intTypePromotion=1
zunia.vn Tuyển sinh 2024 dành cho Gen-Z zunia.vn zunia.vn
ADSENSE
 » 
 » 

Phát triển và ứng dụng kỹ thuật PCR đa mồi trong chẩn đoán E. coli gây tiêu chảy từ phân Đọc thêm thuvienykhoa.vn

Chia sẻ: Sunshine_3 Sunshine_3 | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:8

Thêm vào BST
Báo xấu
61
lượt xem 11
download
 
  Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Tiêu chảy lμ một vấn đề sức khoẻ toμn cầu. Bệnh hay gặp ở trẻ em. ở các n−ớc đang phát triển, có ít nhất 1 tỷ tr−ờng hợp tiêu chảy hμng năm vμ số tử vong lμ 5 đến 7 triệu. Trung bình một năm một trẻ mắc 3,3 lần tiêu chảy. Tại Việt Nam, một số nghiên cứu cho thấy, số lần bị tiêu chảy trong một năm đối với một trẻ từ 2,2 – 6. Tại các n−ớc công nghiệp phát triển, tiêu chảy vẫn còn phổ biến ở trẻ em, ng−ời giμ vμ các khách du...

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Phát triển và ứng dụng kỹ thuật PCR đa mồi trong chẩn đoán E. coli gây tiêu chảy từ phân Đọc thêm thuvienykhoa.vn

  1. TCNCYH 23 (3) 2003 Ph¸t triÓn vµ øng dông kü thuËt PCR ®a måi trong chÈn ®o¸n E. coli g©y tiªu ch¶y tõ ph©n NguyÔn Vò Trung1, Lª Huy ChÝnh1, Lª V¨n Phñng1, Andrej Weintraub2 1 Bé m«n Vi sinh, §¹i häc Y Hµ Néi, 2 Khoa Vi sinh -MiÔn dÞch -BÖnh häc BÖnh viÖn Huddinge, ViÖn Karolinska-Thuþ §iÓn Kü thuËt PCR ®a måi lÇn ®Çu tiªn ®−îc nghiªn cøu thµnh c«ng ë ViÖt nam b»ng c¸ch phèi hîp 8 cÆp måi ®Ó chÈn ®o¸n 5 lo¹i E. coli g©y tiªu ch¶y (ETEC, EHEC, EIEC, EPEC, EAEC) tõ ph©n trÎ em d−íi 5 tuæi bÞ tiªu ch¶y. Kü thuËt nµy cho phÐp chÈn ®o¸n chÝnh x¸c 5 lo¹i E. coli g©y tiªu ch¶y chØ b»ng mét ph¶n øng PCR víi ®é nh¹y vµ ®é ®Æc hiÖu gÇn 100% vµ tiÕt kiÖm nguyªn vËt liÖu, thêi gian gÊp 5 lÇn so víi tiÕn hµnh tõng ph¶n øng PCR riªng biÖt. Qua ph©n tÝch 310 bÖnh phÈm ph©n tiªu ch¶y, 90 chñng E. coli g©y bÖnh ®· ®−îc ph©n lËp chiÕm 29,04% tæng sè c¸c bÖnh phÈm. Trong ®ã, EAEC lµ 58 chñng chiÕm 18,71%, ETEC 2 chñng (0,65%), EPEC 24 chñng (7,7%), vµ EIEC 6 chñng (1,94%). i. §Æt vÊn ®Ò n»m trong tÕ bµo vi khuÈn m· ho¸ cho c¸c yÕu tè ®éc lùc: Enteropathogenic E. coli (EPEC), Tiªu ch¶y lµ mét vÊn ®Ò søc khoÎ toµn cÇu. enterohemorrhagic E. coli (EHEC), BÖnh hay gÆp ë trÎ em. ë c¸c n−íc ®ang ph¸t enterotoxigenic E. coli (ETEC), enteroinvasive triÓn, cã Ýt nhÊt 1 tû tr−êng hîp tiªu ch¶y hµng E. coli (EIEC) vµ enteroaggregative E. coli n¨m vµ sè tö vong lµ 5 ®Õn 7 triÖu. Trung b×nh (EAEC) [3, 4]. HiÖn nay cã bèn ph−¬ng ph¸p mét n¨m mét trÎ m¾c 3,3 lÇn tiªu ch¶y. T¹i ®−îc dïng ®Ó chÈn ®o¸n c¸c E. coli nµy: ViÖt Nam, mét sè nghiªn cøu cho thÊy, sè lÇn bÞ tiªu ch¶y trong mét n¨m ®èi víi mét trÎ tõ • Dùa vµo c¸c tÝnh chÊt sinh vËt ho¸ häc. 2,2 – 6. T¹i c¸c n−íc c«ng nghiÖp ph¸t triÓn, • §Þnh týp huyÕt thanh. tiªu ch¶y vÉn cßn phæ biÕn ë trÎ em, ng−êi giµ vµ c¸c kh¸ch du lÞch ®Õn c¸c n−íc ®ang ph¸t • C¸c thö nghiÖm dùa trªn nh÷ng ®Æc triÓn. Cã nhiÒu nguyªn nh©n dÉn ®Õn tiªu ch¶y. ®iÓm vÒ ®éc lùc. Trong ®ã, vi khuÈn ®ãng vai trß quan träng. C¸c ph−¬ng ph¸p nµy hÇu nh− kh«ng thÓ Trong sè c¸c vi khuÈn g©y tiªu ch¶y, E. coli chÈn ®o¸n ®−îc hoÆc rÊt tèn kÐm. hiÖn nay lµ c¨n nguyªn næi tréi, thu hót ®−îc sù • C¸c ph−¬ng ph¸p sinh häc ph©n tö: quan t©m cña c¸c b¸c sÜ l©m sµng, nhi khoa, vi sinh v× nã lµ c¨n nguyªn cña 1/3 sè tr−êng hîp + HiÖn nay chñ yÕu lµ hai ph−¬ng ph¸p: tiªu ch¶y. ViÖc chÈn ®o¸n gÆp khã kh¨n v× c¸c MÉu dß ADN (ADN probe) vµ ph¶n øng chuçi triÖu chøng l©m sµng kh«ng ®Æc hiÖu. Cã 5 lo¹i (Pylymerase Chain Reaction - PCR). Tuy E. coli g©y tiªu ch¶y, ®−îc ph©n lo¹i theo c¸c nhiªn ®é nh¹y cña ph−¬ng ph¸p mÉu dß ADN c¬ chÕ g©y bÖnh kh¸c nhau dùa trªn c¸c gien 6
  2. TCNCYH 23 (3) 2003 thÊp, thao t¸c phøc t¹p vµ ®ßi hái mét sè l−îng II. ®èi t−îng vµ Ph−¬ng ph¸p lín vi sinh vËt trong bÖnh phÈm. nghiªn cøu + PCR lµ kü thuËt tæng hîp acid nucleic ThiÕt kÕ nghiªn cøu. §¸nh gi¸ mét nghiÖm trong èng nghiÖm. Trong ®ã, mét ®o¹n ADN ph¸p chÈn ®o¸n vµ nghiªn cøu m« t¶. ®−îc nh©n lªn ®Æc hiÖu. Trong kü thuËt nµy, hai ®o¹n oligonucleotid, ®−îc gäi lµ måi, g¾n ®Æc PCR chÈn ®o¸n E. coli g©y tiªu ch¶y tõ hiÖu vµo ®o¹n ADN ®Ých vµ ®−îc khuÕch ®¹i bÖnh phÈm ph©n. Chóng t«i sö dông th−êng theo mét sè chu kú ®−îc lÆp ®i lÆp l¹i. Chu kú qui chÈn ®o¸n E. coli g©y tiªu ch¶y b»ng PCR nµy gåm viÖc lµm t¸ch hai sîi cña ®o¹n ADN, theo th−êng qui cña Khoa Vi sinh l©m sµng, g¾n hai oligonucleotid vµo hai sîi nµy theo BÖnh viÖn Huddinge, ViÖn Karolinska, nguyªn t¾c bæ sung vµ kÐo dµi ®o¹n Stockholm, Thuþ §iÓn. BÖnh phÈm ph©n sau oligonucleotid d−íi t¸c ®éng cña enzym ADN khi thu thËp ®−îc cÊy lªn trªn m«i tr−êng cho polymerase. Trong PCR, ADN ®Ých ®−îc t¨ng vi khuÈn ®−êng ruét, ®Ó ë 370 C sau 18-24 giê. lªn theo hµm sè mò sau mçi chu kú. S¶n phÈm Vi khuÈn trªn ®Üa m«i tr−êng ®−îc hoµ vµo cña PCR ®−îc ph¸t hiÖn sau khi ®iÖn di trªn dung dÞch ®Öm phosphat, ®un c¸ch thuû ë agarose, nhuém b»ng ethidium bromide vµ ®äc 1000C trong 20 phót ®Ó ph¸ vì mµng tÕ bµo vi d−íi ¸nh s¸ng ®Ìn cùc tÝm. khuÈn. ADN cña vi khuÈn ®−îc gi¶i phãng. Ly t©m dÞch nµy víi tèc ®é 4000 vßng/phót trong PCR lµ ph−¬ng ph¸p ®ang ®−îc ¸p dông 10 phót. N−íc næi sau khi ly t©m dïng lµm réng r·i v× cho kÕt qu¶ nhanh, chÝnh x¸c, ®é ADN khu«n cho ph¶n øng PCR. C¸c cÆp måi nh¹y vµ ®é ®Æc hiÖu cao. HiÖn nay, trªn thÕ ®−îc thiÕt kÕ ®Æc hiÖu víi mét sè ®o¹n gen cña giíi, PCR ®ang ®−îc nghiªn cøu vµ øng dông ETEC, EHEC, EPEC, EIEC, EAEC trong chÈn ®o¸n E. coli g©y tiªu ch¶y. B×nh (INTERACTIVA, §an M¹ch). th−êng trong mét ph¶n øng PCR, ng−êi ta dïng mét cÆp måi ®Ó khuÕch ®¹i mét ®o¹n gien ®Æc S¶n phÈm cña PCR sau ®ã ®−îc ®iÖn di trªn hiÖu. §Ó chÈn ®o¸n xem trong bÖnh phÈm cã 1 agarose 1,5% trong dung dÞch ®Öm TAE ®Ó trong sè 5 lo¹i E. coli g©y tiªu ch¶y cÇn Ýt nhÊt t¸ch biÖt c¸c ADN ®· ®−îc khuÕch ®¹i. Nhuém 6 PCR riªng rÏ. Nh− vËy rÊt tèn kÐm. VÊn ®Ò gel sau khi ®iÖn di b»ng Ethidium bromide vµ ®Æt ra lµ lµm sao x¸c ®Þnh ®−îc vi khuÈn nµy nh×n d−íi ®Ìn cùc tÝm sÏ cho phÐp thÊy ®−îc mµ chØ cÇn duy nhÊt 1 ph¶n øng PCR ? NÕu c¸c b¨ng ADN ®Æc hiÖu. So s¸nh c¸c b¨ng nµy vËy, chóng ta kh«ng nh÷ng tiÕt kiÖm ®−îc víi c¸c b¨ng cña ADN mÉu. nguyªn vËt liÖu vµ thêi gian mµ cßn tr¸nh ®−îc §o¹n Måi Vi khuÈn Cì s¶n sù nhiÔm trong kü thuËt nµy. V× vËy, chóng t«i gen ®Ých phÈm tiÕn hµnh nghiªn cøu nµy nh»m hai môc tiªu: elt B LTl-r ETEC 322 bp 1. Ph¸t triÓn kü thuËt PCR ®a måi trong chÈn ®o¸n E. coli g©y tiªu ch¶y. est A STI2l-r ETEC 147 bp 2. øng dông kü thuËt nµy ®Ó chÈn ®o¸n c¸c vt 1 VT1l-r EHEC 130 bp E. coli g©y tiªu ch¶y tõ ph©n trÎ em d−íi n¨m vt 2 VT2l-r EHEC 298 bp tuæi bÞ tiªu ch¶y. eae A eae u-l EHEC/ EPEC 376 bp ial SHIG1-2 EIEC 320 bp bfp A bfpA2u-l EPEC 367 bp 7
  3. TCNCYH 23 (3) 2003 kh«ng g©y tiªu ch¶y ®−îc cung cÊp tõ Khoa Vi pCVD EA1-2 EAEC 630 bp sinh l©m sµng cña BÖnh viÖn Huddinge-ViÖn Tiªu chuÈn tèi thiÓu: Karolinska-Thuþ §iÓn, Trung t©m kiÓm so¸t bÖnh nhiÔm trïng cña Thuþ §iÓn, Trung t©m ETEC: Cã gen eltB vµ/hoÆc estA l−u gi÷ chñng cña Tr−êng §¹i häc Goterborg- EHEC: Cã gen vt1 vµ/hoÆc vt 2. Cã gen Thuþ §iÓn, dù ¸n nghiªn cøu vÒ E. coli g©y eaeA,EHEC ®iÓn h×nh tiªu ch¶y gi÷a Thuþ §iÓn vµ Nicaragua. EPEC: Cã gen bfpA vµ eaeA BÖnh phÈm ph©n. 310 mÉu ph©n tõ trÎ d−íi 5 tuæi bÞ tiªu ch¶y ®−îc thu thËp ë 3 bÖnh EIEC : Cã gen ial viÖn t¹i Hµ Néi. EAEC : Cã gen pCVD III. KÕt qu¶ Taq polymerase, MgCl2 vµ Buffer do H·ng 1. Ph¸t triÓn kü thuËt PCR ®a måi. Perkin Elmer, Mü cung cÊp. Chóng t«i ®· phèi hîp thµnh c«ng 8 cÆp måi LÊy bÖnh phÈm, nu«i cÊy ph©n lËp, x¸c trong mét ph¶n øng ®Ó chÈn ®o¸n cïng mét lóc ®Þnh E. coli ®−îc tiÕn hµnh theo th−êng qui. 5 lo¹i E. coli g©y tiªu ch¶y trong ph©n. C¸c chñng E. coli. 5 chñng E. coli g©y tiªu ch¶y chuÈn quèc tÕ, 238 chñng E. coli tõ ph©n ®· ®−îc x¸c ®Þnh b»ng nhiÒu ph−¬ng ph¸p kh¸c nhau gåm 99 chñng g©y tiªu ch¶y, 139 chñng PCR ®¬n måi PCR ®a måi 1. N−íc cÊt : 11,5 µl 1. N−íc cÊt : 6,7 µl 2. §Öm ×10 : 2,0 µl 2. §Öm × 10 : 2,0 µl 3. dNTPs (1,25mM) : 1,6 µl 3. dNTPs (1,25mM) : 1,6 µl 4. MgCl2 25 mM : 1,2 µl 4. MgCl2 25 mM : 1,2 µl 5. Måi 2,5 µM : 1,6 µl 5. Måi 2,5 µM : 6,4 µl 6. Taq 5 UI/ µl : 0,1 µl 6. Taq 5 UI/ µl : 0,1 µl 7. ADN tõ vi khuÈn : 2,0 µl 7. ADN tõ vi khuÈn : 2,0 µl 1 cÆp måi trong mét ph¶n øng 8 cÆp måi trong mét ph¶n øng ThÓ tÝch: 20,0 µl ThÓ tÝch: 20,0 µl 8
  4. TCNCYH 23 (3) 2003 B¶ng 1. ¦u ®iÓm cu¶ PCR ®a måi Thµnh phÇn 1 PCR 6 PCR PCR ®a måi TiÕt kiÖm N−íc cÊt 11,1 µl 66,6 µl 6,3 µl 60,3 µl §Öm 2,0 µl 12,0 µl 2,0 µl 10,0 µl dNTPs 1,6 µl 9,6 µl 1,6 µl 8,0 µl MgCl2 1,6 µl 9,6 µl 1,6 µl 8,0 µl Måi 1,6 µl 9,6 µl 6,4 µl 3,2 µl Taq polymerase 0,1 µl 0,6 µl 0,1 µl 0,5 µl ADN mÉu 2,0 µl 12,0 µl 2,0 µl 10,0 µl ThÓ tÝch 20,0 µl 120,0 µl 20,0 µl 100,0 µl Qua b¶ng trªn chóng t«i thÊy, kü thuËt PCR ®a måi cho phÐp tiÕt kiÖm thêi gian vµ nguyªn vËt liÖu (kho¶ng 5 lÇn) so víi ch¹y riªng rÏ tõng PCR. 1636 1018 506,517 396 344 298 220 201 154 134 1 2 3 4 5 6 7 H×nh ¶nh ®iÖn di kÕt qu¶ PCR ®a måi víi c¸c chñng E. coli chuÈn (kÝch cì bp) 1. E. coli 2. EIEC 3. EHEC 4. ETEC 5. EAEC 6. EPEC 7. ADN mÉu + Kü thuËt PCR ®a måi ®−îc thùc hiÖn víi c¸c chñng E. coli chuÈn vµ cho kÕt qu¶ rÊt tèt. Chóng t«i ®· thùc hiÖn ph¶n øng nµy rÊt nhiÒu lÇn ®Ó kiÓm tra ®é æn ®Þnh cña ph¶n øng trªn c¸c chñng E. coli chuÈn quèc tÕ vµ c¸c chñng ®−îc cung cÊp, ®é lÆp l¹i lµ 100%. 9
  5. TCNCYH 23 (3) 2003 B¶ng 2. §é nh¹y vµ ®é ®Æc hiÖu cña kü thuËt PCR ®a måi E. coli Tæng sè PCR G©y tiªu ch¶y (n = 99) Kh«ng g©y tiªu ch¶y (n = 139) (n = 238) D−¬ng tÝnh 99 0 99 ¢m tÝnh 0 139 139 Sè E. coli g©y tiªu ch¶y d−¬ng tÝnh víi PCR ®a måi §é nh¹y = = 99 / 99 = 100% Tæng sè E. coli g©y tiªu ch¶y Sè E. coli kh«ng g©y tiªu ch¶y ©m tÝnh víi PCR ®a måi §é ®Æc hiÖu = = 139 /139 = 100% Tæng sè E. coli kh«ng g©y tiªu ch¶y B¶ng 3. Ph©n bè c¸c E. coli g©y tiªu ch¶y ph©n lËp ®−îc tõ ph©n ETEC EHEC EPEC EIEC EAEC n = 310 Sè chñng 2 0 24 6 58 90 % 0,65 0 7,74 1,94 18,71 29,04 B¶ng 3 cho thÊy, kho¶ng 30% sè c¸c bÖnh phÈm ph©n tiªu ch¶y cã E. coli thuéc mét trong 5 lo¹i E. coli g©y tiªu ch¶y, trong ®ã chiÕm ®a sè lµ EAEC. 1636 1018 506, 517 396 344 298 220, 201 154, 134 1 2 3 4 5 6 7 KÕt qu¶ PCR mét sè chñng E. coli g©y tiªu ch¶y tõ ph©n 1. ADN marker 2. EIEC 3. EPEC 4. ETEC 5. EAEC 6. Chøng (+) EIEC 7. Chøng (-) E. coli kh«ng g©y tiªu ch¶y. KÝch cì (bp) 10
  6. TCNCYH 23 (3) 2003 B¶ng 4: So s¸nh E. coli g©y tiªu ch¶y x¸c ®Þnh b»ng PCR víi nu«i cÊy ph©n lËp (NCPL) tõ 310 mÉu ph©n ETEC EPEC EIEC EAEC Tæng PCR 2 24 6 58 90 NCPL 0 0 0 0 0 NÕu chØ dïng ph−¬ng ph¸p nu«i cÊy ph©n lËp ®¬n thuÇn, chóng ta kh«ng x¸c ®Þnh ®−îc c¸c chñng E. coli g©y tiªu ch¶y tõ ph©n. B¶ng 5. Mét sè tÝnh chÊt sinh vËt ho¸ häc chÝnh cña c¸c chñng E. coli g©y tiªu ch¶y so s¸nh víi c¸c chñng E. coli kh«ng g©y tiªu ch¶y H×nh thÓ Lªn men ®−êng Di Sinh Sinh Sinh Indole h¬i Gram Lac Glu Sor ®éng urease H2 S E. coli* TK (-) + + +/- +/- +/- - - + E. coli** TK (-) + + +/- +/- +/- - - + *, E. coli g©y tiªu ch¶y ; **, E. coli b×nh th−êng trong ®¹i trµng. dïng 2 cÆp måi LTI vµ STII trong 1 ph¶n øng ®Ó Qua b¶ng 5 chóng ta thÊy kh«ng thÓ ph©n chÈn ®o¸n ETEC víi ®é nh¹y 100%. James B biÖt c¸c E. coli g©y tiªu ch¶y víi c¸c E. coli vµ céng sù sö dông 4 cÆp måi trong mét ph¶n thuéc thµnh phÇn khuÈn chÝ b×nh th−êng b»ng øng kÕt qu¶ ®é nhËy 98,9%. Akioabe ®· phèi c¸c tÝnh chÊt sinh vËt ho¸ häc th«ng th−êng. hîp 5 cÆp måi trong mét ph¶n øng vµ kÕt qu¶ iv. Bµn luËn cho thÊy ®é nhËy 100%... [2, 8] KÕt qu¶ nghiªn cøu cña chóng t«i sö dông 8 cÆp måi trong 1 Cho ®Õn nay, vÉn ch−a cã dÊu Ên ®Æc tr−ng ph¶n øng PCR cã ®é nhËy vµ ®é ®Æc hiÖu gÇn nµo dùa trªn tÝnh chÊt sinh vËt ho¸ häc còng 100%. Qua nghiªn cøu, chóng t«i thÊy PCR ®a nh− kh¸ng nguyªn cã thÓ dïng ®Ó ph©n biÖt måi dùa trªn sù phèi hîp 8 cÆp måi ®¶m b¶o c¸c chñng E. coli g©y bÖnh víi c¸c chñng E. ®−îc ®é tin cËy vÒ ®é nh¹y vµ ®é ®Æc hiÖu coli thuéc vi hÖ b×nh th−êng trong ®¹i trµng. trong chÈn ®o¸n 5 lo¹i E. coli g©y tiªu ch¶y. Nghiªn cøu cña c¸c t¸c gi¶ trªn thÕ giíi ®Òu cã chung mét nh©n xÐt r»ng PCR lµ ph−¬ng ph¸p Ngoµi ra, sö dông 8 cÆp måi trong mét ph¶n ®¬n gi¶n, dÔ thùc hiÖn vµ cã ®é nhËy cao h¬n øng gióp tiÕt kiÖm vÒ thêi gian vµ nguyªn vËt h¼n c¸c ph−¬ng ph¸p kh¸c. §é nhËy vµ ®é ®Æc liÖu gÊp 5 lÇn so víi dïng riªng rÏ tõng cÆp hiÖu cña ph−¬ng ph¸p nµy ®¹t tíi 90-100% [2]. måi. Thªm n÷a, khi gi¶m sè lÇn tiÕn hµnh c¸c PCR gióp chÈn ®o¸n mét c¸ch nhanh chãng c¸c ph¶n øng PCR chóng ta sÏ lµm gi¶m sù nhiÔm t¸c nh©n g©y bÖnh trªn l©m sµng. §èi víi chÈn cña ph¶n øng nµy. Mét vÊn ®Ò ®¸ng lo ng¹i cña ®o¸n E. coli g©y tiªu ch¶y tõ bÖnh phÈm ph©n, kü thuËt PCR. lóc ®Çu c¸c t¸c gi¶ dïng tõng cÆp måi riªng rÏ Khi tiÕn hµnh kü thuËt PCR ®a måi trªn c¸c ®Ó ph¸t hiÖn tõng gien ®Ých. VÒ sau, nhiÒu cÆp bÖnh phÈm ph©n ë trÎ em d−íi 5 tuæi bÞ tiªu måi ®· ®−îc phèi hîp ®Ó chÈn ®o¸n mét hoÆc ch¶y, chóng t«i ®· ph©n lËp ®−îc 90 chñng E. nhiÒu loµi E. coli g©y tiªu ch¶y. Jan Olsvik vµ coli g©y bÖnh chiÕm 29,04% tæng sè c¸c bÖnh Sandrinsa Tacyphipps ®· thµnh c«ng trong viÖc phÈm. Trong ®ã, EAEC lµ 58 chñng chiÕm 11
  7. TCNCYH 23 (3) 2003 18,71%. §iÒu ®¸ng nãi ë ®©y lµ, chóng t«i ®· Tµi liÖu tham kh¶o ph¸t hiÖn vµ ph©n lËp ®−îc 4 lo¹i E. coli g©y tiªu ch¶y víi c¸c tû lÖ kh¸c nhau. NhiÒu nhÊt lµ 1. Hoµng Thu Thñy.: Gãp phÇn nghiªn cøu EAEC (18,71%) vµ Ýt nhÊt lµ ETEC (0,65%). c¸c chñng Escherichia coli g©y tiªu ch¶y cÊp ë So víi mét sè t¸c gi¶ kh¸c, nh− t¹i Ên §é tû lÖ trÎ em t¹i Hµ Néi, LuËn ¸n Phã tiÕn sü y häc, E. coli g©y tiªu ch¶y chiÕm 29,5%, Th¸i Lan ViÖn vÖ sinh dÞch tÔ. 1988. 21% th× tû lÖ ph©n lËp E. coli g©y tiªu ch¶y cña 2. Akio Abe, Hiromi Obata, Shigeru chóng t«i còng gièng nh− nhiÒu t¸c gi¶ kh¸c [6, Matsushita, Sumio Yamada, Yasuo Kudoh.: A 7]. Tuy nhiªn, sù ph©n bè c¸c loµi E. coli g©y sensitive method for the detection of tiªu ch¶y trong nghiªn cøu cña chóng t«i cã enterotoxigenic Escherichia coli by the kh¸c so víi mét sè t¸c gi¶. §iÒu nµy còng polimerase chain reaction using multiple t−¬ng tù nh− nhiÒu nghiªn cøu trªn thÕ giíi v× primer pairs, Zbl, Bakt. 1992, Vol 277: 170- tû lÖ c¸c vi khuÈn nµy phô thuéc vµo tõng vïng 178. ®Þa lý kh¸c nhau. 3. Bardhan PK, Albert MJ, Alam NH.: Khi so s¸nh c¸c tÝnh chÊt sinh vËt ho¸ häc Small bowel and fecal microbiology in children chÝnh cña c¸c chñng E. coli g©y tiªu ch¶y víi suffering from persistent diarrhea in c¸c chñng E. coli thuéc thµnh phÇn khuÈn chÝ Bangladesh, J. Pediatr Gastroenterol Nutr. b×nh th−êng, chóng t«i thÊy c¸c ®Æc ®iÓm nµy 1998, 26(1): 9-15. gièng nhau. §iÒu nµy cµng kh¼ng ®Þnh nh÷ng 4. James P. Nataro and James.B .Kaper.: nghiªn cøu tr−íc kia cña c¸c t¸c gi¶ cho r»ng, Diarrheagenic Escherichia coli, Clinical kh«ng thÓ ph©n biÖt c¸c E. coli g©y tiªu ch¶y Microbiol Revews. 1998, 4 :142-210. víi c¸c E. coli th−êng b»ng c¸c tÝnh chÊt sinh vËt ho¸ häc vµ c¸c ®Æc ®iÓm vÒ h×nh thÓ còng 5. Jan Holmgren and Ann- Mari nh− b¾t mµu Gram, ®©y lµ ph−¬ng ph¸p dïng Svennerholm.: Bacterial enteric infection and phæ biÕn hiÖn nay t¹i c¸c khoa vi sinh cña c¸c vaccine development, Gastroenterology Clinics bÖnh viÖn. Nh− vËy, kü thuËt PCR lµ mét of North America. 1992, 21(2): 283-302. ph−¬ng tiÖn chÈn ®o¸n rÊt cã hiÖu qu¶ c¸c lo¹i 6. Kamlakar U.P. Pathak. : E. coli nµy. Enteropathogenic Escherichia coli diarrhea in V. KÕt luËn children and in young adults, India J. pathol. PCR ®a måi ®· ®−îc ph¸t triÓn thµnh c«ng Microbiol. 1995, Vol 38(2): 153-8. trong chÈn ®o¸n E. coli g©y tiªu ch¶y. 7. Leutin B, K.Gleier, Peter Echeverria.: §é nh¹y vµ ®é ®Æc hiÖu ®¹t gÇn 100%. Origin and characteristics of enteroinvasive strain of Escherichia coli (EIEC) isolated in Sö dông kü thuËt PCR ®a måi trong chÈn Germany, Epidemiol. Infect. 1997, 118: 199- ®o¸n E. coli g©y tiªu ch¶y gióp tr¸nh l©y 205. nhiÔm, tiÕt kiÖm thêi gian, nguyªn vËt liÖu gÊp 5 lÇn so víi dïng PCR ®¬n måi. 8. Okeke IN, Lamikaran A, Steinruck H, Kaper JB.: Characterization of Escherichia coli Kü thuËt PCR ®a måi ®· ®−îc øng dông from cases of childhood diarrhea in provincial thµnh c«ng trong chÈn ®o¸n E. coli g©y tiªu Southwestern Nigeria, J. Clin. Microbiol. 2000, ch¶y trong ph©n. Vol 38(1) : 7-12. 12
  8. TCNCYH 23 (3) 2003 Summary Development and application of multiplex PCR to diagnose diarrheogenic EScherichia coli from feces A multiplex PCR has been developed successfully for the first time by combining 8 pairs of primers to diagnose 5 different types of diarrheogenic Escherichia coli (ETEC, EHEC, EIEC, EPEC, EAEC) from fecal samples of children under 5 years old. The advantages of this technique are that it allows to diagnose these pathogens with its sensitivity and specificity nearly 100%. In addition, it can save reagents 5 times less than separate PCRs. 310 fecal samples from children with diarrhea under 5 years old at 3 hospitals in Hanoi were analysed by the multiplex PCR. EAEC (18.7%) was the most common causal agent, followed by EPEC (7.74%), EIEC (1.94%) and ETEC (0.65%). The results suggest that a promissing application of multiplex PCR will be used to diagnose diarrheogenic E. coli. 13
ADSENSE

CÓ THỂ BẠN MUỐN DOWNLOAD

LV.11: Bộ Luận Văn Tốt Nghiệp Chuyên Ngành Tài Chính Ngân Hàng
172 tài liệu
837 lượt tải
THÔNG TIN
TRỢ GIÚP
HỖ TRỢ KHÁCH HÀNG
Theo dõi chúng tôi

Chịu trách nhiệm nội dung:

Nguyễn Công Hà - Giám đốc Công ty TNHH TÀI LIỆU TRỰC TUYẾN VI NA

LIÊN HỆ

Địa chỉ: P402, 54A Nơ Trang Long, Phường 14, Q.Bình Thạnh, TP.HCM

Hotline: 093 303 0098

Email: support@tailieu.vn

Giấy phép Mạng Xã Hội số: 670/GP-BTTTT cấp ngày 30/11/2015 Copyright © 2022-2032 TaiLieu.VN. All rights reserved.

 

Đồng bộ tài khoản
2=>2