPF/NotI-LTPR 10 pmol/l; 0,4 l Taq<br /> polymerase 5 u/l; 4 l cDNA và theo chu kì<br /> nhiệt nhƣ sau: 01 chu kì 94oC trong 3 phút; 35<br /> chu kì 94oC trong 1 phút, 56oC trong 45 giây,<br /> 72oC trong 45 giây; 01 chu kì 72oC trong 5<br /> phút; và giữ ở 4oC cho đến khi phân tích. Sản<br /> phẩm PCR đƣợc điện di trên gel agrose 1%<br /> trong đệm 1X TAE. Gel đƣợc nhuộm trong<br /> dung dịch ethidium bromide với nồng độ 0,1<br /> g/ml.<br /> <br /> Dựa trên cơ sở dữ liệu khai thác từ Ngân hàng<br /> gen Quốc tế với mã số AY300807 và dựa vào<br /> cấu trúc của vector chuyển gen pCB301,<br /> chúng tôi đã thiết kế cặp mồi đặc hiệu để<br /> nhân và phát hiện sự có mặt của gen LTP2 ở<br /> giống đậu xanh địa phƣơng HN2. Để sau này<br /> có thể ghép nối gen LTP2 vào vector chuyển<br /> gen dễ dàng, chúng tôi đã thiết kế mồi xuôi có<br /> thêm trình tự của enzyme giới hạn NcoI, mồi<br /> ngƣợc bổ sung trình tự của enzyme giới hạn<br /> NotI. Trình tự mồi đƣợc thiết kế thể hiện<br /> trong bảng 1.<br /> Tách RNA tổng số và nhân gen LTP2<br /> Chúng tôi tách RNA tổng số từ lá non của<br /> giống đậu xanh HN2. Sau khi tách RNA<br /> chúng tôi tổng hợp cDNA và nhân gen LTP2.<br /> Kết quả điện di đƣợc thể hiện ở hình 1. Hình<br /> 1 cho thấy, đoạn DNA đƣợc nhân đặc hiệu có<br /> kích thƣớc khoảng 350 bp, hàm lƣợng của sản<br /> phẩm đủ lớn để thực hiện cho các nghiên cứu<br /> tiếp theo. Độ dài của đoạn DNA vừa nhân<br /> đƣợc cũng phù hợp với lý thuyết khi chúng<br /> tôi thiết kế mồi và chiều dài cũng tƣơng tự<br /> nhƣ với gen LTP đã đăng ký trên Ngân hàng<br /> gen với mã số AY300807.<br /> <br /> Sản phẩm PCR đƣợc tách khỏi gel, tinh sạch<br /> bằng bộ kit của Fermentas và gắn trực tiếp<br /> vào vector tách dòng pBT. Sản phẩm gắn này<br /> đƣợc biến nạp vào tế bào E. Coli DH5.<br /> Chọn lọc các khuẩn lạc dƣơng tính (khuẩn lạc<br /> màu trắng) trên môi trƣờng LB có bổ sung 50<br /> mg/l ampicillin, 30 mg/l X-gal và 0,1 mM<br /> IPTG. Sự có mặt của DNA tái tổ hợp đƣợc<br /> kiểm tra bằng phản ứng cắt enzyme.<br /> Tách plasmid mang gen LTP2 phục vụ cho<br /> đọc trình tự gen bằng bộ Kit AccuPrep<br /> <br /> Bảng 1. Trình tự mồi nhân gen LTP2<br /> Tên mồi<br /> NcoI-LTPF<br /> NotI-LTPR<br /> <br /> Trình tự mồi<br /> CATGCCATGGATGGCTAGCCTGAAGGTTGCA<br /> ATTTGCGGCCGCCTTGATGTTAGCGCAGTTGGT<br /> <br /> Tách dòng gen LTP2<br /> Quá trình tách dòng đƣợc thực hiện nhƣ sau:<br /> gắn sản phẩm PCR vào vector tách dòng pBT,<br /> <br /> Hình 2. Véctơ pBT<br /> <br /> Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên<br /> <br /> Nhiệt độ gắn mồi<br /> 560C<br /> 560C<br /> <br /> rồi đƣợc biến nạp vào tế bào khả biến chủng<br /> E. coli DH5α. Sau đó cấy trải trên môi trƣờng<br /> LB đặc (pepton, cao nấm men, NaCl và agar)<br /> 128<br /> <br /> http://www.lrc-tnu.edu.vn<br /> <br /> Nguyễn Vũ Thanh Thanh và Đtg<br /> <br /> Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ<br /> <br /> có kháng sinh ampicilin (100 mg/ml), IPTG<br /> (0,1 mM) và X - gal (40 mg/ml), ủ hộp lồng<br /> petri ở 37oC trong 16 giờ. Kết quả thu đƣợc<br /> có cả khuẩn lạc màu xanh và màu trắng, chọn<br /> khuẩn lạc có màu trắng chuyển sang nuôi ở<br /> môi trƣờng có LB lỏng (có bổ sung ampicilin<br /> 100 mg/ml) qua đêm. Lấy dịch nuôi chứa vi<br /> khuẩn kiểm tra sản phẩm chọn dòng bằng<br /> PCR để xác định khuẩn lạc có mang gen<br /> mong muốn.<br /> Những khuẩn lạc trắng phát triển tốt trên môi<br /> trƣờng chọn lọc đƣợc nhân lên và tách chiết<br /> plasmid sau đó kiểm tra gen LTP bằng cắt<br /> bằng enzym giới hạn BamHI (hình 2).<br /> Kết quả điện di ở hình 2 cho thấy, dòng khuẩn<br /> lạc số 2 thu đƣợc băng có kích thƣớc gần<br /> khoảng 350 bp. Nhƣ vậy, có thể tạm thời<br /> khẳng định rằng gen LTP có thể đã gắn đƣợc<br /> vào vector pBT. Để khẳng định kết quả biến<br /> nạp thành công, chúng tôi tiến hành tinh sạch<br /> plasmid tƣơng ứng với dòng khuẩn lạc số 2.<br /> Kết quả xác định trình tự nucleotide<br /> Để xác định chính xác trình tự nucleotide của<br /> gen LTP, chúng tôi tiến hành đọc trình tự<br /> nucleotide của gen LTP2 trên máy đọc tự<br /> <br /> M<br /> <br /> 1<br /> <br /> 85(09)/1: 127 - 131<br /> <br /> động ABI PRISM@ 3100 Avant Genetic<br /> Analyzer. Kết quả đọc trình tự đƣợc đem<br /> phân tích, xử lý bằng phần mềm BioEdit. Sau<br /> khi xử lý kết quả đọc trình tự nucleotide cho<br /> thấy, chiều dài gen LTP2 ở giống đậu xanh<br /> HN2 có kích thƣớc 351 nucleotide. Khi so<br /> sánh trình tự này trong BLAST của NCBI, kết<br /> quả cho biết đây là các trình tự gen mã hoá<br /> LTP2 của đậu xanh.<br /> Từ kết quả xác định trình tự ở trên, chúng tôi<br /> so sánh trình tự gen LTP2 của giống HN2 với<br /> trình tự của giống đậu xanh trên Ngân hàng<br /> gen Quốc tế có mã số AY300807. Kết quả<br /> hình 3 cho thấy, gen LTP2 của hai giống đậu<br /> xanh này có độ tƣơng đồng cao (chỉ sai khác<br /> 1 nucleotide ở vị trí 326). Ở vị trí này,<br /> nucleotide loại T ở AY300807 đƣợc thay<br /> bằng C ở HN2.<br /> So sánh trình tự amino acid trong protein của<br /> gen LTP2 đƣợc phân lập với AY300807<br /> chúng tôi nhận thấy, có 1 vị trí sai khác là vị<br /> trí 109 (F thay bằng S). Nhƣ vậy, amino acid<br /> pheninalanin ở AY300807 đƣợc thay bằng<br /> serin ở HN2. Kết quả đƣợc thể hiện ở hình 4.<br /> <br /> 2<br /> <br /> M<br /> <br /> 1<br /> <br /> 2<br /> <br /> 500 bp<br /> 500 bp<br /> <br /> 350 bp<br /> <br /> 350 bp 250 bp<br /> 250 bp<br /> <br /> Hình 1. Hình ảnh điện di kết quả nhân gen LTP2<br /> (M: Marker 1kb)<br /> <br /> Hình 2. Sản phẩm plasmid pBT-LTP cắt<br /> bằng BamHI với hai dòng khuẩn lạc trắng<br /> (M: Marker 1 kb)<br /> <br /> ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....|<br /> 10<br /> 20<br /> 30<br /> 40<br /> 50<br /> Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên<br /> <br /> 129<br /> <br /> http://www.lrc-tnu.edu.vn<br /> <br /> Nguyễn Vũ Thanh Thanh và Đtg<br /> AY300807<br /> HN2<br /> <br /> AY300807<br /> HN2<br /> <br /> AY300807<br /> HN2<br /> <br /> AY300807<br /> HN2<br /> <br /> AY300807<br /> HN2<br /> <br /> AY300807<br /> HN2<br /> <br /> AY300807<br /> HN2<br /> <br /> AY300807<br /> HN2<br /> <br /> Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ<br /> <br /> 85(09)/1: 127 - 131<br /> <br /> ATGGCTAGCC TGAAGGTTGC ATGCATGGTT GCGGTGGTGT TCATGGTCGT<br /> ATGGCTAGCC TGAAGGTTGC ATGCATGGTT GCGGTGGTGT TCATGGTCGT<br /> ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....|<br /> 60<br /> 70<br /> 80<br /> 90<br /> 100<br /> GGTGAGTGCA CATATGGCAC ATGCGATCAC GTGCGGGCAA GTGGCCTCTT<br /> GGTGAGTGCA CATATGGCAC ATGCGATCAC GTGCGGGCAA GTGGCCTCTT<br /> ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....|<br /> 110<br /> 120<br /> 130<br /> 140<br /> 150<br /> CTTTGGCTCC ATGCATCTCC TACCTCCAAA AGGGCGGAGT TCCGTCGGCG<br /> CTTTGGCTCC ATGCATCTCC TACCTCCAAA AGGGCGGAGT TCCGTCGGCG<br /> ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....|<br /> 160<br /> 170<br /> 180<br /> 190<br /> 200<br /> TCGTGTTGCA GCGGAGTGAA GGCCCTGAAC AGCGCCGCAA GTACCACCGC<br /> TCGTGTTGCA GCGGAGTGAA GGCCCTGAAC AGCGCCGCAA GTACCACCGC<br /> ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....|<br /> 210<br /> 220<br /> 230<br /> 240<br /> 250<br /> TGACCGCAAA ACCGCGTGCA ACTGTCTGAA AAACCTTGCC GGTCCAAAGT<br /> TGACCGCAAA ACCGCGTGCA ACTGTCTGAA AAACCTTGCC GGTCCAAAGT<br /> ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....|<br /> 260<br /> 270<br /> 280<br /> 290<br /> 300<br /> CGGGTATCAA CGAGGGCAAC GCCGCTTCAC TCCCAGGCAA ATGTAAAGTC<br /> CGGGTATCAA CGAGGGCAAC GCCGCTTCAC TCCCAGGCAA ATGTAAAGTC<br /> ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....|<br /> 310<br /> 320<br /> 330<br /> 340<br /> 350<br /> AACGTGCCCT ACAAGATCAG CACCTTCACC AACTGCGCTA ACATCAAGTA<br /> AACGTGCCCT ACAAGATCAG CACCTCCACC AACTGCGCTA ACATCAAGTA<br /> .<br /> A<br /> A<br /> <br /> Hình 3. So sánh trình tự nucleotide của gen LTP2 ở giống đậu xanh HN2 và trình tự đã công bố<br /> AY300807<br /> <br /> AY300807<br /> HN2<br /> <br /> AY300807<br /> HN2<br /> <br /> AY300807<br /> HN2<br /> <br /> ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....|<br /> 10<br /> 20<br /> 30<br /> 40<br /> 50<br /> MASLKVACMV AVVFMVVVSA HMAHAITCGQ VASSLAPCIS YLQKGGVPSA<br /> MASLKVACMV AVVFMVVVSA HMAHAITCGQ VASSLAPCIS YLQKGGVPSA<br /> ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....|<br /> 60<br /> 70<br /> 80<br /> 90<br /> 100<br /> SCCSGVKALN SAASTTADRK TACNCLKNLA GPKSGINEGN AASLPGKCKV<br /> SCCSGVKALN SAASTTADRK TACNCLKNLA GPKSGINEGN AASLPGKCKV<br /> ....|....| ....|.<br /> 110<br /> NVPYKISTFT NCANIK<br /> NVPYKISTST NCANIK<br /> <br /> Hình 4. So sánh trình tự amino acid trong protein LTP của giống đậu xanh HN2 và AY300807<br /> <br /> Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên<br /> <br /> 130<br /> <br /> http://www.lrc-tnu.edu.vn<br /> <br /> Kết quả xác định trình tự nucleotide của gen<br /> LTP2 ở trên là cơ sở để chúng tôi tiếp tục thiết<br /> kế vector chuyển gen mang gen LTP2 để phục<br /> vụ việc nghiên cứu chuyển gen nhằm tạo các<br /> giống đậu xanh có khả năng chịu hạn tốt phục<br /> vụ cho phát triển cây đậu xanh ở vùng Trung du<br /> và miền núi phía Bắc.<br /> KẾT LUẬN<br /> Đã thiết kế đƣợc cặp mồi đặc hiệu và nhân đƣợc<br /> gen LTP2 bằng phản ứng RT-PCR. Sản phẩm<br /> PCR đƣợc dòng hoá nhờ vector pBT. Trình tự<br /> nucleotide đƣợc xác định và xử lí cho kết quả<br /> gen LTP2 của giống đậu xanh HN2 nghiên cứu<br /> dài 351 nucleotide. Trình tự gen LTP2 là cơ sở<br /> để thiết kế vector chuyển gen mang cấu trúc gen<br /> LTP2.<br /> Lời cảm ơn: Công trình được thực hiện và hoàn<br /> thành với sự hỗ trợ kinh phí của Đề tài cấp bộ<br /> B2010-TN09-01.<br /> <br /> TÀI LIỆU THAM KHẢO<br /> [1]. Arondel V., Vergnolle C., Cantrel C., Kader J.C.<br /> (2000), Lipid transfer protein are encoded by a small<br /> multigen familly in Arabidopsis thaniana, Plant<br /> Science 157, pp. 1-12.<br /> [2]. Bourgis F., Kader J.P. (1997), Lipid transfer<br /> protein: Tools for manipulating membrane lipids,<br /> Physiol Plant 100, pp. 78-84.<br /> [3]. Carvalho AO, Souza-Filho GA, Ferreia BS,<br /> Branco AT, Araujo IS, Fernandes KV, Retamal CA,<br /> Gomes VM, (2006) Cloning and characterization of a<br /> cowpea seed lipid transfer protein cDNA: expression<br /> analysis during seed development and under fungal and<br /> cold stresses in seedling tissues. Plant Physiol Biochem<br /> 44: 732-742.<br /> [4]. Kader J.C. (1996), Lipid transfer protein in<br /> plants, Annual Review of Plant Molercular Biology<br /> 47, pp. 627-654.<br /> [5]. Kimberly DC, Mark AT, Lawrece BM (2005)<br /> Increased Accumulation of Cuticular Wax and<br /> Expresion of Lipid Transfer Protein in Response to<br /> Periodic Drying Events in Leaves of tree Tobacco.<br /> www.ncbi.nlm.gov.<br /> <br /> SUMMARY<br /> ISOLATION OF GENE ENCODING LTP2 (LIPID TRANSFER PROTEINS) FROM<br /> mRNA IN MUNG BEAN<br /> Nguyen Vu Thanh Thanh1*, Vo Minh Hoa1, Hoang Ha2,<br /> Le Van Son2, Chu Hoang Mau3<br /> 1<br /> <br /> College of Science – TNU, 2Institute of Biotechnology<br /> 3<br /> Thai Nguyen University<br /> <br /> LTP (Lipid transfer proteins) are associated with tolerance to drought in plant. LTP have the ability to<br /> transfer phospholipids between membrane vesicles. LTP are implicated in cuticle biosynthesis and thought<br /> to play a role in the protection of plant. Based on the sequence of LTP2 gene of a mungbean cultivar in<br /> NCBI sequence database with the accession number AY300807, specific primer pair was designed to<br /> amplify the gene in a Vietnamese mungbean cultivar. In this study, we presented some results on<br /> amplification of LTP2 gene from mRNA isolated from Mung bean cultivar My Duc – Hanoi in Vietnam via<br /> RT - PCR reaction using specific primers, and cloning and sequencing this gene. This gene was 351 bp in<br /> length. The RT- PCR products containing the LTP2 fragments were cloned into pBT and sequenced. The<br /> correspond a polypeptide sequence of obtained LTP2 gene was 116 amino acids residues.<br /> Key wods: Mungbean, LTP genes, drought tolerance, gene isolation.<br /> <br /> *<br /> <br /> Tel: 0912664126; Email: thanhthanhdhkhtn@gmail.com<br /> <br /> Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên<br /> <br /> 131<br /> <br /> http://www.lrc-tnu.edu.vn<br /> <br />